本发明涉及富硒猴头菇开发领域，特别涉及一种富硒猴头菇的液体发酵方法。
背景技术：
猴头菇在菌类蔬菜里面，是比较少见的一种，也是一种名贵的食用菌，被列入八大山珍之一。猴头菇具有很好的使用功效，具有营养与药用的结合。古有“山中猴头，海味燕窝”之说。猴头与鱼翅、熊掌、燕窝并誉为四大名菜。猴头是深山老林中的一种大型肉质菌，喜欢生长在阔叶树干断面或树洞中。幼小时呈白色，成熟后则变成毛茸茸的黄棕色，从形色上看很像毛猴的脑袋，故而得名。猴头菇为齿菌科植物猴头的子实体。我国华北、东北、中南和四川、云南、甘肃、浙江等地均有分布，夏秋季采收。
猴头菇的营养成分很高，干品中每百克含蛋白质26.3克，是香菇的二倍。它含有氨基酸多达17种，其中人体所需的占8种。每百克猴头含脂肪4.2克，是名副其实的高蛋白、低脂肪食品，另外还富含各种维生素和无机盐。猴头菇有增进食欲，增强胃粘膜屏障机能，提高淋巴细胞转化率，提升白细胞等作用。故可以使人体提高对疾病的免疫能力。猴头菇还是良好的滋补食品，对神经衰弱、消化道溃疡有良好疗效。在抗癌药物筛选中，发现其对皮肤、肌肉癌肿有明显抗癌功效。
传统的猴头菇子实体人工培育需要待菌龄到3个月以上，子实体长成时取下，晒干或鲜用。现代研究表明人工发酵猴头菇菌丝体和猴头菇子实体成分相似、活性成分含量和药理作用已无显著性差异。人工发酵猴头菇菌丝体容易实现规模化并且生产周期短，生产成本低，可作为猴头菇子实体较好的替代品。
技术实现要素：
为解决上述现有技术存在的问题，本发明的目的在于提供一种富硒猴头菇的液体发酵方法
为达到上述目的，本发明的技术方案为：
一种富硒猴头菇的液体发酵方法，由如下步骤构成：
步骤一、猴头菇种子培养基制备：
将葛根粉10～15g/L、富硒酵母1～2g/L、葡萄糖20g/L，pH 5.0，KH2PO4 0.2～0.5g/L，MgSO40.75～1g/L；将液体种子培养基配制好，分装入三角瓶，1L/三角瓶装液量为400ml，125℃灭菌30min，冷却后接入猴头菇固体种子后，置入恒温震荡摇床，震荡培养温度24～26℃，培养时间7天，在此条件下得到猴头菌液体种子备用；
步骤二、猴头菇发酵阶段1
液体发酵培养基配方为：大豆水解蛋白10～15g/L、富硒酵母0.2～0.5g/L、葡萄糖20g/L，pH 5.0，KH2PO40.2～0.5g/L，MgSO40.75～1g/L；将培养基配制好，装入发酵罐子，125℃灭菌30min，冷却后接入猴头菇固体种子后，通气发酵，通气量1:1(V/V),培养温度24～26℃，培养时间48h后加入硒源，每升发酵液中加入50ml灭过菌的硒源；
步骤三、猴头菇发酵阶段2
在步骤二发酵液中无菌条件下加入硒源后，发酵罐继续通气发酵，培养温度24～26℃，培养时间48h；
步骤四、猴头菇发酵阶段3
将步骤三发酵结束后发酵液中继续无菌条件下加入硒源、硫酸镁、复合维生素B，每升发酵液中加入50ml灭过菌的硒源、0.5g硫酸镁和0.5g复合维生素B；搅拌均匀后，继续通气发酵，通气量1:1(V/V),培养温度24～26℃，培养时间48h；
步骤五、猴头菇发酵阶段4
发酵阶段3结束后，将发酵罐通气量降低为1:0.5(V/V)，培养温度设定为28℃，培养时间24h后出罐；
步骤六、离心、干燥
发酵液经离心后收集菌丝体，收集到的菌丝体置于65℃，热风循环烘箱干燥至菌丝体中水分质量份数小于5％，即可得到硒含量为0.5mg/kg的富硒猴头菇菌丝体。
进一步的，所述步骤一中，葛根粉为人工栽培葛根干燥后直接粉碎过100目筛的葛根粉。
进一步的，所述步骤一及步骤二中，富硒酵母含硒量为2000ppm。
进一步的，所述硒源的制备为：维生素C 5～10g、大豆水解蛋白20～50g、亚硒酸钠1～3g，纯净水1L,各原料混合后，静置8h以上，经超高压灭菌处理后即为硒源。
进一步的，所得富硒猴头菇中，硒含量为0.5mg/kg。
相对于现有技术，本发明的有益效果为：
本发明专利通过多阶段发酵条件的优化获得的一种富硒猴头菇菌丝体的发酵工艺，同时在发酵过程中加入硒源得到富硒猴头菇，营养价值更高，同时，工艺合理安全具有很好的商业前景。
附图说明
图1为本发明一种富硒猴头菇的液体发酵方法的原理图。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施方式对本发明技术方案做进一步详细描述：
如图1所示，
一种富硒猴头菇的液体发酵方法，由如下步骤构成：
1、猴头菇种子培养基制备：
种子培养基配方葛根粉(人工栽培葛根干燥后直接粉碎过100目筛)10～15g/L、富硒酵母(含硒量2000ppm)1～2g/L、葡萄糖20g/L，pH 5.0，KH2PO4 0.2～0.5g/L，MgSO40.75～1g/L。将液体种子培养基配制好，分装入三角瓶，1L/三角瓶装液量为400ml，125℃灭菌30min，冷却后接入猴头菇固体种子后，置入恒温震荡摇床，震荡培养温度24～26℃，培养时间7天，在此条件下得到猴头菌液体种子。
2、猴头菇发酵阶段1
液体发酵培养基配方大豆水解蛋白10～15g/L、富硒酵母(含硒量2000ppm)0.2～0.5g/L、葡萄糖20g/L，pH 5.0，KH2PO4 0.2～0.5g/L，MgSO40.75～1g/L。将培养基配制好，装入发酵罐子，125℃灭菌30min，冷却后接入猴头菇固体种子后，通气发酵，通气量1:1(V/V),培养温度24～26℃，培养时间48h后加入硒源，每升发酵液中加入50ml灭过菌的硒源。
硒源的制备：维生素C 5～10g、大豆水解蛋白20～50g、亚硒酸钠1～3g，纯净水1L,各原料混合后，静置8h以上，经超高压灭菌处理后即为硒源。
3、猴头菇发酵阶段2
步骤2发酵液中无菌条件下加入硒源后，发酵罐继续通气发酵，培养温度24～26℃，培养时间48h。
4、猴头菇发酵阶段3
步骤3发酵结束后发酵液中继续无菌条件下加入硒源、硫酸镁、复合维生素B，每升发酵液中加入50ml灭过菌的硒源、0.5g硫酸镁和0.5g复合维生素B。搅拌均匀后，继续通气发酵，通气量1:1(V/V),培养温度24～26℃，培养时间48h。
4、猴头菇发酵阶段4
发酵阶段3结束后，将发酵罐通气量降低为1:0.5(V/V)，培养温度设定为28℃，培养时间24h后出罐。
5、离心、干燥
发酵液经离心后收集菌丝体，收集到的菌丝体置于65℃，热风循环烘箱干燥至菌丝体中水分质量份数小于5％，即可得到硒含量为0.5mg/kg的富硒猴头菇菌丝体。
实验例：将本发明方法所得产品与传统方面产品进行含量分析：
注：传统发酵为在猴头菇的液体发酵培养基中直接添加一定量的亚硒酸钠(硒总量和本发明专利总硒元素的量相同)，发酵获得富硒猴头菇菌丝体。
一、产品中硒和锌元素的形态和含量分析
采用ContrAA 700高分辨-连续光源原子吸收光谱仪(H R-CS AAS)；XT-9900型智能微波消解仪对样品中硒和锌元素进行分析。
样品置于干燥的聚四氟乙烯微波消解罐中消解，同时以同样方法做空白对照。根据所测金属元素浓度的高低，用0.5％HNO3(V/V)溶液对其进行适当倍数的稀释，然后再用HR-CS FAAS进行测定。试验选择D101、XAD-2和LSA-10这3种大孔树脂分离可溶态中有机态和无
机态。
样品中硒和锌的含量及形态分析
由表中的实验结果可以看出，本发明专利的样品中锌和硒的含量均较传统发酵法菌丝体中含量较高，并且本发明专利样品中硒主要以有机态存在，也有利于人体吸收，对机体更加有益。
另，根据硫酸蒽酮法进行菌丝体中多糖的含量分析发现，本发明专利产品多糖含量27.68mg/kg较对照19.55mg/kg提高了41.58％。
综合以上研究结果发现，本发明专利技术，无论从产品的硒含量及形态分布，还是多糖的含量来看均较传统发酵有较大突破，具有一定的先进性。
以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何不经过创造性劳动想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应该以权利要求书所限定的保护范围为准。