1.人KRAS基因变异检测质控品的制备方法,包括以下步骤:
(1)选择KRAS基因变异阳性的、可稳定传代的人肿瘤细胞系,提取基因组并通过Sanger测序法测定每个细胞系中KRAS基因上的潜在变异位点,经Sanger测序法确认的杂合和纯合变异位点作为阳性对照位点;
(2)培养所选择的人肿瘤细胞系,将来自各个细胞系的基因组DNA片段化并按照一定比例混合,获得质控品。
2.根据权利要求1的制备方法,其中步骤(2)的“将来自各个细胞系的基因组DNA片段化并按照一定比例混合”是先提取各个细胞系的基因组DNA,分别片段化,然后将片段化的各个细胞系基因组DNA按照一定比例混合;或者是先提取各个细胞系的基因组DNA,将各个细胞系的基因组DNA按照一定比例混合,然后片段化;或者是先将各个细胞系的基因组DNA片段化,再提取各个细胞系的片段化基因组DNA,然后将各个细胞系的片段化基因组DNA按照一定比例混合。
3.根据权利要求1或2的制备方法,其中所选择的可稳定传代的人肿瘤细胞系是HOP-62、HCT-15、AGS、NCI-H1573、COR-L23、NCI-H1355及SW1417细胞系。
4.根据权利要求3的制备方法,其中步骤(2)中将由HOP-62、HCT-15、AGS、NCI-H1573、COR-L23、NCI-H1355及SW1417细胞系获得的片段化的或未片段化的基因组DNA按照1:1:1:1:1:1的质量比均匀混合。
5.由权利要求1-4任一项的制备方法获得的人KRAS基因变异检测质控品。
6.人KRAS基因变异检测试剂盒,其中包含权利要求5的质控品。
7.权利要求6的试剂盒,所述试剂盒进一步包含选自末端修复酶混合物、末端修复反应缓冲液、DNA连接酶、连接反应缓冲液、含分子标签的接头、文库扩增引物、PCR预混液、接头封闭剂、DNA封闭剂、杂交缓冲液、杂交增强剂、磁珠洗液、杂交洗液、捕获文库PCR引物、捕获探针、核酸纯化磁珠和链霉亲合素磁珠的一种或多种试剂。
8.权利要求6的试剂盒,所述试剂盒进一步包含末端修复酶混合物、末端修复反应缓冲液、DNA连接酶、连接反应缓冲液、含分子标签的接头、文库扩增引物、PCR预混液、接头封闭剂、DNA封闭剂、杂交缓冲液、杂交增强剂、磁珠洗液、杂交洗液、捕获文库PCR引物、捕获探针、核酸纯化磁珠和链霉亲合素磁珠。
9.权利要求5的质控品和权利要求6-8任一项的试剂盒在人KRAS基因变异的高通量测序检测的质量控制中的应用。
10.权利要求5的质控品和权利要求6-8任一项的试剂盒在人循环肿瘤DNA KRAS基因变异的高通量测序检测的质量控制中的应用。