去糖化的海参次级皂苷及其制备方法与流程

文档序号:11145622阅读:来源:国知局

技术特征:

1.去糖化的海参次级皂苷,其特征在于,所述该海参次级皂苷是海参皂苷Holothurin A和海参皂Echinoside A的糖链由于糖苷酶酶解脱去后两个糖基而得到的海参次级皂苷。

2.权利要求1所述去糖化的海参次级皂苷的制备方法,其特征在于,该制备方法包括以下步骤:

⑴、将干海参烘干并粉碎成粉末;

⑵、取上述干海参粉,乙醇浸提后,减压浓缩得到浸提膏,再冻干得到粗提物;

⑶、将上述粗提物水溶,再用水饱和正丁醇进行多次萃取;然后取上清液减压蒸发得到浸提膏,再水浴蒸干成粉末,得到粗皂苷粉;

⑷、利用大孔树脂柱层析法对上述得到的粗皂苷进行除杂富集,使用乙醇液进行洗脱,检测洗脱液,将含有皂苷的洗脱液减压浓缩,并水浴蒸干成粉末,即为总皂苷;

⑸、正相硅胶柱层析纯化上述得到的总皂苷,检测洗脱液,将含有皂苷的洗脱液减压浓缩,并水浴蒸干,得到富含HA和EA的总皂苷;

⑹、反相硅胶柱层析分离上述富含HA和EA的总皂苷,检测洗脱液,根据洗脱时间,得到两种组分,再分别将对应洗脱液减压浓缩,并水浴蒸干,即得到HA和EA;

⑺、将上述得到的HA和EA分别进行酶解,选用糖苷酶,温度为40-60℃,pH4-6,添加糖苷酶量根据反应物的量来添加,反应时间为3-7d,将反应液进行水饱和正丁醇萃取,将上层萃取液进行减压浓缩,水浴蒸干分别得到:去糖化的海参HA次级皂苷和去糖化的海参EA次级皂苷。

3.如权利要求2所述的制备方法,其特征在于,上述步骤⑶中水饱和正丁醇萃取皂苷5次,第一次萃取为粗皂苷水溶液:水饱和正丁醇是1:3(v/v)进行萃取,然后按粗皂苷水溶液:水饱和正丁醇是1:2(v/v)萃取两次,最后再按粗皂苷水溶液:水饱和正丁醇是1:1(v/v)萃取两次。

4.如权利要求2所述的制备方法,其特征在于,上述步骤⑷中乙醇洗脱具体为:大孔树脂用量与样品量的比例是30-80(ml):1(g),先用50%(v/v)的乙醇溶液洗脱,后用80%(v/v)乙醇溶液洗脱。

5.如权利要求2所述的制备方法,其特征在于,上述步骤⑸中正相硅胶柱层析的洗脱条件为:正相硅胶用量与样品量的比例是30-70(g):1(g),分别用9:1:0.1、8:1:0、7:1:0.1、7:2:0.2(v/v/v)比例的氯仿:甲醇:水进行洗脱,每个比例的洗脱液至少洗脱5个柱体积,再用7:2.5:0.2(v/v/v)比例的氯仿:甲醇:水洗脱至TLC能检测到皂苷,最后用7:3:0.3(v/v/v)比例的氯仿:甲醇:水梯度洗脱至TLC检测不再显色;TLC的条件为:展开剂氯仿:甲醇:水为7:3:0.3(v/v/v),再用10%-15%(v/v)硫酸乙醇溶液为显色剂,最后在110℃烘箱显色。

6.如权利要求2所述的制备方法,其特征在于,上述步骤⑹中反相硅胶柱层析的洗脱条件为:反相硅胶用量与样品量的比例是30-70(g):1(g),先用40%(v/v)的甲醇洗脱,再用60%(v/v)的甲醇溶液洗脱,洗脱液进行减压浓缩,用TLC法检测洗脱液,TLC具体条件为:展开剂70%(v/v)甲醇,10%-15%(v/v)硫酸乙醇溶液为显色剂,在110℃烘箱显色,洗脱液减压浓缩,并于60℃水浴蒸干得到HA和EA两种主要皂苷。

7.如权利要求2所述的制备方法,其特征在于,上述步骤⑺中,所述糖苷酶为果胶酶或复合纤维素酶。

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