一种组氨酸荧光探针及其制备方法和应用与流程

文档序号:12776947阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种组氨酸荧光探针,其特征在于,包括对组氨酸敏感的多肽B和荧光蛋白A;所述的荧光蛋白A插入到多肽B中,将多肽B分为多肽B1和多肽B2两个部分,形成B1-A-B2式结构的探针;

所述多肽B为HBP及其突变体。

2.根据权利要求1所述的组氨酸荧光探针,其特征在于,所述HBP的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.根据权利要求1所述的组氨酸荧光探针,其特征在于,所述的荧光蛋白A为黄色荧光蛋白cpYFP,所述黄色荧光蛋白cpYFP的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。

4.根据权利要求3所述的组氨酸荧光探针,其特征在于,所述黄色荧光蛋白cpYFP替换为氨基酸序列如SEQ ID NO.4或SEQ ID NO.10所示绿色荧光蛋白cpGFP、氨基酸序列如SEQ ID NO.5或SEQ ID NO.11所示蓝色荧光蛋白cpBFP、氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示青色荧光蛋白cpTFP、氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示橘黄色荧光蛋白cpmOrange、氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示苹果红荧光蛋白cpmApple、氨基酸序列如SEQ ID NO.9或SEQ ID NO.13所示红色荧光蛋白cpmKate和氨基酸序列如SEQ ID NO.12所示红色荧光蛋白mcherry中的一种。

5.根据权利要求1所述的组氨酸荧光探针,其特征在于,所述荧光蛋白A插入多肽B形成B1-A-B2式的探针结构,所述插入的位点为多肽B的89/90,89/91,89/92,89/93,90/91,90/92,90/93,91/92,91/93,92/93,185/186,185/187,185/188,185/189,185/190,185/191,185/192,185/193,186/187,186/188,186/189,186/190,186/191,186/192,186/193,187/188,187/189,187/190,187/191,187/192,187/193,188/189,188/190,188/191,188/192,188/193,189/190,189/191,189/192,189/193,190/191,190/192,190/193,191/192,191/193或192/193位点。

6.根据权利要求5所述的组氨酸荧光探针,其特征在于,所述荧光蛋白A插入多肽B的插入位点为90/91,91/92,186/191,187/191,189/190,189/191,189/193,190/191,190/193时,对应的B1-A-B2式的探针结构的氨基酸序列如SEQ ID NO.14~22所示。

7.编码权利要求1所述B1-A-B2式探针的核苷酸序列。

8.权利要求1~6任意一项所述的组氨酸荧光探针的制备方法,包括以下步骤:

1)将权利要求7所述的核苷酸序列与pRSETb载体连接,得到大肠杆菌重组表达载体;

2)将所述大肠杆菌重组表达载体转移到宿主细胞中;

3)培养所述宿主细胞,分离得到组氨酸荧光探针。

9.一种包括权利要求1~6任意一项所述的组氨酸荧光探针的组氨酸检测试剂盒。

10.权利要求1~6任意一项所述的组氨酸荧光探针或权利要求9所述的制备方法制备得到的组氨酸荧光探针在组氨酸实时定位、定量检测以及高通量化合物筛选非疾病诊断或治疗目的的应用。

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