1.一种与碱性磷酸酶反应产生化学发光的化合物的制备方法,其特征在于,它包括以下步骤:
(1)合成吖啶-9-硫酰氯:将吖啶-9-羧酸溶于三氯甲烷中,加入4-二甲氨基吡啶,缓慢滴加亚硫酰氯,并回流该反应混合物,减压除去溶剂得到黄色固体;
(2)合成9,10-二氢化吖啶-9-硫酰氯:将吖啶-9-硫酰氯悬浮于甲醇中,分别先后加入氯化铵和锌到该溶液中,回流反应该反应混合物,过滤该溶液并用甲醇洗涤该沉淀,蒸发干燥得到产物9,10-二氢化吖啶-9-硫酰氯;
(3)合成10-甲基-9,10-二氢化吖啶-9-硫酰氯:将9,10-二氢化吖啶-9-硫酰氯溶于甲苯溶液中,冰浴控温,加入碳酸二甲酯和碳酸铯,搅拌反应,升温至室温,搅拌反应,蒸发干燥除去溶剂,加入乙酸乙酯做萃取剂,减压除去萃取剂得到产物10-甲基-9,10-二氢化吖啶-9-硫酰氯;
(4)合成10-甲基-9,10-二氢化吖啶-9-硫代羧酸-3’-乙氧苯酯:将制备好的10-甲基-9,10-二氢化吖啶-9-硫酰氯溶于三氯甲烷中,分别加入3-乙氧基苯硫酚和4-二甲氨基吡啶,冰浴控温0~10℃,搅拌反应,然后撤去冰浴,室温再反应,干燥蒸发得到产物10-甲基-9,10-二氢化吖啶-9-硫代羧酸-3’-乙氧苯酯;
(5)合成9-(3’-乙氧苯基硫代磷酸氧亚甲基)-10-甲基-9,10-二氢化吖啶二(氰乙基)酯:将10-甲基-9,10-二氢化吖啶-9-硫代羧酸-3’-乙氧苯酯溶于四氢呋喃溶液中干冰浴维持-80℃条件下,滴加入2mol/L LDA(溶剂为四氢呋喃),搅拌反应后,加入三氯氧磷和4-二甲氨基吡啶,连续搅拌,撤去干冰浴自然升温并再继续搅拌,再用冰浴冷却该溶液并缓慢滴加3-羟基丙腈,加完后撤去冰浴室温搅拌,滤去沉淀并减压除去反应试剂,将残留物溶于乙酸乙酯,用氮气作为保护剂,滴加入2MOL/L氢氧化钾溶液,搅拌反应,抽滤所形成的沉淀并空气干燥,得到微黄色固态产物9-(3’-乙氧苯基硫代磷酸氧亚甲基)-10-甲基-9,10-二氢化吖啶二钾盐。
2.根据权利要求1所述的一种与碱性磷酸酶反应产生化学发光的化合物的制备方法,其特征在于,步骤(1)中吖啶-9-羧酸用量为1g~5g, 4-二甲氨基吡啶用量为0.2g~5g,亚硫酰氯用量为2~5mL,反应时间为6~12小时。
3.根据权利要求1所述的一种与碱性磷酸酶反应产生化学发光的化合物的制备方法,其特征在于,步骤(2)中吖啶-9-硫酰氯用量为0.5~2.0g,氯化铵用量为5~10g,锌用量为5~10g,回流反应时间为1~2小时。
4.根据权利要求1所述的一种与碱性磷酸酶反应产生化学发光的化合物的制备方法,其特征在于,步骤(3)中9,10-二氢化吖啶-9-硫酰氯用量为1g~5g,冰浴控温0~10℃,碳酸二甲酯用量为0.5~1g,碳酸铯用量为0.1~0.5g,搅拌反应时间为30~60分钟,升温至室温后,搅拌反应时间为1~2小时。
5.根据权利要求1所述的一种与碱性磷酸酶反应产生化学发光的化合物的制备方法,其特征在于,步骤(4)中10-甲基-9,10-二氢化吖啶-9-硫酰氯的用量为0.5~5g, 3-乙氧基苯硫酚的用量为1g~5g,4-二甲氨基吡啶的用量为0.5g~2g,冰浴控温0~10℃,搅拌反应30~60分钟,然后撤去冰浴,室温再反应1~2小时。
6.根据权利要求1所述的一种与碱性磷酸酶反应产生化学发光的化合物的制备方法,其特征在于,步骤(5)中的10-甲基-9,10-二氢化吖啶-9-硫代羧酸-3’-乙氧苯酯的用量为0.5~2.0g,搅拌反应时间为1~2小时,三氯氧磷的用量为0.1~1.0g, 4-二甲氨基吡啶的用量为1~2g,连续搅拌时间为1~2小时小时,撤去干冰浴自然升温并再继续搅拌时间为1~2小时, 3-羟基丙腈的用量为1~2mL,加完后撤去冰浴室温搅拌时间为6~12小时,2mol/L氢氧化钾溶液用量为0.5~1.0mL。