本发明涉及药物与化工领域，更具体地，涉及一种天然产物selaginpulvilin的衍生物及其制备方法和应用。
背景技术：
环核苷酸磷酸二酯酶(Cyclic nucleotide phosphodiesterases,PDEs)是一类重要的超级酶家族，通过对环磷酸腺苷(Cyclic Adenosine monophosphate,Camp)和cGMP的水解，有效控制细胞内的cAMP和环磷酸鸟苷(cyclic guanosine monophosphate,cGMP)浓度，从而调节体内第二信使所传导的生化作用。PDEs在哺乳动物组织中分布广泛，其多样性致使不同的PDE酶在细胞和亚细胞水平有着特定的分布，可选择性调节多种细胞功能，是良好的药物设计与治疗靶点。
磷酸二酯酶IV(PDE4)作为特异性催化水解cAMP的PDE家族酶，在人体内主要分布于炎症细胞内。在炎症反应中，cAMP对细胞因子的释放等生理过程起着关键的负调节作用，因此通过抑制PDE4提高细胞内cAMP浓度将有助于减轻炎症反应对机体的伤害。目前，PDE4抑制剂已被开发成抗炎的药物，如罗氟司特(Roflumilast)等，临床上主要用于治疗肺部的炎症，尤其是针对于哮喘和慢性阻塞性肺病的治疗上。但服用此类药物会引起腹泻、恶心等不良反应，因此如何克服这些PDE4抑制剂存在的不良反应，研究新型的特异性抑制剂就成为研究的热点之一。天然产物是寻找具有新型PDE4抑制剂的重要来源之一，对于开发新一代疗效强、副作用小的PDE4抑制剂具有重要的意义。
前期我们从中药垫状卷柏(Selaginella pulvinata)中获得6个具有显著PDE4抑制活性的9,9-二苯基-1-苯乙炔-9H-芴新骨架分子，其IC50值在0.011-0.26μM之间，强于阳性对照药rolipram(IC50＝0.54μM)。一类新骨架活性天然化合物的发现，可能意味着一个新的治疗药物的出现。因此，本发明在前期研究基础上，首次对9,9-二苯基-1-苯乙炔-9H-芴新骨架分子进行了全合成，获得的一系列衍生物具有显著的PDE4抑制作用。
技术实现要素：
本发明的目的是为了提供一种新的具有抗炎活性的天然产物selaginpulvilin的衍生物。
本发明的另一目的在于提供上述天然产物selaginpulvilin的衍生物的制备方法。
本发明的再一目的在于提供上述天然产物selaginpulvilin的衍生物作为制备抗炎药物中的应用。
本发明提供了一种天然产物selaginpulvilin的衍生物的制备方法，所述天然产物selaginpulvilin的衍生物的结构式如式(I)或式(II)所示，
其中，R1为烷基、醛基、羧基、醇基、羟基、酰基或氢；R2为氢或羟基；R3为烷氧基、酰基或羟基；R4为卤素、芳乙炔基、苯基或取代苯基、芳乙烯基；R5为氢、羟基、苯基或取代苯基；R6为氢、苯基或取代苯基；取代基选自烷氧基、酰基或羟基；
所述制备方法具体包括如下步骤：
S1.式(III)所示的溴苯甲酸类化合物与碘乙酸反应，得到结构式如式(IV)所示的化合物；
S2.将步骤S1所得如结构式(IV)所示的化合物依次与碘甲烷、苯硼酸类化合物反应得到结构式如式(V)所示的化合物；其中，X为溴或氢；
S3.将步骤S2得到的结构式如式(V)所示的化合物与甲磺酸进行反应，得到结构式如式(VI)所示的化合物；其中，X为溴或氢；
S4.当X为溴时，将结构式如式(VI)所示的化合物与芳乙炔类化合物反应，得到结构式如式(VII)所示的化合物；
S5.将步骤S4得到的结构式如式(VII)所示的化合物与格氏试剂溴化镁类化合物进行反应后，得到结构式如式(VIII)所示的化合物；
S6.将步骤S5得到的结构式如式(VIII)所示的化合物与苯甲醚类化合物进行反应后，得到结构式如式(I)所示的化合物；
S7.将步骤S6得到的结构式如式(I)所示的化合物经过脱烷基、溴代酰化反应后，再与磷酸二氢钠和亚氯酸钠反应，最后与碳酸银反应，得到结构式如式(II)所示的化合物。
优选地，R1为氢、羧基、醛基、羟基、羟甲基、C1～5烷基、二甲氧基甲烷基、乙酰基、甲氧基或乙氧基；R2为氢或羟基；R3为甲氧基、羟基、乙酰基；R4为卤素、对甲氧基苯乙炔基、对羟基苯乙炔基、对乙酰基苯乙炔基、4-羟基苯基、(Z)-1-溴-2-(对羟基苯基)乙烯基、；R5为氢、羟基、4-羟基苯基、对甲氧基苯基或对乙酰基苯基；R6为氢、4-羟基苯基、对甲氧基苯基或对乙酰基苯基。
优选地，S1步骤中反应温度为80～120℃，反应时间为20～30h。
优选地，S3步骤中反应温度为60～70℃，反应时间为5～7h。
本发明首次通过人工合成得到上述衍生物，相比较于从植物中进行提取，更加快捷高效。
本发明还提供一种天然产物selaginpulvilin的衍生物，所述天然产物
selaginpulvilin的衍生物的结构式如式(I)或式(II)所示，
其中，R1为烷基、醛基、羧基、醇基、羟基、酰基或氢；R2为氢或羟基；R3为烷氧基、酰基或羟基；R4为卤素、芳乙炔基、苯基或取代苯基、芳乙烯基；R5为氢、羟基、苯基或取代苯基；R6为氢、苯基或取代苯基；取代基选自烷氧基、酰基或羟基。
优选地，R1为氢、羧基、醛基、羟基、羟甲基、C1～5烷基、二甲氧基甲烷基、乙酰基、甲氧基或乙氧基；R2为氢或羟基；R3为甲氧基、羟基、乙酰基；R4为卤素、对甲氧基苯乙炔基、对羟基苯乙炔基、对乙酰基苯乙炔基、4-羟基苯基、(Z)-1-溴-2-(对羟基苯基)乙烯基、；R5为氢、羟基、4-羟基苯基、对甲氧基苯基或对乙酰基苯基；R6为氢、4-羟基苯基、对甲氧基苯基或对乙酰基苯基。
更优选地，当R2为氢时，R1不同时为氢、甲基、醛基或羟甲基；
当R6为4-羟基苯基时，R1不同时为甲基或羟甲基。
本发明提供的更具体的selaginpulvilin衍生物如图1所示：
更具体地，提供一种天然产物selaginpulvilin衍生物的应用。本发明提供的天然产物selaginpulvilin衍生物是一类PDE4型抑制剂，对于开发新一代疗效强、副作用小的PDE4抑制剂具有重要的意义。
为了更好地理解本发明，以下对本发明方案结合反应式作进一步的阐释，所列的反应式仅为理论推导所得，其不能作为本发明保护范围的限制。以HC-1-HC-6的合成为例，本发明的具体合成过程，如下所示：
具体步骤如下：
2-溴-3-甲基-苯甲酸(化合物1)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中，加入等量的碘、二醋酸碘苯，催化量的醋酸钯，氮气保护下100℃搅拌24h，萃取后过柱纯化得到化合物2，产率86％。化合物2溶解在丙酮中，加入过量的碘甲烷和碳酸钾，60℃度加热回流3h，冷却到室温后减压浓缩，加入等量的4-甲氧基苯硼酸、过量的碳酸钾、催化量的四(三苯基膦)钯，DMF和水为溶剂，氮气保护下100℃搅拌过夜得到化合物3，产率67％。化合物3在甲磺酸中回流6h，萃取得到化合物4，产率92％。化合物4，1.2当量4-甲氧基苯乙炔，和催化量的四(三苯基膦)钯、三苯基膦、碘化亚铜，在氮气保护下加入DMF和Et3N，120℃搅拌过夜，冷却至室温后，乙酸乙酯萃取并过柱纯化得到化合物5，产率85％。化合物5溶于无水四氢呋喃(THF),置于冰浴中，氮气保护下加入4-甲氧基苯基溴化镁，逐渐恢复到室温后搅拌过夜，萃取后过柱纯化得到化合物6，产率88％。化合物6溶于二氯甲烷(DCM),加入过量的苯甲醚和等量的甲磺酸，室温下反应1h，萃取后得到化合物HC-11，产率63％。化合物HC-11溶于无水DCM，置于冰浴中，氮气保护下逐滴加入过量的BBr3，逐渐恢复到室温后再搅拌2h，萃取后过柱纯化得到HC-3，产率65％。
HC-3溶于吡啶中，加入过量醋酸酐，室温下搅拌过夜，萃取后得到化合物HC-12,产率68％。HC-12溶于无水CCl4中，氮气保护下加入过量的NBS,AIBN，80℃回流12h，过滤，滤液加压浓缩后加入过量的氢氧化钾，1,4-二氧六环/水(1：1)为溶剂，室温下反应1h，得到HC-1(59％)和HC-2(30％)。HC-2溶于二甲基亚砜(DMSO),加入过量的亚氯酸钠和磷酸二氢钠，室温下搅拌过夜，萃取后得到HC-6，产率81％。HC-6在浓盐酸中回流，得到HC-4(61％)。HC-6与催化量的碳酸银溶于DMSO中，120℃反应过夜，萃取后得到HC-5(85％)。
与现有的技术相比，本发明具有以下的有益效果：
本发明提供的化合物对PDE4具有显著的抑制作用，在制备新型的抗炎药物方面具有良好的应用前景。本发明所公开的天然产物selaginpulvilin的衍生物的制备方法，为首次全合成，与已有的从植物中提取该类化合物相比，更加快捷高效。
附图说明
图1为本发明提供的天然产物selaginpulvilin的衍生物结构式图。
具体实施方式
以下结合具体实施例和附图对本发明作进一步说明，但具体实施例并不对本发明作任何限定。
实施例1：
2-溴-3-甲基苯甲酸(21.3mmol)，醋酸钯(0.24g,1.06mmol),二醋酸碘苯(6.86g,21.3mmol)和碘(5.42g,21.3mmol)置于250mL圆底烧瓶中。加入DMF(50mL)溶解，100℃反应24-36h。冷却至室温后加入500mL乙酸乙酯，用0.5N盐酸洗涤三次出去DMF。有机层减压浓缩，过柱纯化(石油醚/二氯甲烷)得到化合物2。
实施例2：
将化合物2(20.0mmol)溶于丙酮(50.0mL)，在室温下先后加入K2CO3(5.52g,40.0mmol)和MeI(1.9mL,30.0mmol)，回流3h。反应完成后加入水淬灭，用乙酸乙酯萃取三次。合并有机层并减压浓缩，得到酯化产物。
上述酯化产物(15.4mmol),4-甲氧基苯硼酸(2.34g,15.4mmol),Pd(PPh3)4(0.89g,0.77mmo),和K2CO3(6.37g,46.1mmol)置于双颈瓶中，氮气保护下加入DMF(50mL)和H2O(8mL)。100℃下搅拌过夜，冷却至室温后加入饱和氯化铵水溶液，用乙酸乙酯萃取三次。合并有机层，减压浓缩后过柱纯化(石油醚/二氯甲烷)得到化合物3。
实施例3：
将化合物3(13.3mmol)溶于MeSO3H(10mL)。65℃下搅拌过夜，反应完成后加入水(200mL)淬灭，用乙酸乙酯萃取三次。合并有机层，减压浓缩得到化合物4。
实施例4：
将化合物4(3.85mmol),4-甲氧基苯乙炔(0.55mL,4.24mmol),Pd(PPh3)4(220mg,0.19mmol),CuI(37mg,0.19mmol),PPh3(102mg,0.39mmol),DMF(5mL),Et3N(5mL)置于双颈瓶中，氮气保护下120℃回流14-24h，反应完成后冷却至室温，加入水稀释，用乙酸乙酯萃取三次，合并有机层，减压浓缩后正相硅胶柱纯化(石油醚/二氯甲烷)，得到化合物5。
实施例5：
将化合物5(6.75mmol)氮气保护下溶于无水THF(10mL)中，在冰浴下逐滴加入4-甲氧基苯基溴化镁(1.0M,13.5mL,13.5mmol)，滴加完后继续在冰浴中搅拌6-8h，直到反应完全(通过TLC检测)。加入水淬灭，用乙酸乙酯萃取三次，合并有机层，减压浓缩后正相硅胶柱纯化(石油醚/二氯甲烷)，得到化合物HC-21。
HC-21：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.46(d,J＝8.1Hz,1H),7.41(d,J＝7.8Hz,1H),7.35(d,J＝8.7Hz,2H),7.21(d,J＝7.8Hz,1H),7.15(d,J＝8.6Hz,2H),6.83(dd,J＝8.1,2.2Hz,1H),6.82-6.78(m,5H),3.77(s,3H),3.72(s,6H),2.45(s,3H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ160.2,159.8,158.7,151.9,150.6,138.8,138.4,135.6,132.9,131.2,130.2,126.6,120.8,119.4,118.7,115.0,114.8,114.0,113.6,110.0,99.5,83.8,55.5,55.4,55.3,20.4；ESIMS m/z 463.2[M+H]+.
实施例6：
将化合物HC-21(5.52mmol)和苯甲醚(0.72mL,6.62mmol)溶于DCM(10mL)中，搅拌下加入MeSO3H(0.36mL,5.52mmol),室温下反应1-2h，反应完全后加入水淬灭，分离出有机层后，水相用DCM萃取三次，合并有机层，减压浓缩后正相硅胶柱纯化(石油醚/二氯甲烷)，得到HC-11，其表征数据如下。
HC-11:1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.58(d,J＝8.3Hz,1H),7.53(d,J＝7.8Hz,1H),7.24(d,J＝8.9Hz,4H),7.21(d,J＝7.8Hz,1H).6.97(d,J＝8.8Hz,2H),6.85(dd,J＝8.3,2.2Hz,1H),6.81(d,J＝2.2Hz,1H),6.79(d,J＝8.8Hz,2H),6.71(d,J＝8.9Hz,4H),3.79(s,3H),3.72(s,3H),3.71(s,6H),2.46(s,3H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ160.0,159.6,158.3,155.6,152.3,139.0,138.4,135.1,132.6,132.4,130.4,128.9,121.1,120.3,118.8,116.0,114.0,113.3,113.1,111.3,100.6,86.5,65.1,55.6,55.4,55.3,21.1.
实施例7：
由化合物HC-11(3.08mmol)氮气保护下溶于无水CH2Cl2(10mL),冰浴下逐滴加入BBr3(1.0M,14.8mL,14.8mmol),搅拌1-4h，逐渐恢复至室温。反应完全后在冰浴下加入水淬灭，用乙酸乙酯萃取三次，合并有机层，减压浓缩后正相硅胶柱纯化(石油醚/乙酸乙酯)，得到HC-3。参照HC-3的相似合成，得到HC-4、HC-8、HC-9、HC-10。
HC-3:黄色油状物；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.55(dd,J＝8.2,1.4Hz,1H),7.54(dd,J＝7.6,1.3Hz,1H),7.21(d,J＝7.6Hz,1H),7.10(d,J＝7.1Hz,4H),6.86(d,J＝7.0Hz,2H),6.75(d,J＝8.2Hz,1H),6.72–6.65(m,3H),6.58(d,J＝7.1Hz,4H),2.43(s,3H).13C NMR(100MHz,CD3OD)δ159.0,158.7,157.3,156.8,153.6,140.0,139.1,135.5,133.6,132.5,131.4,129.5,122.3,121.2,119.3,116.4,115.8,115.5,115.1,113.4,102.1,86.8,66.1,21.0；ESIMS m/z 497.2[M+H]+.
HC-4:1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.65(d,J＝7.5Hz,1H),7.60(d,J＝8.2Hz,1H),7.28(t,J＝7.5Hz,1H),7.21(d,J＝7.5Hz,1H),7.10(d,J＝8.7Hz,4H),6.88(d,J＝8.6Hz,2H),6.78(dd,J＝8.2,2.0Hz,1H),6.72(d,J＝2.0Hz,1H),6.69(d,J＝8.6Hz,2H),6.60(d,J＝8.7Hz,4H)；ESIMS m/z 483.2[M+H]+.
HC-8:黄色油状物；UV(CH3OH)λmax(logε)209.0(7.25),272.0(6.92),317.5(6.97),359.5(6.88)nm；IR(KBr)νmax 3366,2209,1674,1608,1568,1510,1221cm-1；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.54(d,J＝8.0Hz,1H),7.68(d,J＝8.0Hz,1H),7.62(d,J＝8.0Hz,1H),6.78(dd,J＝8.0,2.0Hz,1H),6.71(d,J＝2.0Hz,1H),6.87(d,J＝8.4Hz,2H),6.70(d,J＝8.4Hz,2H),7.10(d,J＝8.8Hz,4H),6.59(d,J＝8.8Hz,4H),5.69(s,3H),3.40(s,6H)；13C NMR(100MHz,CD3OD)δ159.6,159.4,157.9,157.0,153.6,142.9,138.2,135.0,133.7,131.7,131.4,126.5,121.9,121.7,119.1,116.6,115.8,115.2,115.0,113.4,104.7,102.8,85.2,66.2,55.1；HRESIMS m/z579.1807[M+Na]+(calcd for C36H28O6Na+,579.1778).
HC-9:黄色油状物；UV(CH3OH)λmax(logε)206.5(7.63),288.5(7.44),297.5(7.44)nm；IR(KBr)νmax 3316,1696,1608,1511,1469,1232cm-1；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.07(d,J＝8.3Hz,1H),6.75(d,J＝8.3Hz,1H),7.95(d,J＝8.2Hz,1H),6.74(dd,J＝8.2,2.3Hz,1H),6.69(d,J＝2.3Hz,1H),6.83(d,J＝8.7Hz,2H),6.66(d,J＝8.7Hz,2H),7.11(d,J＝8.8Hz,4H),6.59(d,J＝8.8Hz,4H)；13C NMR(100MHz,CD3OD)δ113.4,132.3,115.6,155.4,128.8,132.1,125.5,115.1,157.9,113.1,156.5,66.4,154.3,88.5,94.7,133.4,116.4,159.0,115.9,131.4,115.1,156.8,135.6；HRESIMS m/z 497.1406[M-H]-(calcd for C33H21O5-,497.1394).
HC-10:黄色油状物；UV(CH3OH)λmax(logε)208.0(7.71),287.5(7.47),301(7.47)nm；IR(KBr)νmax 3325,2209,1697,1608,1590,1511,1453,1228cm-1；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ6.87(d,J＝8.2Hz,1H),7.50(d,J＝8.2Hz,1H),7.47(d,J＝8.2Hz,1H),6.73(dd,J＝8.2,2.4Hz,1H),6.68(d,J＝2.4Hz,1H),6.90(d,J＝8.2Hz,2H),6.69(d,J＝8.2Hz,2H),7.11(d,J＝8.8Hz,4H),6.59(d,J＝8.8Hz,4H)；13C NMR(100MHz,CD3OD)δ110.6,157.9,115.1,120.4,134.2,132.7,120.4,115.4,157.8,113.4,156.7,66.1,154.9,83.8,101.9,133.7,116.3,158.9,115.8,131.4,115.1,156.8,135.5；HRESIMS m/z 497.1413[M-H]-(calcd for C33H21O5-,497.1394).
实施例8：HC-12的合成
将实施例7中合成的HC-3(1.48g,3.0mmol)溶于吡啶(15mL)，加入醋酸酐(2.4mL,24.0mmol)。在室温下搅拌12h,待反应完全后加入水(10mL)淬灭。用CH2Cl2萃取三次，有机相合并后依次用水、5％HCl和饱和氯化钠溶液洗涤，Na2SO4干燥。减压浓缩有机相，正相硅胶柱纯化(石油醚/二氯甲烷＝2:1)，得到白色粉末HC-12，产率68％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.71(d,J＝8.2Hz,1H),7.64(d,J＝7.6Hz,1H),7.30(d,J＝8.7Hz,4H),7.29(d,J＝7.6Hz,1H),7.12(dd,J＝8.2,2.0Hz,1H),7.04–7.01(m,5H),6.91(d,J＝8.7Hz,4H),2.48(s,3H),2.30(s,3H),2.25(s,6H),2.25(s,3H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ169.5,169.5,169.4,153.9,151.9,150.6,149.5,140.6,139.5,137.8,137.1,132.5,130.2,129.5,122.0,121.4,120.9,120.9,120.9,120.2,120.0,119.1,100.5,87.1,65.5,21.3,21.1.
实施例9：HC-1，HC-2的合成
将实施例8中合成的HC-12(1.35g,2.0mmol),NBS(0.39g,2.2mmol),AIBN(0.03g,0.2mmol)置于双颈瓶中，氮气保护下加入无水CCl4(10mL)。混合液在80℃回流12h。反应完全，冷却至室温后加入CH2Cl2(100mL)稀释，依次用水、5％HCl和饱和氯化钠溶液洗涤，Na2SO4干燥。减压浓缩有机相，得到的溴化物未纯化，直接用于下步反应。
上述制备的溴化物和KOH(0.56g,10mmol)溶于1,4-dioxane/H2O(2:1,15mL)，40℃下搅拌1h.反应完全后加入乙酸乙酯稀释，依次用水和饱和氯化钠溶液洗涤，Na2SO4干燥。减压浓缩有机相，正相硅胶柱纯化(石油醚/乙酸乙酯＝2:1)，得到HC-1(0.60g,产率59％)，HC-2(0.31g,产率30％).
HC-1:淡黄色油状物,1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.67(d,J＝7.8Hz,1H),7.60(d,J＝8.2Hz,1H),7.49(d,J＝7.8Hz,1H),7.12(d,J＝8.6Hz,4H),6.89(d,J＝8.3Hz,2H),6.78(d,J＝8.2Hz,1H),6.72(s,1H),6.71(d,J＝8.3Hz,2H),6.60(d,J＝8.6Hz,4H),4.80(s,2H)；ESIMS m/z 513.2[M+H]+.
HC-2:黄色油状物,1H NMR(400MHz,CD3OD)δ10.45(s,1H),7.87(d,J＝8.0Hz,1H),7.70(d,J＝8.0Hz,1H),7.67(d,J＝8.3Hz,1H),7.15(d,J＝8.7Hz,4H),6.89(d,J＝8.5Hz,2H),6.82(dd,J＝8.3,2.1Hz,1H),6.77(d,J＝2.1Hz,1H),6.72(d,J＝8.5Hz,2H),6.64(d,J＝8.7Hz,4H)；ESIMS m/z 511.2[M+H]+.
实施例10：HC-6的合成
将实施例9中合成的HC-2(74mg,0.15mmol)和NaH2PO4(59mg,0.38mmol)溶于DMSO(1mL)和H2O(0.1mL)，在冰浴下缓慢加入NaClO2(41mg,0.45mmol)的水溶液(0.1mL)。室温下搅拌12h，反应完全后加入饱和碳酸钠水溶液淬灭，乙酸乙酯萃取。用0.5N HCl调节水相pH＝3，用乙酸乙酯萃取(50mL×3)，合并有机层，用水洗涤，Na2SO4干燥，减压浓缩得到HC-6(63mg,产率81％)。
UV(CH3OH)λmax(logε)207.0(7.78),301.0(7.52)nm；IR(KBr)νmax 3278,2925,2213,1697,1607,1511,1232cm-1；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.84(d,J＝7.9Hz,1H),7.69(d,J＝7.9Hz,1H),7.67(d,J＝8.3Hz,1H),6.80(dd,J＝8.3,2.2Hz,1H),6.72(d,J＝2.2Hz,1H),6.83(d,J＝8.7Hz,2H),6.67(d,J＝8.7Hz,2H),7.11(d,J＝8.8Hz,4H),6.59(d,J＝8.8Hz,4H)；13C NMR(100MHz,CD3OD)δ122.0,133.9,130.6,118.7,145.3,131.2,122.4,116.0,159.9,113.3,158.7,66.4,154.3,86.8,103.0,133.9,116.2,159.1,115.8,131.4,115.2,157.0,134.5,170.2；HRESIMS m/z 525.1346[M-H]-(calcd for C34H21O6-,525.1344).
实施例11：HC-4的合成
方法一：以2-溴苯甲酸为原料，依次按照实施例1～7的方法，可得到HC-4。数据见实施例7。
方法二：将实施例10中合成的HC-6(38mg,0.07mmol)溶于DMSO(1mL),逐滴加入浓盐酸(0.03mL)。反应液在100℃搅拌过夜。冷却至室温后加入水淬灭，乙酸乙酯萃取三次。有机相合并后用饱和氯化钠溶液洗涤，Na2SO4干燥。减压浓缩有机相，正相硅胶柱纯化(石油醚/乙酸乙酯＝2:1)，得到HC-4(20mg,产率61％)。
实施例12：HC-5的合成
将实施例10中合成的HC-6(21mg,0.04mmol)和Ag2CO3(1mg,0.004mmol)溶于DMSO(1mL)中，120℃下搅拌过夜，反应完全，待冷却至室温后加入饱和碳酸氢钠水溶液淬灭。乙酸乙酯萃取(20mL×3)，合并有机层，用饱和食盐水洗涤，Na2SO4干燥。减压浓缩有机相，得到HC-5(18mg,产率85％)。
UV(CH3OH)λmax(logε)208.0(6.94),225.0(6.83),320.0(6.88)nm；IR(KBr)νmax3333,1694,1609,1577,1511,1230cm-1；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.27(d,J＝8.2Hz,1H),7.86(d,J＝8.2Hz,1H),7.73(d,J＝8.3Hz,1H),6.83(dd,J＝8.3,2.2Hz,1H),6.87(d,J＝2.2Hz,1H),6.77(brs,1H),7.41(d,J＝8.8Hz,2H),6.81(d,J＝8.8Hz,2H),7.12(d,J＝8.8Hz,4H),6.70(d,J＝8.8Hz,4H)；13C NMR(100MHz,CD3OD)δ136.1,118.4,131.2,119.8,149.1,131.1,123.2,116.2,160.7,113.2,160.2,65.4,146.5,98.6,154.4,127.7,116.8,160.7,124.6,131.0,116.0,157.5,134.2,164.9；HRESIMS m/z 549.1306[M+Na]+(calcd for C34H22O6Na+,549.1309).
实施例13：HC-7的合成
以2-溴-3-甲基-5-甲氧基苯甲酸为原料，按照实施例1～7的方法，可得到HC-7。
黄色油状物；UV(CH3OH)λmax(logε)207.5(7.92),300.0(7.71)nm；IR(KBr)νmax3241,2211,1607,1510,1225,1174cm-1；1H(400MHz,CD3OD)δ6.94(s,1H),7.88(d,J＝8.2Hz,1H),6.77(dd,J＝8.2,2.1Hz,1H),6.61(d,J＝2.1Hz,1H),6.76(d,J＝8.7Hz,2H),6.60(d,J＝8.7Hz,2H),7.06(d,J＝8.6Hz,4H),6.52(d,J＝8.6Hz,4H),4.69(s,2H)；13C NMR(100MHz,CD3OD)δ111.3,143.5,114.4,154.2,127.9,131.9,125.2,115.1,157.8,113.1,156.8,66.4,155.8,85.6,100.1,133.3,116.5,159.4,115.6,131.4,115.1,156.8,135.5,63.5；HRESIMS m/z 551.1457[M+Na]+(calcd for C34H24O6Na+,551.1465).
实施例14：HC-13的合成
化合物HC-1(51mg,0.10mmol)溶于丙酮(1.0mL)，在室温下先后加入K2CO3(84mg,0.60mmol)和MeI(36μL,0.60mmol)，室温下搅拌过夜，加入水(10mL)淬灭，用乙酸乙酯萃取(5mL×3)。合并有机层并减压浓缩，正相硅胶柱纯化(石油醚:乙酸乙酯＝10:1)得到无色油状物HC-13(46mg,产率81％)。
HC-13：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.65(d,J＝7.8Hz,1H),7.64(d,J＝8.3Hz,1H),7.46(d,J＝7.8Hz,1H),7.26(d,J＝8.9Hz,4H),6.99(d,J＝8.8Hz,2H),6.89(dd,J＝8.3,2.3Hz,1H),6.85(d,J＝2.2Hz,1H),6.81(d,J＝8.8Hz,2H),6.74(d,J＝8.9Hz,4H),4.86(s,2H),3.80(s,3H),3.75(s,3H),3.73(s,6H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ160.4,159.9,158.3,155.8,152.5,141.2,140.4,134.8,132.7,131.9,130.3,127.3,120.8,119.5,119.2,115.2,114.1,113.5,113.2,111.1,101.1,84.9,65.1,64.5,55.6,55.5,55.3；ESIMS m/z 569.2[M+H]+.
实施例15：HC-14的合成
化合物HC-1(52mg,0.10mmol)溶于丙酮(1.0mL)，在室温下先后加入K2CO3(42mg,0.30mmol)和MeI(12μL,0.20mmol)，室温下搅拌3h，加入水(10mL)淬灭，用乙酸乙酯萃取(5mL×3)。合并有机层并减压浓缩，正相硅胶柱纯化(石油醚:乙酸乙酯＝4:1)得到淡黄色油状物HC-14(11mg,产率20％)。
HC-14：UV(CH3OH)λmax(logε)206.5(7.69),288.0(7.49),399.5(7.49)nm；IR(KBr)νmax 3387,2203,1605,1511,1248,833cm-1；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.73(d,J＝7.8Hz,1H),7.52(d,J＝7.8Hz,1H),7.69(d,J＝8.4Hz,1H),7.10(d,J＝8.9Hz,4H),6.97(d,J＝8.9Hz,2H),6.91(dd,J＝8.4,2.3Hz,1H),6.84(d,J＝8.9Hz,2H),6.80(d,J＝2.3Hz,1H),6.58(d,J＝8.9Hz,4H),4.81(s,2H),3.79(s,3H),3.72(s,3H)；13C NMR(100MHz,CD3OD)δ161.7,161.3,157.4,157.0,154.0,142.3,141.3,135.0,133.6,133.6,131.4,127.6,121.6,120.6,119.9,116.7,115.3,115.0,114.5,112.0,102.1,85.9,66.3,63.6,55.9；55.8；HRESIMS m/z 539.1859[M-H]-(calcd for C36H27O5-,539.1864).
实施例16：HC-15的合成
由实施例6得到的HC-11(1.70g,3.08mmol)氮气保护下溶于无水CH2Cl2(10mL),冰浴下逐滴加入BBr3(1.0M,18.5mL,18.5mmol),搅拌1-4h，逐渐恢复至室温。反应完全后在冰浴下加入水淬灭，用乙酸乙酯萃取三次，合并有机层，减压浓缩后正相硅胶柱纯化(石油醚/乙酸乙酯＝2:1～1:1)，得到HC-15(0.75g,产率50％)。
HC-15：黄色油状物,1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.70(d,J＝7.7Hz,1H),7.54(d,J＝8.2Hz,1H),7.34(d,J＝7.9Hz,1H),6.99(d,J＝8.8Hz,2H),6.95(d,J＝8.7Hz,2H),6.69(dd,J＝8.2,2.2Hz,1H),6.59(d,J＝8.8Hz,2H),6.51(d,J＝2.2Hz,1H),6.46(s,1H),6.25(d,J＝8.7Hz,2H),6.15(d,J＝8.8Hz,2H),6.09(d,J＝8.7Hz,2H),2.20(s,3H)；13C NMR(100MHz,CD3OD)δ159.1,158.5,157.9,156.9,156.6,149.1,141.8,138.0,137.3,135.8,135.6,133.4,132.6,131.4,131.2,130.9,130.4,128.7,121.1,120.7,115.6,115.3,114.1,112.9,66.6,19.4；ESIMS m/z 575.1and 577.1[M-H]-.
实施例17：HC-16的合成
以2-溴-5-甲基苯甲酸为原料，依次按照实施例2、3、5、6、7的方法可得到HC-16。
HC-16：IR(KBr)νmax 3325,1651,1610,1591,1509,1466,1230cm-1；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.48(d,J＝8.2Hz,1H),7.45(d,J＝7.6Hz,1H),7.06–7.00(m,2H),6.94(d,J＝8.8Hz,4H),6.75–6.70(m,2H),6.60(d,J＝8.8Hz,4H),2.23(s,3H)；13C NMR(100MHz,CD3OD)δ158.0,156.9,155.4,153.2,138.9,138.8,136.8,133.2,130.3,128.9,127.5,121.4,119.7,115.7,115.4,114.1,65.1,21.7；ESIMS m/z381.1[M+H]+.
实施例18：HC-17的合成
以2-溴-3-甲基苯甲酸为原料，依次按照实施例1、2、3、5、6、7的方法可得到HC-17。
HC-17：IR(KBr)νmax 3251,1611,1509,1451,1251cm-1；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.57(d,J＝7.5Hz,1H),7.52(d,J＝8.1Hz,1H),7.25(d,J＝7.5Hz,1H),7.09(d,J＝8.4Hz,4H),6.72(d,J＝8.1Hz,1H),6.66(s,1H),6.63(d,J＝8.4Hz,4H),2.33(s,3H)；13C NMR(100MHz,CD3OD)δ159.0,158.3,156.9,151.0,142.9,137.3,133.4,131.7,131.6,131.2,125.4,121.4,118.8,115.7,115.2,113.1,67.3,23.5；ESIMS m/z 459.1and 461.1[M+H]+.
实施例19：HC-18、HC-19的合成
以2-溴-3-甲基苯甲酸为原料，依次按照实施例1、2、3、5、6的方法可得到HC-17a，再按照实施例9的方法可得到HC-18a、HC-19a。
HC-18a:1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.34(s,1H),7.96(d,J＝7.9Hz,1H),7.73(d,J＝7.9Hz,1H),7.67(d,J＝8.4Hz,1H),7.25(d,J＝8.8Hz,4H),6.89(dd,J＝8.4,2.2Hz,1H),6.80(d,overlap,1H),6.78(d,J＝8.8Hz,4H),3.77(s,6H),3.74(s,3H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ192.1,161.8,158.6,158.3,150.0,149.2,132.1,132.0,130.5,130.0,126.9,122.2,118.6,114.3,113.3,110.8,66.2,55.6,55.3；ESIMS m/z515.1and 517.1[M+H]+.
HC-19a:1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.67(d,J＝7.7Hz,1H),7.62(d,J＝8.4Hz,1H),7.49(d,J＝7.7Hz,1H),7.29(d,J＝8.8Hz,4H),6.88(dd,J＝8.4,2.2Hz,1H),6.84(d,J＝2.2Hz,1H),6.79(d,J＝8.8Hz,4H),4.70(s,2H),3.75(s,6H),3.73(s,3H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ160.5,158.3,156.6,149.5,142.8,138.5,132.8,131.1,130.6,128.8,122.3,120.8,118.4,113.5,113.1,110.9,66.1,65.4,55.5,55.2；ESIMS m/z517.1and 519.1[M+H]+.
HC-18a、HC-19a分别按照实施例7的方法可得到HC-18、HC-19。
HC-18:白色固体；IR(KBr)νmax 3409,1667,1610,1586,1510,1434,1239cm-1；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ10.29(s,1H),7.90(d,J＝7.9Hz,1H),7.81(d,J＝7.9Hz,1H),7.69(d,J＝8.3Hz,1H),7.11(d,J＝8.8Hz,4H),6.80(dd,J＝8.3,2.2Hz,1H),6.71(d,J＝2.2Hz,1H),6.66(d,J＝8.8Hz,4H)；13C NMR(100MHz,CD3OD)δ193.2,161.1,160.3,157.3,151.5,151.1,133.0,132.4,131.6,131.3,130.0,123.4,119.3,116.6,115.5,113.1,67.3；ESIMS m/z 473.0and 475.0[M+H]+.
HC-19:白色固体；IR(KBr)νmax 3286,1610,1593,1510,1435,1351,1238cm-1；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.68(d,J＝7.7Hz,1H),7.57(d,J＝8.2Hz,1H),7.42(d,J＝7.7Hz,1H),7.09(d,J＝8.7Hz,4H),6.75(dd,J＝8.2,2.1Hz,1H),6.68(d,J＝2.1Hz,2H),6.63(d,J＝8.7Hz,4H),4.47(s,2H),3.39(s,3H)；13C NMR(100MHz,CD3OD)δ159.4,158.6,157.0,151.0,144.8,136.6,133.2,131.7,131.2,130.4,124.0,121.8,118.9,115.9,115.3,113.1,75.5,67.3,58.6；ESIMS m/z 489.1and 491.1[M+H]+.
实施例20：HC-22的合成
以2-溴-3-甲基苯甲酸为原料，依次按照实施例1、2、3、5的方法可得到HC-22a.
HC-22a(36mg,0.09mmol)溶于无水CH2Cl2(1.0mL)，在冰浴下依次加入三乙基硅烷(28μL,0.18mmol)和BF3·Et2O(22μL,0.18mmol)。0℃下搅拌1h，加入饱和碳酸钠水溶液(1mL)淬灭。分离有机层，水层用CH2Cl2萃取两次。合并有机层，用饱和食盐水洗涤，Na2SO4干燥，减压浓缩后用正相硅胶柱纯化(石油醚:二氯甲烷＝5:1)得到HC-22b(23mg,产率66％).IR(KBr)νmax 2957,2835,1607,1584,1508,1487,1244cm-1；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.59(d,J＝8.4Hz,1H),7.53(d,J＝7.6Hz,1H),7.25(d,J＝7.6Hz,1H),6.97(d,J＝8.6Hz,2H),6.87(dd,J＝8.4,2.2Hz,1H),6.78(d,J＝8.6Hz,2H),6.77(d,J＝2.2Hz,1H),4.98(s,1H),3.77(s,3H),3.76(s,3H),2.40(s,3H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ159.9,158.5,150.5,146.8,141.5,136.0,132.8,132.5,130.2,129.5,123.7,120.8,117.7,114.1,113.6,110.8,55.9,55.6,55.3,22.9；ESIMS m/z 395.1and 397.1[M+H]+.
HC-22b(20mg,0.05mmol)按照实施例7的方法反应，得到HC-22(14mg,产率76％).IR(KBr)νmax 3357,1611,1510,1483,1451,1242cm-1；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.54(d,overlap,2H),7.25(d,J＝7.6Hz,1H),6.81(d,J＝8.4Hz,2H),6.75(dd,J＝8.2,2.2Hz,1H),6.64(d,J＝8.5Hz,2H),6.64(d,J＝2.2Hz,1H)C,4.87(s,1H),2.36(s,2H)；13C NMR(100MHz,CD3OD)δ158.7,157.0,152.1,147.9,143.2,136.4,132.8,132.7,131.1,130.3,124.2,121.7,118.4,116.2,115.6,113.0,56.9,22.7；ESIMS m/z 367.0and 369.0[M+H]+.
实施例21：Selaginpulvilin衍生物抗炎活性(对PDE4酶的抑制作用)
待测分子与含有重组PDE4D2蛋白(详细制备方法可参考已发表且含有制备该重组蛋白的文献：Bioorganic&Medicinal Chemistry Letters，2012年，22卷，页码：3261–3264)，20mM Tris-HCl,pH 7.5,2mM二硫苏糖醇(dithiothreitol),10mM MgCl2以及20,000–30,000cpm的3H-cAMP在室温下孵育15分钟，然后分别用0.2M ZnSO4and Ba(OH)2中止反应，然后利用PerkinElmer 2910计数仪测量上清液中未反应的3H-cGMP，每个分子至少测量三次，对PDE4D2蛋白活性抑制的IC50值通过浓度测试及非线性回归，计算获得。
本发明化合物对PDE4的抑制活性测试数据如表1(IC50值为抑制率达到50％时的抑制剂浓度)。
表1.化合物HC-1-HC-30对PDE4酶的抑制作用(IC50,μM)
α阳性对照