N‑取代‑5‑亚甲基‑吡咯‑2‑酮类化合物的合成方法及应用与流程

技术特征：

1.一种N-取代-5-亚甲基-吡咯-2-酮类化合物的合成方法，其特征在于所述N-取代-5-亚甲基-吡咯-2-酮类化合物的化学结构式为：

其中R为甘氨酰胺、荧光素、生物素、炔丙基、抗癌药物阿霉素或长链烷烃固相载体；

其合成方法，步骤如下：

1)将2，5-二甲氧基-2，5-二氢糠醇乙酸酯与0.1M的HCl水溶液按用量比1mmol:4mL混合，室温搅拌3h，用碳酸氢钠固体中和至中性，得到反应液；

2)在上述反应液中加入浓度为0.5M、pH为7.5的4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液至4-羟乙基哌嗪乙磺酸的终浓度50mM，得到混合液；

3)向上述混合液中加入含有伯氨基的化合物，混合液与含有伯氨基的化合物的用量比为5mL：0.5mmol，室温反应直至TLC板显示原料消失，旋干水溶液，粗产物用硅胶柱或反相HPLC分离纯化，制得N-取代-5-亚甲基吡咯-2-酮类化合物，所述含有伯氨基的化合物为甘氨酰胺、丙炔胺、生物素酰肼、阿霉素或氨基荧光素，含有伯氨基的化合物的化学结构式如式2所示，

4)向步骤2得到的混合液中加入长链烷烃氨基固相载体(LCCA-CPG)，混合液与长链烷烃氨基固相载体的用量比为5mL：100mg，在室温下震摇4h，离心除去上清液，沉淀用去离子水洗涤两次、乙酸乙酯一次，最后用乙醚洗涤，自然晾干后，制得N-(LCCA-CPG)-5-亚甲基吡咯-2-酮。

2.一种权利要求1所制备的N-取代-5-亚甲基吡咯-2-酮类化合物的应用，其特征在于：用于含巯基化合物、半光氨酸的可逆标记以及在固相载体表面的固定，方法如下：

1)将含巯基化合物与N-取代-5-亚甲基吡咯-2-酮类化合物加入pH 6.0的2-(N-吗啉代)-乙磺酸缓冲溶液中或pH 7.5的4-羟乙基哌嗪-乙磺酸缓冲液中，含巯基化合物与N-取代-5-亚甲基吡咯-2-酮类化合物用量的摩尔比为1:4-50，进行迈克尔加成反应生成5-取代-3-氢吡咯-2-酮，结构式如(3)所示：

2)将上述5-取代-3-氢吡咯-2-酮通过pH 9.5的硼酸钠缓冲溶液或者过量的巯基乙醇、谷胱甘肽处理，即可完整释放出被标记的半胱氨酸和巯基化合物。