本发明涉及新型铂(ⅳ)络合物以及将其作为有效成分的药物。
背景技术：
顺铂是具有广泛的抗癌谱和较强的抗肿瘤活性的铂(ⅱ)络合物，作为癌化学疗法中的多剂并用疗法的核心药剂，用于各种癌的治疗。但是，其副作用已知有肾功能障碍、恶心、呕吐，使用时需要对策。另外，在临床使用中，对顺铂具有耐性的细胞的出现成了问题。
作为在临床使用的其它铂(ⅱ)络合物，奥沙利铂用于大肠癌治疗等，但已知作为副作用发生末梢神经功能障碍等，在治疗方面成了问题。另一方面，认为重要的是奥沙利铂不显示与顺铂的交叉耐性，具有与顺铂不同的胺结构，即1,2-环己烷二胺(下面，有时简称为dach)结构的配体(参考非专利文献1)。
作为具有抗癌活性的铂络合物，铂(ⅱ)络合物之外已知铂(ⅳ)络合物。作为铂(ⅳ)络合物的特征可例举通过将轴位的配体转换成各种取代基来期待水溶性等物性的变化、使其与目标的标的分子结合来期待活性的提高等(参考非专利文献2)。
作为具有与奥沙利铂相同的dach结构的配体的铂(ⅳ)络合物，已知例如在轴位具有2个卤素原子的络合物(参考专利文献1)、在轴位具有卤素原子和羧酸酯的络合物(参考专利文献2)、在轴位具有卤素原子和取代烷氧基的络合物(参考专利文献3)、以及在轴位具有2个羧酸酯的络合物(参考专利文献4)等。
另外，非专利文献3和非专利文献4记载了在轴位具有卤素原子和羟基的铂(ⅳ)络合物。但是，没有记载同时具有dach结构的配体和乙二酸酯结构或卤素原子的离去基团的化合物。
迄今尝试着作为铂(ⅳ)络合物的沙铂、四铂、异丙铂等(参考非专利文献2)的临床试验，但是开发被中止，需要有效性高的新型铂(ⅳ)络合物。
现有技术文献
专利文献
专利文献1
国际公开第90/05734号
专利文献2
国际公开第96/26949号
专利文献3
法国专利发明第2954321号说明书
专利文献4
国际公开第2014/100417号
非专利文献
非专利文献1
肿瘤学评论：血液学(criticalreviewsinoncology:hematology)，2000，35，75－93
非专利文献2
化学评论(chemicalreviews)，2014，114,4470-4495
非专利文献3
无机化学(inorganicchemistry)，2014,53,9326-9335
非专利文献4
欧洲无机化学杂志(europeanjournalofinorganicchemistry)，2006,1168-1173
技术实现要素：
发明所要解决的技术问题
没有充分发挥药物所需的水溶性、稳定性以及抗肿瘤效果的铂(ⅳ)络合物，期待临床上可使用的新型铂(ⅳ)络合物。
解决技术问题所采用的技术方案
为了解决上述技术问题，本发明人进行认真研究，结果发现通过作为具有dach结构的配体的铂(ⅳ)络合物的轴向配体，选择卤素原子以及羟基，能够获得具有优异的抗肿瘤活性、化学方面稳定且溶解性优异的络合物，从而完成了本发明。
即，本发明涉及下述(1)～(4)。
(1)以下述通式(i)表示的铂(ⅳ)络合物
[化1]
[式中，x1和x2同时表示卤素原子、或者一起形成并表示选自乙二酸酯、丙二酸酯、丁二酸酯以及邻苯二甲酸酯的二羧酸酯，y表示卤素原子。]
(2)如前述(1)记载的铂(ⅳ)络合物，其中，x1和x2同时表示氯原子或溴原子、或者一起形成为乙二酸酯，y表示氯原子或溴原子。
(3)如前述(1)或(2)的铂(ⅳ)络合物，其中，1,2-环己烷二胺配体为(1r，2r)-环己烷二胺配体。
(4)药物，以前述(1)～(3)中的任一项所述的铂(ⅳ)络合物为有效成分。
发明效果
根据本发明，能够提供具有优异的抗肿瘤活性、化学方面稳定且具有水溶性的铂(ⅳ)络合物以及将其作为有效成分的药物。
附图说明
图1是表示作为实施例1的化合物以及比较例5的化合物在37℃的水溶液中的稳定性试验的试验例3的结果的图。
具体实施方式
下面，陈述本发明的详细情况。
在本发明中，卤素原子是氟原子、氯原子、溴原子或碘原子。x1和x2较好是同时为相同的卤素原子，其中，特好是同时为氯原子或溴原子。y较好是氯原子或溴原子。
本发明中作为离去基团的二羧酸酯没有特别限定，可例举具有2个羧基的(c1-c6)烷基或(c6-c10)芳基。其中，较好是如下表示的乙二酸酯、丙二酸酯、丁二酸酯以及邻苯二甲酸酯。
[化2]
作为本发明的铂(ⅳ)络合物特好的是，可例举以下述通式(ⅱ)或通式(ⅳ)表示的化合物。
[化3]
[式中，y表示卤素原子。]
作为本发明的铂(ⅳ)络合物的1,2-环己烷二胺配体的立体结构，从生理活性等方面考虑，较好是1r、2r的反式构型。
即，作为本发明的铂(ⅳ)络合物特好的是，以下述通式(ⅲ)或通式(ⅴ)表示的化合物。
[化4]
[式中，y表示卤素原子。]
本发明的铂(ⅳ)络合物可以应用非专利文献2等文献记载的方法来制造。即，将铂(ⅱ)络合物在溶剂中，通过过氧化氢等氧化剂处理或氧化卤化处理来获得作为目标的铂(ⅳ)络合物的方法，或者通过对铂(ⅳ)络合物进行取代反应来获得作为目标的铂(ⅳ)络合物的方法。这些制造方法的示例示于下面的实施例。
以本发明的铂(ⅳ)络合物作为有效成分的药物也包含在本发明中。只要是本发明的铂(ⅳ)络合物显示药效的医药用途，就没有特别限定，但较好是作为抗癌剂的用途。作为抗癌剂的使用可以单独使用，或者与载体、赋形剂、崩解剂、粘合剂、润滑剂、流化剂、涂层剂、悬浮剂、乳化剂、稳定剂、防腐剂、调味剂、香精、稀释剂、增溶剂等制药学上可接受的添加剂进行混合，以粉剂、颗粒剂、片剂、囊片、胶囊剂、注射剂、栓剂、软膏等制剂形态，以口服或非口服的方式(全身给药、局部给药等)给药即可。制剂中的发明的铂(ⅳ)络合物虽根据制剂为不同量,但通常为1.0～100重量％。给药量根据给药途径、患者的年龄以及需要预防或治疗的实际症状等有所不同，例如对成人给药时，作为有效成分可以是1天0.01mg～2000mg，较好是0.1mg～1000mg，可以1天一次或几次分批给药。
实施例
以下，通过实施例对本发明进行详细说明。但是，本发明并不局限于这些实施例。
本发明的实施例中使用以下缩略符号。
ox：乙二酸酯
cbdc：1,1-环丁烷二羧酸酯
1-ohp：奥沙利铂
本实施例中的化合物的纯度测定利用高效液相色谱仪，作为柱使用l-柱2(l-column2)ods(4.6mmi.d.×250mm：从一般财团法人化学物质评价研究机构购入)、作为移动相(a)使用将2.72g磷酸二氢钾、1.89g1-戊烷磺酸钠以及0.5ml三乙胺溶解在2000ml蒸馏水，并用磷酸将ph调整至4.3的缓冲液，作为移动相(b)使用甲醇，在下述分析条件1或2的条件下实施。
分析条件1(等梯度分析)：
移动相(b)浓度：15％(0分钟)～15％(20分钟)，
移动相流速1ml/分钟、检测210nm。
分析条件2(梯度分析)：
移动相(b)浓度：15％(0分钟)～90％(10分钟)，
移动相流速1ml/分钟、检测210nm。
实施例1反式、顺式、顺式-[ptcl(oh)(r,r-dach)(ox)]:通式(ⅲ)的y＝cl的合成
将n-氯代丁二酰亚胺(66.8mg)溶解在14ml蒸馏水，加入将1-ohp(200mg)悬浮于6ml蒸馏水的溶液，在避光下，在室温搅拌了4个小时。反应结束后，过滤反应液中的不溶物质，通过对滤液进行减压浓缩来获得了固体。通过使获得的固体在乙醇/水中进行重结晶，获得目标化合物(114mg)。1h-nmr(d2o):δ2.89-2.72(2h,m),2.15(2h,d,j＝12.2hz),1.53-1.41(4h,m),0.97-0.90(2h,m),ms(esi；electrosprayionization):450(m+1),451(m+2),纯度(hplc,分析条件2):99.4％。
实施例2反式、顺式、顺式-[ptbr(oh)(r,r-dach)(ox)]:通式(ⅲ)的y＝br的合成
将n-溴代丁二酰亚胺(89.6mg)溶解在14ml蒸馏水，然后加入到将1-ohp(200mg)悬浮于6ml蒸馏水而得的溶液，在避光下，在室温搅拌了3个小时。反应结束后，过滤反应液中的不溶物质，通过对滤液进行减压浓缩来获得了固体。通过使制得的固体在水中悬浮、并再次滤取，获得目标化合物(216mg)。1h-nmr(dmso-d6):δ7.91-7.65(2h,m),7.14-7.03(2h,m),2.65-2.55(2h,m),2.07-1.94(2h,m),1.50-1.46(4h,m),1.15-1.02(2h,m),ms(esi):495(m+1),纯度(hplc,分析条件2):98.9％。
实施例3反式、顺式、顺式-[ptcl(oh)(r,r-dach)(cl)2]:通式(ⅰ)的x1,x2,y＝cl的合成
将n-氯代丁二酰亚胺(105.4mg)溶解在7ml蒸馏水，然后加入到将pt(r,r-dach)cl2(300mg)悬浮于60ml四氢呋喃而得的溶液，在避光下，在室温搅拌了4个小时。反应结束后，过滤反应液中的不溶物质，通过对滤液进行减压浓缩来获得了固体。通过使制得的固体在乙醇中悬浮、并再次滤取，获得目标化合物(322mg)。1h-nmr(dmso-d6):δ7.53-7.29(2h,m),6.89-6.78(2h,m),2.75-2.60(2h,m),2.10-2.00(2h,m),1.47(2h,d,j＝8.0hz),1.10-0.93(2h,m),ms(esi):433(m+1),纯度(hplc,分析条件2):98.1％。
比较例1反式、顺式、顺式-[pt(oh)(oac)(r，r-dach)(ox)]的合成
在将1-ohp(200mg)悬浮于9ml乙酸而得的溶液中加入0.135ml的30％过氧化氢水，在避光下，在室温搅拌了19个小时。反应结束后，边加水边进行几次减压浓缩，获得了固体。通过对获得的固体在乙醇/甲醇中进行重结晶，获得目标化合物(55mg)。1h-nmr(d2o):δ2.78-2.73(2h,m),2.17(2h,d,j＝9.2hz),1.94(3h,s),1.54-1.44(4h,m),1.20-1.05(2h,m),纯度(hplc,分析条件1):94.0％。
比较例2反式、顺式、顺式-[ptcl(och2ch2oh)(r，r-dach)(ox)]的合成
在将1-ohp(200mg)悬浮于2ml乙二醇而得的溶液中加入n-氯代丁二酰亚胺(66.8mg)，在避光下，在室温搅拌了3个小时。反应结束后，在反应液中加入10ml丙酮以及30ml二乙醚，滤取了析出的固体。通过对获得的固体在乙醇/水中进行重结晶，获得目标化合物(154mg)。1h-nmr(d2o):δ3.58-3.45(2h,m),3.22-3.08(2h,m),2.85-2.83(2h,m),2.14(2h,d,j＝11.2hz),1.53-1.44(4h,m),1.15-1.07(2h,m),纯度(hplc,分析条件1):98.0％。
比较例3反式、顺式、顺式-[pt(oh)2(r，r-dach)(ox)]的合成
在将1-ohp(900mg)悬浮于12ml蒸馏水而得的溶液中加入2.58ml的30％过氧化氢水，在避光下，在室温搅拌了20.5个小时。反应结束后，边加水边进行几次减压浓缩，获得了固体。通过对获得的固体在蒸馏水中进行重结晶，获得目标化合物(422mg)。1h-nmr(d2o):δ2.74-2.72(2h,m),2.17(2h,d,j＝12.8hz),1.54-1.45(4h,m),1.18-1.12(2h,m),纯度(hplc,分析条件1):>98.0％。
比较例4反式、顺式、顺式-[pt(ococh2ch2c6h5)2(r,r-dach)(ox)]的合成
将3-苯丙酸(77mg)、n,n-二甲氨基吡啶(5.7mg)溶解在2mln,n-二甲基甲酰胺中，加入0.086ml二异丙基碳二亚胺后，在室温搅拌了0.5个小时。在反应液中加入使比较例3中制得的反式、顺式、顺式-[pt(oh)2(r，r-dach)(ox)](200mg)悬浮于2mln,n-二甲基甲酰胺而得的溶液，在避光下，在室温搅拌了23小时。通过过滤反应液去除未反应的铂络合物，并在制得的滤液中加入水，从而使固体析出。滤取固体，利用冷却的乙醇清洗，从而获得目标化合物(38mg)。1h-nmr(dmso-d6):δ8.30(4h,brs),7.27-7.14(10h,m),2.80-2.76(4h,m),2.60-2.56(4h,m),2.40-2.30(2h,m),2.05(2h,d,j＝12.4hz),1.47(2h,d,j＝8.0hz),1.40-1.22(2h,m),1.15-1.14(2h,m),纯度(hplc,分析条件2):98.0％。
比较例5反式、顺式、顺式-[ptcl(oh)(r,r-dach)(cbdc)]的合成
根据非专利文献3记载的方法合成了目标化合物。1h-nmr(dmso-d6):δ7.71-7.43(2h,m),7.00-6.90(2h,m),2.60-2.29(6h,m),2.03-1.93(2h,m),1.84-1.49(2h,m),1.50-1.30(4h,m),1.05-0.95(2h,m),ms(esi):504(m+1),486(m-oh),纯度(hplc,分析条件2):95.6％。
比较例6反式、顺式、顺式-[pt(oh)2(r,r-dach)(cbdc)]的合成
将根据非专利文献3记载的方法合成的顺式，顺式-[pt(r,r-dach)(cbdc)](100mg)溶解在14ml的50％丙酮溶液，加入14ml的30％过氧化氢水，在避光下，在室温搅拌了4个小时。反应结束后，边加水边进行几次减压浓缩，获得了固体。通过使获得的固体在丙酮中悬浮提纯，获得目标化合物(41mg)。1h-nmr(d2o):2.97(2h,d,j＝10.0hz),2.77-2.72(4h,m),2.36-2.32(2h,m),2.14-2.10(2h,m),1.74-1.64(4h,m),1.37-1.34(2h,m),ms(esi):486(m+1),486(m-oh),纯度(hplc,分析条件2):96.8％。
试验例1实施例化合物以及比较例化合物在体外的抗肿瘤试验
将胃癌以及胰腺癌细胞株分别接种在96孔板。胃癌细胞katoⅲ以1×104细胞/孔，胃癌细胞mkn-1以5×105细胞/孔，胃癌细胞mkn-45以1×104细胞/孔，胃癌细胞mkn-74以1×104细胞/孔，胰腺癌细胞aspc-1以5×105细胞/孔，胰腺癌细胞bxpc-3以5×105细胞/孔，胰腺癌细胞dan-g以5×105细胞/孔，胰腺癌细胞suit-2以5×105细胞/孔的条件分别进行接种。培养24小时后，将各实施例化合物或各比较例化合物从最终浓度0.0244μmol/l至100μmol/l以公比4的条件进行了添加。技术重复设为3次。作为对照设计了未添加药剂的孔，以及作为空白设计了未添加细胞和药剂的孔。培养72小时后，去除培养液，用甲醇固定细胞后，用亚甲蓝染色液对细胞进行了染色。清洗掉过剩的亚甲蓝染色液后，在各孔中添加200μl的0.1％盐酸，并提取了色素。利用酶标仪测定了660nm的吸光度，基于获得的吸光度根据下式计算出了细胞增殖抑制活性(gi％)。
gixy％＝(1-(axy-b)/(c-b))×100
在这里，gixy％表示化合物x的浓度为yμm时的细胞增殖抑制活性，axy表示加入了yμm的化合物x的孔的平均吸光度，b表示空白孔的吸光度，c表示对照孔的吸光度。
对各化合物浓度求出gixy％，根据浓度和细胞增殖抑制活性绘制了增殖抑制曲线，将细胞增殖抑制活性为50％的浓度作为化合物x的ic50。其结果示于表1、2以及3。
[表1]
r表示ch2ch2c6h5。
n.t.表示“未测得”。
[表2]
r表示ch2ch2c6h5。
实施例1的化合物与轴向配体的组合不同的比较例1～4的化合物相比，对细胞株均显示高的抗肿瘤效果。由此明确了在具有dach结构的铂(ⅳ)络合物的轴向配体的组合中，实施例1的化合物所具有的羟基以及卤素原子的组合优异。实施例1的化合物显示与作为抗癌剂使用的1-ohp同等的活性，与pt(dach)cl2相比为高活性。
[表3]
虽然与本发明的化合物相比活性差，但从比较例5的化合物以及比较例6的化合物的结果可知，即便将x1、x2转变为cbdc的情况下，具有dach结构的铂(ⅳ)络合物的轴向配体的组合中，羟基以及氯原子或溴原子的组合优异。进一步，从实施例3的化合物的结果明确了y为氯原子，x1、x2同时为氯原子时也能够显示高的抗肿瘤活性。
试验例2实施例1的化合物以及比较例5的化合物对水的溶解性试验
称取实施例1的化合物以及比较例5的化合物，分别在其中缓慢加入蒸馏水，并测定了结晶完全溶解的浓度。其结果示于表4。1-ohp的溶解度为从文献值计算出的参考值。
[表4]
其结果可知作为本发明的轴向配体导入了羟基以及卤素原子的为铂(ⅳ)络合物的实施例1的化合物对水的溶解度，与对应的铂(ⅱ)络合物1-ohp相比上升了3倍左右。另外，与作为已知的铂(ⅳ)络合物的比较例5的化合物相比溶解度高2倍以上。
试验例3实施例1的化合物以及比较例5的化合物在蒸馏水中的溶液稳定性试验
将实施例1的化合物以及比较例5的化合物称取在容器中，利用蒸馏水溶解至1mg/ml。将各自的水溶液用0.45μm的针筒过滤器进行过滤，并在避光下、37℃的水浴中使其振荡，经时进行取样，利用高效液相色谱法试验了稳定性。其结果示于图1。
试验结果是，72小时后的实施例1的化合物残存率为99.1％，与此相对，作为已知的铂(ⅳ)络合物的比较例5的化合物的残存率为63.7％。明确了本发明的实施例1的化合物在水溶液中长时间稳定，与比较例5的化合物相比也稳定。
试验例4实施例1的化合物在生理盐水中的溶液稳定性试验
将实施例1的化合物称取在容器中，利用生理盐水溶解至1mg/ml。将溶解液避光下在5℃静置或未避光的条件下在37℃的水浴中振荡，并利用高效液相色谱仪定量了残存量，将残存率示于表5。
[表5]
通常具有氯原子以外的离去基团的铂络合物，例如1-ohp与生理盐水中的氯离子发生交换，因此在生理盐水中不稳定。但是，如本试验结果所示，本发明的以二羧酸酯为离去基团的作为铂(ⅳ)络合物的实施例1的化合物，即便在生理盐水中，避光下在5℃条件下静置25小时后也几乎不会发生分解，在作为更加严酷条件的未避光的37℃下使其振荡时残存率也为94.4％，在生理盐水中也稳定。
根据以上各试验结果明确了本发明的铂(ⅳ)络合物具有优异的抗肿瘤活性的同时溶解性良好，具有作为溶液时也呈现化学稳定性的优异的性能。