高纯度脐带血干细胞的分离方法和试剂盒与流程

文档序号:12248687阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种脐带血干细胞的分离方法,其包括下列步骤:

稀释步骤:将脐带血样品与细胞稀释液混合;

沉淀步骤:加入沉淀剂,并静置沉降以得到含有干细胞的上层细胞液,将所述含有干细胞的上层细胞液离心浓缩,得到细胞沉淀;

分层步骤:将所述细胞沉淀铺在细胞分层液上离心,得到中间云雾状有核细胞;

纯化步骤:将所述有核细胞铺在细胞纯化液上离心,得到两条细胞带,取下方细胞带中的细胞即为纯化的干细胞;其中,

所述细胞稀释液为PBS液或0.8-1.0重量%氯化钠水溶液,

所述细胞沉淀剂为4-10重量%的羟乙基淀粉水溶液,

所述细胞分层液为由聚蔗糖和/或泛影葡胺配制成的密度为1.074-1.076g/ml的水溶液,

所述细胞纯化液为由聚蔗糖配制成的密度为1.090-1.095g/ml的水溶液。

2.根据权利要求1所述的分离方法,其中所述细胞分层液中聚蔗糖和泛影葡胺的质量比为0.8:1。

3.根据权利要求1或2所述的分离方法,其中所述细胞分层液和/或细胞纯化液包含腺嘌呤。

4.根据权利要求3所述的分离方法,其中所述腺嘌呤的含量为所述细胞分层液或所述细胞纯化液的0.5-2重量%。

5.根据权利要求1或2所述的分离方法,其中所述脐带血样品与所述细胞稀释液的体积比为0.8:1-1.2:1。

6.根据权利要求1或2所述的分离方法,其中所述沉淀步骤中的离心浓缩的转速为2000-3000转/分,离心时间为3-20分钟。

7.根据权利要求1或2所述的分离方法,其中所述分层步骤中的离心浓缩的转速为1800-2200转/分,离心时间为15-25分钟。

8.根据权利要求1或2所述的分离方法,其中所述纯化步骤中的离心转速为1500-2000转/分,离心时间为30-40分钟。

9.一种脐带血干细胞的分离试剂盒,其包括:

细胞稀释液、沉淀剂、细胞分层液和细胞纯化液;其中,

所述细胞稀释液为PBS液或0.8-1.0重量%氯化钠水溶液,

所述细胞沉淀剂为4-10重量%的羟乙基淀粉水溶液,

所述细胞分层液为由聚蔗糖和/或泛影葡胺配制成的密度为1.074-1.076g/ml的水溶液,

所述细胞纯化液为由聚蔗糖配制成的密度为1.090-1.095g/ml的水溶液。

10.根据权利要求9所述的分离试剂盒,其中所述细胞分层液和/或细胞纯化液包含腺嘌呤。

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