本发明涉及一种奥司他韦衍生物及其制备方法和作为流感病毒神经氨酸酶抑制剂的应用，属于有机化合物合成与医药应用技术领域。
背景技术：
流行性感冒简称为流感(influenza或者flu)，是由流感病毒引起的一种急性上呼吸道传染病，具有传播速度快、传染性强、潜伏期短、致病性强并且能够引起多种并发症等特点，对人类的生命和健康构成了很大的威胁，全世界每年有数万人死于流感，动物型流感不仅会造成大量各种禽类、哺乳动物及其它动物死亡，而且会使社会经济造成重大损失，造成极大的社会恐慌。神经氨酸酶(na)是流感病毒的功能蛋白，在病毒生命过程中发挥了重要作用，是抗流感药物设计的重要靶点。目前唯一的口服na抑制剂磷酸奥司他韦(oseltamivirphosphate)属于环己烯类na抑制剂，是抗流感的首选药物，在流感的预防及治疗中发挥了重要作用。然而，目前高致病性h5n1型禽流感病毒和多种季节性h1n1、h3n2型流感病毒株都对其产了耐药性。扎那米韦(zanamivir)和新上市的帕拉米韦(peramivir)主要通过吸入或者静脉注射给药，对患者来说很不方便，而且也有耐药病毒株出现。鉴于目前的抗流感形势及流感病毒的潜在威胁，开发新型、高效的na抑制剂仍具有重要意义。group-1的na(n1，n4，n5和n8)其活性中心与其附近一个较大的150-cavity直接连通，利用该口袋可以作为一个辅助结合位点，通过对奥司他韦(oseltamivir)化学结构进行进一步修饰，对发现高活性、高选择性及抗耐药性且具有自主知识产权的新型抗流感药物具有重大意义。
技术实现要素：
针对现有技术的不足，本发明提供了一种奥司他韦衍生物及其制备方法，本发明还提供了奥司他韦衍生物作为神经氨酸酶抑制剂在制备抗流感病毒药物中的应用。
本发明的技术方案如下：
1、奥司他韦衍生物
一种奥司他韦衍生物，或其药学上可接受的盐、酯或前药，具有通式i所示的结构：
其中，r1为含有一个或多个含有芳基的酰胺、磺酰胺、丙烯酰胺、脒基、胍基或胺基；r2为氢、甲基、乙基、取代或未取代的苯甲基、苯乙基、苯丙基。
根据本发明优选的，奥司他韦衍生物具有如下结构式ia-1、ia-2、ia-3、ib-1、ib-2、ib-3、ic-1或id-1所示的结构：
其中，以上各结构中的n代表括号中的碳链的碳原子数；
r2为氢、甲基、乙基、取代或未取代的苯甲基、苯乙基、苯丙基；r3、r4各自独立的为氢、c1-c3直链或支链烷基；
ar为取代或未取代的苯基，其它取代或未取代的芳香杂环；
所述苯基或其它芳香杂环上的取代基选自卤素、c1-c12烷基、部分或全部氟取代的c1-c3烷基，c1-c12烷氧基、c3-c12环烷氧基，部分或全部氟取代的c1-c3烷氧基，c1-c12烷硫基、c3-c12环烷硫基、部分或全部氟取代的c1-c3烷硫基、巯基、氨基、氰基、硝基、单或双c1-c12烷基取代的氨基、c2-c12脂肪酰胺、苯基、噻吩基、及其它芳香杂环；芳香甲基、芳香羰基、芳香氧基、芳香硫基、无取代或n-烷基取代的芳香氨基、芳香酰胺、芳香取代的脂肪酰胺，芳香砜基或芳香亚砜基；
以上所述芳香环或芳香杂环为各种取代的苯环、各种取代的六元杂环、各种取代的五元杂环，各种取代的六元并五元杂环、各种取代的六元并六元杂环、各种取代的五元并五元杂环、各种取代的苯并五元杂环或各种取代的苯并六元杂环。
本发明中所述的“药学上可接受的盐”是指在可靠的医药评价范围内，化合物的盐类适于与人或较低等动物的组织相接触而无不适当的毒性、刺激及过敏反应等，具有相当合理的收益与风险比例，通常是水或油可溶的或可分散的，并可有效地用于其预期的用途。包括药学上可接受的酸加成盐和药学上可接受的碱加成盐，在这里是可做预期的用途并与式i化合物的化学性质相容的，适宜的盐的列表参见s.m.birge等，j.pharm.sci.,1977,66,1-19页。
本发明中所述的“前药”是指药学上可接受的衍生物，以便这些衍生物所得的生物转换产物是如式i化合物所定义的活性药物。
根据本发明进一步优选的，奥司他韦衍生物为具有如下结构的化合物之一：
2、奥司他韦衍生物的制备方法
一种奥司他韦衍生物的制备方法，包括如下方法之一：
(1)奥司他韦衍生物(ia-1)的制备方法，步骤如下：奥司他韦羧酸酯、相应的醛、及酸在相应溶剂中生成类似希夫碱的中间过渡态；再经过选择性还原得到酯类目标产物，酯类目标产物再经过水解得到羧酸目标产物；所述相应的醛与奥司他韦羧酸酯的摩尔比例为1-2:1，酸与奥司他韦羧酸酯的摩尔比例为0.5-3:1；
反应式如下：
试剂及条件:(i)溶剂，酸，选择性还原剂，一定温度；(ii)溶剂，碱，一定温度。
其中，n＝1,2,3；r2、ar同上述通式ia-1所述。
本发明条件i中所述的溶剂为甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、丙酮、四氢呋喃、二氧六环、n，n-二甲基甲酰胺、n-甲基吡咯烷酮、二甲基亚砜或任意两种溶剂的组合；所述的酸为盐酸、硫酸、硝酸、磷酸或相应的酸式磷酸盐和各种有机酸，所述的选择性还原剂为氰基硼氢化钠或三乙酰氧基硼氢化钠；一定温度为0-100℃；条件ii中所述的溶剂为甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、丙酮、四氢呋喃、二氧六环、水及水和其它任意一种溶剂的组合；碱为氢氧化钠、氢氧化锂、氢氧化钾、甲醇钠或乙醇钠其中的一种；一定温度为0-100℃。
所述的相应的醛为取代或未取代的芳基甲醛、乙醛或丙醛。
本发明制备方法中所用醛上ar中苯基或其它芳香杂环上的取代基为苯基、噻吩基、及其它芳香杂环、芳香硫基、无取代或n-烷基取代的芳香氨基时需要单独制备，制备方法见具体实施例。
(2)奥司他韦衍生物(ia-2)的制备方法，步骤如下：奥司他韦羧酸酯、相应的醛、及酸在相应溶剂中生成类似希夫碱的中间过渡态；再经选择性还原得到酯类目标产物，酯类目标产物再经水解得到羧酸目标产物；所述的相应的醛与奥司他韦羧酸酯的比例为2-4:1，酸与奥司他韦羧酸酯的比例为0.5-3:1；
反应式如下：
试剂及条件:(i)溶剂，酸，选择性还原剂，一定温度；(ii)溶剂，碱，一定温度。
其中，n＝1,2,3；r2、ar同上述通式ia-2所述；
本发明条件i和ii同(1)所述。
(3)奥司他韦衍生物(ia-3)的制备方法
反应式如下：
试剂及条件:(i)溶剂，酸，选择性还原剂，一定温度；(ii)溶剂，碱，一定温度。
r2、ar同上述通式ia-3所述，r3和r4独立的选自h、甲基、乙基。
本发明条件i和ii同(1)所述。
(4)奥司他韦衍生物(ib-1)的制备方法，步骤如下：奥司他韦羧酸酯或其盐、相应的酸缩合得到酯类目标产物，酯类目标产物再经过水解得到羧酸目标产物。
反应式如下：
试剂及条件:(i)溶剂，缩合剂，碱，一定温度；(ii)溶剂，碱，一定温度。
其中，n＝0,1,2,3；r2、ar同上述通式ib-1所示。
本发明条件i中所述的溶剂为二氯甲烷、n，n二甲基甲酰胺、n-甲基吡咯烷酮、dmso、丙酮、四氢呋喃或二氧六环其中的一种；缩合剂为hatu、hbtu、hctu和tbtu的一种或edc与hobt的组合；碱为三乙胺、二异丙基乙胺、n-甲基吗啉、n-烷基哌啶或吡啶其中的一种；一定温度为0-60℃。条件ii中所述的条件同(1)条件ii所述。
(5)奥司他韦衍生物(ib-2)的制备方法
反应式如下：
试剂及条件同(4)所述；r2、ar同上述通式ib-2所示；
奥司他韦衍生物(ib-2)的制备方法同(4)所述。
(6)奥司他韦衍生物(ib-3)的制备方法，步骤如下：奥司他韦羧酸酯或其盐、相应的磺酰氯在缚酸剂作用下缩合得到酯类目标产物，酯类目标产物再经过水解得到羧酸目标产物。
反应式如下：
试剂及条件:(i)溶剂，缚酸剂，一定温度；(ii)溶剂，碱，一定温度。
其中，n＝0,1,2,3；r2、ar同上述通式ib-3所示。
本发明条件i中所述的溶剂为二氯甲烷、n，n-二甲基甲酰胺、n-甲基吡咯烷酮、dmso、丙酮、四氢呋喃、二氧六环、甲苯或二甲苯其中的一种；缚酸剂为三乙胺、二异丙基乙胺、n-甲基吗啉、n-烷基哌啶、吡啶、碳酸钠、碳酸钾或碳酸铯其中的一种；一定温度为0-60℃。条件ii中所述的条件同(1)条件ii所述。
(7)奥司他韦衍生物(ic-1)的制备方法，步骤如下：奥司他韦羧酸酯、相应的碳酰亚胺基硫代氧酸甲酯氢碘酸盐缩合得到酯类目标产物，酯类目标产物再经过水解得到羧酸目标产物。
反应式如下：
试剂及条件:(i)溶剂，一定温度；(ii)溶剂，碱，一定温度。
其中，n＝0,1,2,3；r2、ar同上述通式ic-1所示。
本发明条件i中所述的溶剂为甲醇、乙醇、正丙醇或异丙醇其中的一种；一定温度为0-60℃。条件ii中所述的条件同(1)条件ii所述。
(8)奥司他韦衍生物(id-1)的制备方法，步骤如下：奥司他韦、相应的n-甲酸叔丁酯-(z)-n'-芳基–s-甲基异硫脲缩合得到叔丁氧羰基保护的中间体，经过酸脱去保护基得到酯类目标产物，再经过水解得到羧酸目标产物。
反应式如下：
试剂及条件:(i)溶剂，碱，一定温度；(ii)溶剂，酸，一定温度；(iii)溶剂，碱，一定温度。
其中，n＝0,1,2,3；r2、ar同上述通式id-1所示。
本发明条件i中所述的溶剂为甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、乙腈、四氢呋喃或丙酮其中的一种；一定温度为0-60℃。本发明条件ii中所述的溶剂为二氯甲烷、三氯甲烷、二氯乙烷、乙腈、四氢呋喃、丙酮、乙酸乙酯、乙醚或异丙醚其中的一种，酸为三氟乙酸、盐酸或硫酸其中的一种，一定温度为0-60℃。条件iii中所述的条件同(1)条件ii所述。
所述的奥司他韦衍生物(ia-1)的制备方法中，醛上ar中苯基或其它芳香杂环上的取代基为苯基、噻吩基、及其它芳香杂环、芳香硫基、无取代或n-烷基取代的芳香氨基时需要单独制备，制备方法如下：
(1)醛(a)的制备方法，步骤如下：芳香硼酸与溴代芳香醛类在氮气保护下经过钯催化偶联成为目标产物。
反应式如下：
试剂及条件:(iii)溶剂，催化剂，缚酸剂，一定温度，惰性气体保护。
ar2为取代或未取代的苯基，及其它取代或未取代的芳香杂环。ar3为各种取代的苯环、各种取代的六元杂环、各种取代的五元杂环，各种取代的六元并五元杂环、各种取代的六元并六元杂环、各种取代的五元并五元杂环、各种取代的苯并五元杂环或各种取代的苯并六元杂环。
本发明条件iii中所述的溶剂为n,n-二甲基甲酰胺、dmso、n-甲基吡咯烷酮、丙酮、四氢呋喃、二氧六环、甲苯或二甲苯其中的一种，c1-c6单链或带有支链的脂肪醇类中的一种；催化剂为四(三苯基膦)钯、三(双亚苄基丙酮)二钯，氯化钯、醋酸钯与相应配体三苯砷、三正丁基膦、三甲氧基磷、2-双二苯基膦乙烷、1,3-双(二苯基膦)丙烷、1,5-双(二苯基膦)戊烷、1,8-二(二苯基膦基)辛烷的组合；缚酸剂为碳酸钠、碳酸钾、碳酸铯、磷酸三钠、磷酸三钾其中的一种；惰性气体为氮气或氩气；一定温度为60-200℃。
(2)醛(b)的制备方法，步骤如下：芳香硫醇与氟代芳香醛类在碱性条件下生成目标产物。
反应式如下：
试剂及条件:(iv)溶剂，缚酸剂，一定温度。
ar2同上述醛(a)所述的ar2；ar4同上述醛(a)所述的ar3。
本发明条件iv中所述的溶剂为n,n二甲基甲酰胺、dmso、n-甲基吡咯烷酮、丙酮、四氢呋喃或二氧六环其中的一种；缚酸剂为碳酸钠、碳酸钾或碳酸铯其中的一种；一定温度为60-200℃。
(3)醛(c)的制备方法，步骤如下：芳香胺与溴代芳香醛类在氮气保护下经过钯催化偶联成为目标产物。
反应式如下：
试剂及条件:(v)溶剂，催化剂，缚酸剂，一定温度，惰性气体保护。
ar2同上述醛(a)所述的ar2；ar5同上述醛(a)所述的ar3；r5为c1-c6单链或带有支链的脂肪烷。
本发明条件v中所述的溶剂为n,n二甲基甲酰胺、dmso、n-甲基吡咯烷酮、四氢呋喃、二氧六环、甲苯、二甲苯其中的一种；催化剂为四(三苯基膦)钯、三(双亚苄基丙酮)二钯、氯化钯、醋酸钯与相应配体1.1'-联萘-2.2'-二苯膦、三正丁基膦、三甲氧基磷、2-双二苯基膦乙烷、1,3-双(二苯基膦)丙烷、1,5-双(二苯基膦)戊烷、1,8-二(二苯基膦基)辛烷的组合；缚酸剂为碳酸钠、碳酸钾、碳酸铯、双(三甲硅基)氨基钠、叔丁醇钠或叔丁醇钾其中的一种；一定温度为60-200℃。惰性气体为氮气或氩气。
3、奥司他韦衍生物的应用
对按照上述方法合成的部分奥司他韦衍生物进行了细胞水平的抗禽流感h5n1、h5n2、h5n6、h5n8的活性筛选，以盐酸奥司他韦羧酸、扎那米韦、利巴韦林、盐酸金刚烷胺、盐酸金刚乙胺为阳性对照。它们的抗禽流感活性数据列于表1中。
由表1可以看出，本发明的奥司他韦衍生物是一系列结构新颖的环己烯类na抑制剂，表现出了极强的抗h5型禽流感活性。部分化合物抑制四种h5型禽流感的ec50值均超过了阳性对照药盐酸奥司他韦羧酸，其中，化合物ia-1-4和ia-1-7的活性尤为突出，ia-1-4对h5n1、h5n2、h5n6、h5n8的ec50均低于五个阳性对照和cn201410119920中的a10，其中对h5n2毒株的ec50值低于盐酸奥司他韦羧酸的十分之一；ia-1-7对h5n1、h5n2、h5n6、h5n8的ec50均低于五个阳性对照和cn201410119920中的a10，其中对h5n6毒株的ec50值低于盐酸奥司他韦羧酸的十分之一。所有化合物亦表现出了很高的安全性，所有化合物的细胞毒性均高于100μm。因此该类新型奥司他韦衍生物具有进一步研究与开发的价值，可作为抗流感的先导化合物加以利用。
本发明的奥司他韦衍生物可作流感病毒神经氨酸酶抑制剂应用。具体地说，作为神经氨酸酶抑制剂用于制备抗流感病毒药物。
一种抗流感药物组合物，包括本发明的奥司他韦衍生物和一种或多种药学上可接受载体或赋形剂。
本发明提供了结构全新的奥司他韦衍生物、其制备方法、其抗流感活性筛选结果及其在抗病毒领域中的首次应用。经过试验证明，本发明的新型奥司他韦衍生物可作为流感病毒神经氨酸酶抑制剂应用并具有很高的应用价值。具体地说，作为na抑制剂用于制备抗流感病毒药物。
具体实施方式：
通过下述实例有助于理解本发明，但是不能限制本发明的内容。实施例中所涉及的合成路线如上述“2、奥司他韦衍生物的制备方法”中所述。
实施例1：
(3r,4r,5s)-4-乙酰胺基-5-((4-硝基苄基)氨基)-3-(戊烷-3-氧基)环己烯-1-烯-1-羧酸乙酯(1)的制备
称取磷酸奥司他韦(0.41g,1mmol)、4-硝基苯甲醛(0.15g,1.2mmol)、氰基硼氢化钠(0.12g,2mmol)于20ml的乙醇溶液中，30℃搅拌5h(tlc检测反应完毕，展开剂：乙酸乙酯)。蒸除溶剂，加入20ml水，用20ml乙酸乙酯萃取三次，无水硫酸镁干燥，过滤，蒸除溶剂后进行快速柱层析分离得到白色固体即为化合物(3r,4r,5s)-4-乙酰胺基-5-((4-硝基苄基)氨基)-3-(戊烷-3-氧基)环己烯-1-烯-1-羧酸乙酯，收率：76.3％。
(3r,4r,5s)-4-乙酰胺基-5-((4-硝基苄基)氨基)-3-(戊烷-3-氧基)环己烯-1-烯-1-羧酸(ia-1-1)的制备
将(3r,4r,5s)-4-乙酰胺基-5-((4-硝基苄基)氨基)-3-(戊烷-3-氧基)环己烯-1-烯-1-羧酸乙酯0.30g溶于20ml乙醇中，加入15％的氢氧化钾溶液10ml，室温搅拌2小时。蒸除乙醇，加入20ml水，用盐酸调ph＝4。用20ml乙酸乙酯萃取三次，无水硫酸镁干燥，过滤，蒸除溶剂后得到白色固体即为化合物(3r,4r,5s)-4-乙酰胺基-5-((4-硝基苄基)氨基)-3-(戊烷-3-氧基)环己烯-1-烯-1-羧酸(ia-1-1)，收率：80.2％。
1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.18(d,j＝8.7hz,2h),8.02(d,j＝9.1hz,1h),7.62(d,j＝8.7hz,2h),6.56(s,1h),4.03(d,j＝8.1hz,1h),3.89(q,j＝15.1hz,3h),3.72(q,j＝9.1hz,2h),2.73(td,j＝10.1,5.4hz,1h),2.64(dd,j＝17.5,4.1hz,1h),2.04(dd,j＝17.4,9.6hz,1h),1.87(s,3h),1.42(ddp,j＝26.8,13.3,6.7,6.3hz,4h),0.82(dt,j＝15.1,7.4hz,6h).
实施例2：
(3r,4r,5s)-4-乙酰胺基-5-((3-三氟甲基苄基)氨基)-3-(戊烷-3-氧基)环己烯-1-烯-1-羧酸乙酯(2)的制备
操作步骤同实施例1，所不同的是起始原料用的是3-三氟甲基苯甲醛。
得到产物为白色固体，收率：77.1％。
(3r,4r,5s)-4-乙酰胺基-5-((3-三氟甲基苄基)氨基)-3-(戊烷-3-氧基)环己烯-1-烯-1-羧酸乙酯(ia-1-2)的制备
操作步骤同实施例1，所不同的是起始原料用的是化合物2。
得到产物为白色固体，收率：79.3％。
1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.71(s,1h),9.90(s,1h),9.53(s,1h),8.22(d,j＝9.0hz,1h),7.99(s,1h),7.87(d,j＝7.6hz,1h),7.76(d,j＝7.8hz,1h),7.66(t,j＝7.7hz,1h),6.66(s,1h),4.30(s,3h),4.05(q,j＝8.9hz,1h),3.53–3.46(m,1h),2.96(dd,j＝17.1,4.8hz,1h),2.77–2.65(m,1h),1.91(s,3h),1.42(qq,j＝14.1,8.8,7.9hz,4h),0.84(t,j＝7.4hz,3h),0.80(t,j＝7.4hz,3h).
实施例3：
4-(苯并[b]噻吩-2-基)苯甲醛(3-1)的制备
将苯并[b]噻吩-2-硼酸(1.78g，10mmol)、4-溴苯甲醛(1.85g，10mmol)、碳酸钾(4.1g，30mmol)、四(三苯基膦)钯(0.08g，0.069mol)、dmso(30ml)加入烧瓶，氮气保护，加热至120℃，搅拌12小时。将反应混合物加入150ml水中，用乙酸乙酯50ml提取3次，无水硫酸镁干燥，过滤，蒸除溶剂后进行快速柱层析分离得到淡黄色油状物即为化合物4-(苯并[b]噻吩-2-基)苯甲醛(3-1)，收率：82.5％。
(3r,4r,5s)-4-乙酰胺基-5-((4-(苯并[b]噻吩-2-基)苄基)氨基)-3-(戊烷-3-氧基)环己烯-1-烯-1-羧酸乙酯(2)的制备
操作步骤同实施例1，所不同的是起始原料用的是4-(苯并[b]噻吩-2-基)苯甲醛。
得到产物为无色油状物，收率：75.8％。
(3r,4r,5s)-4-乙酰胺基-5-((4-(苯并[b]噻吩-2-基)苄基)氨基)-3-(戊烷-3-氧基)环己烯-1-烯-1-羧酸(ia-1-3)的制备
操作步骤同实施例1，所不同的是起始原料用的是化合物3。
得到产物为白色固体，收率：81.6％。
1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.21(d,j＝1.5hz,1h),8.16(d,j＝8.9hz,1h),8.10(d,j＝8.4hz,1h),7.81(dd,j＝9.5,6.9hz,3h),7.73–7.61(m,3h),7.53(d,j＝5.4hz,1h),6.66(s,1h),4.22(dt,j＝22.4,11.1hz,3h),4.03(q,j＝9.0hz,1h),3.41–3.12(m,3h),2.94(dd,j＝17.2,4.7hz,1h),2.72–2.58(m,1h),1.95(s,3h),1.52–1.36(m,4h),0.89–0.77(m,6h).
实施例4：
(3r,4r,5s)-4-乙酰胺基-5-((4-(二乙胺基)苄基)氨基)-3-(戊烷-3-氧基)环己烯-1-烯-1-羧酸乙酯(4)的制备
操作步骤同实施例1，所不同的是起始原料用的是4-二乙胺基苯甲醛。
得到产物为浅黄色油状物。收率：70.3％。
(3r,4r,5s)-4-乙酰胺基-5-((4-(二乙胺基)苄基)氨基)-3-(戊烷-3-氧基)环己烯-1-烯-1-羧酸(ia-1-4)的制备
操作步骤同实施例1，所不同的是起始原料用的是化合物4。
得到产物为白色固体，收率：66.8％。
1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.94(d,j＝9.0hz,1h),7.11(d,j＝8.6hz,2h),6.60(d,j＝8.7hz,2h),6.56(s,1h),4.02(d,j＝7.4hz,1h),3.76(dd,j＝17.8,10.7hz,3h),3.59(d,j＝12.7hz,1h),3.35–3.26(m,5h),2.91–2.81(m,1h),2.72(d,j＝13.1hz,1h),2.24–2.09(m,1h),1.86(s,3h),1.41(tq,j＝14.0,7.0hz,4h),1.06(t,j＝7.0hz,6h),0.83(t,j＝7.4hz,3h),0.79(t,j＝7.4hz,3h).
实施例5：
(3r,4r,5s)-4-乙酰胺基-5-((4-(1h-吡咯-1-基)苄基)氨基)-3-(戊烷-3-氧基)环己烯-1-烯-1-羧酸乙酯(5)的制备
操作步骤同实施例1，所不同的是起始原料用的是4-(1h-吡咯-1-基)苯甲醛。
得到产物为白色固体，收率：70.4％。
(3r,4r,5s)-4-乙酰胺基-5-((4-(1h-吡咯-1-基)苄基)氨基)-3-(戊烷-3-氧基)环己烯-1-烯-1-羧酸(ia-1-5)的制备
操作步骤同实施例1，所不同的是起始原料用的是化合物5。
得到产物为白色固体，收率：69.2％。
1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.05(d,j＝8.8hz,1h),7.66–7.50(m,4h),7.42–7.36(m,2h),6.64(s,1h),6.31–6.23(m,2h),4.18(d,j＝7.2hz,1h),4.08(q,j＝13.8,13.0hz,2h),3.93(q,j＝9.2hz,1h),3.35–3.06(m,3h),2.93–2.71(m,2h),1.92(s,3h),1.43(qt,j＝13.8,7.0hz,4h),0.87–0.77(m,6h).
实施例6：
4-(乙基(苯基)胺基)苯甲醛(6-1)的制备
将n-乙基苯胺(1.21g，10mmol)、4-溴苯甲醛(1.85g，10mmol)、碳酸铯(7.5g，20mmol)、醋酸钯(0.08g)、binap(0.16g)、甲苯(30ml)加入烧瓶，氮气保护，加热至110℃，搅拌12小时。将反应混合物加入150ml水中，用乙酸乙酯50ml提取3次，硫酸镁干燥，过滤，蒸除溶剂后进行快速柱层析分离得到浅黄色油状物即为化合物4-(乙基(苯基)胺基)苯甲醛(6-1)，收率：70.9％。
(3r,4r,5s)-4-乙酰胺基-5-((4-(乙基(苯基)胺基)苄基)氨基)-3-(戊烷-3-氧基)环己烯-1-烯-1-羧酸乙酯(6)的制备
操作步骤同实施例1，所不同的是起始原料用的是4-(乙基(苯基)胺基)苯甲醛。
得到产物为白色油状物。收率：73.7％。
(3r,4r,5s)-4-乙酰胺基-5-((4-(乙基(苯基)胺基)苄基)氨基)-3-(戊烷-3-氧基)环己烯-1-烯-1-羧酸(ia-1-6)的制备
操作步骤同实施例1，所不同的是起始原料用的是化合物6。
得到产物为白色固体，收率：76.5％。
1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.94(d,j＝9.1hz,1h),7.22(dt,j＝8.6,3.6hz,4h),6.93(d,j＝8.6hz,3h),6.79(d,j＝8.7hz,2h),6.54(s,1h),4.08(d,j＝8.1hz,1h),3.99–3.79(m,3h),3.65(q,j＝7.0hz,2h),3.29(p,j＝5.5hz,1h),3.19–3.10(m,1h),2.73(dd,j＝17.2,4.9hz,1h),2.50-2.30(m，2h),1.80(s,3h),1.33(dp,j＝19.0,6.9hz,4h),1.02(t,j＝7.0hz,3h),0.74(t,j＝7.4hz,3h),0.69(t,j＝7.4hz,3h).
实施例7：
4-(苯硫基)苯甲醛(7-1)的制备
将苯硫酚(2..2g，20mmol)、4-氟苯甲醛(2.48g，20mmol)、碳酸钾(5.52g，40mmol)、dmso30ml加入烧瓶，加热至120℃，搅拌12小时。将反应混合物加入150ml水中，用乙酸乙酯50ml提取3次，硫酸镁干燥，过滤，蒸除溶剂后进行快速柱层析分离得到浅黄色固体物即为化合物4-(苯硫基)苯甲醛(7-1)，熔点：56-58℃，收率：63.5％。
(3r,4r,5s)-4-乙酰胺基-3-(戊烷-3-氧基)-5-((4-(苯硫基)苄基)氨基)环己烯-1-烯-1-羧酸乙酯(7)的制备
操作步骤同实施例1，所不同的是起始原料用的是4-(苯硫基)苯甲醛。
得到产物为无色油状物。收率：69.4％。
(3r,4r,5s)-4-乙酰胺基-3-(戊烷-3-氧基)-5-((4-(苯硫基)苄基)氨基)环己烯-1-烯-1-羧酸(ia-1-7)的制备
操作步骤同实施例1，所不同的是起始原料用的是化合物7。
得到产物为白色固体，收率：73.6％。
1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.97(d,j＝8.6hz,1h),7.39(d,j＝7.9hz,2h),7.35–7.30(m,2h),7.29–7.22(m,5h),6.56(s,1h),4.08(d,j＝6.6hz,1h),4.03–3.86(m,2h),3.85–3.77(m,1h),3.44(s,1h),3.25–2.93(m,2h),2.72(d,j＝14.2hz,1h),2.36(s,1h),1.82(s,3h),1.35(tp,j＝13.7,6.9hz,4h),0.77(t,j＝7.4hz,3h),0.72(t,j＝7.4hz,3h).
实施例8：
(3r,4r,5s)-4-乙酰胺基-3-(戊烷-3-氧基)-5-((4-(苯磺酰基)苄基)氨基)环己烯-1-烯-1-羧酸乙酯(8)的制备
操作步骤同实施例1，所不同的是起始原料用的是4-(苯磺酰基)苯甲醛。
得到产物为白色油状物。收率：72.8％。
(3r,4r,5s)-4-乙酰胺基-3-(戊烷-3-氧基)-5-((4-(苯磺酰基)苄基)氨基)环己烯-1-烯-1-羧酸(ia-1-8)的制备
操作步骤同实施例1，所不同的是起始原料用的是化合物8。
得到产物为白色固体，收率：69.7％。
1hnmr(400mhz,methanol-d4)δ8.05–7.93(m,4h),7.70–7.60(m,3h),7.59–7.54(m,2h),6.81(s,1h),4.35(d,j＝13.5hz,1h),4.22(s,1h),4.18(d,j＝5.0hz,1h),4.10(dd,j＝10.8,8.2hz,1h),3.44(dp,j＝16.9,5.6hz,2h),2.97(dd,j＝17.4,5.3hz,1h),2.53(ddt,j＝15.1,9.8,2.4hz,1h),2.00(s,3h),1.51(dhept,j＝13.8,6.6hz,4h),0.90(d,j＝7.4hz,3h),0.86(d,j＝7.5hz,3h).
实施例9：
5-苯基噻吩-2-甲醛(9-1)的制备
将苯硼酸(2.42g，20mmol)、5-溴噻吩-2-甲醛(3.84g，20mmol)、碳酸钾(4.1g，30mmol)、四(三苯基膦)钯(0.08g)、dmso(30ml)加入烧瓶，氮气保护，加热至120℃，搅拌12小时。将反应混合物加入150ml水中，用乙酸乙酯50ml提取3次，硫酸镁干燥，过滤，蒸除溶剂后进行快速柱层析分离得到淡黄色油状物即为化合物5-苯基噻吩-2-甲醛(9-1)，收率：77.1％。
(3r,4r,5s)-4-乙酰胺基-3-(戊烷-3-氧基)-5-(((5-苯基噻吩基-2-基)甲基)氨基)环己烯-1-烯-1-羧酸乙酯(9)的制备
操作步骤同实施例1，所不同的是起始原料用的是5-苯基噻吩-2-甲醛。
得到产物为白色固体，收率：68.9％。
(3r,4r,5s)-4-乙酰胺基-3-(戊烷-3-氧基)-5-(((5-苯基噻吩基-2-基)甲基)氨基)环己烯-1-烯-1-羧酸乙酯(ia-1-9)的制备
操作步骤同实施例1，所不同的是起始原料用的是化合物9。
得到产物为白色固体，收率：79.6％。
1hnmr(400mhz,methanol-d4)δ7.98(s,1h),7.95(dd,j＝6.5,3.2hz,2h),7.49(dd,j＝5.1,1.7hz,3h),6.87(s,1h),4.74–4.60(m,2h),4.26(d,j＝7.8hz,1h),4.17(dd,j＝10.8,8.3hz,1h),3.64(td,j＝10.3,5.6hz,1h),3.45(p,j＝5.6hz,1h),3.09(dd,j＝17.2,5.3hz,1h),2.64(dd,j＝17.2,10.0hz,1h),2.07(s,3h),1.61–1.46(m,4h),0.95–0.90(m,3h),0.90–0.85(m,3h).
实施例10：
(3r,4r,5s)-4-乙酰胺基-5-(双(噻吩-3-基甲基)氨基)-3-(戊烷-3-氧基)环己烯-1-烯-1-羧酸乙酯(10)的制备
称取磷酸奥司他韦(0.41g,1mmol)、噻吩-3-甲醛(0.269g,2.4mmol)、氰基硼氢化钠(0.24g,4mmol)于20ml的乙醇溶液中，30℃搅拌5h(tlc检测反应完毕，展开剂：乙酸乙酯)。蒸除溶剂，加入20ml水，用20ml乙酸乙酯萃取三次，无水硫酸镁干燥，过滤，蒸除溶剂后进行快速柱层析分离得到油状物即为化合物(3r,4r,5s)-4-乙酰胺基-5-(双(噻吩-3-基甲基)氨基)-3-(戊烷-3-氧基)环己烯-1-烯-1-羧酸乙酯(10)，收率74.4％。
(3r,4r,5s)-4-乙酰胺基-5-(双(噻吩-3-基甲基)氨基)-3-(戊烷-3-氧基)环己烯-1-烯-1-羧酸乙酯(ia-2-1)的制备
操作步骤同实施例1，所不同的是起始原料用的是化合物10。
得到产物为白色固体，收率：73.0％。
1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.28(s,1h),7.78(d,j＝8.6hz,1h),7.43(dd,j＝4.8,3.0hz,2h),7.33–7.24(m,2h),7.01(d,j＝4.7hz,2h),6.55(s,1h),4.05–3.87(m,2h),3.69(d,j＝14.1hz,2h),3.53(d,j＝14.1hz,2h),2.85(td,j＝10.7,4.8hz,1h),2.51(s,2h),2.27–2.12(m,1h),1.91(s,3h),1.42(ddq,j＝18.9,13.6,6.9hz,4h),0.83(t,j＝6.8hz,3h),0.79(t,j＝7.4hz,3h).
实施例11：
(3r,4r,5s)-4-乙酰胺基-5-(((e)-3-(4-氟苯基)烯丙基)氨基)-3-(戊烷-3-氧基)环己烯-1-烯-1-羧酸乙酯(11)的制备
操作步骤同实施例1，所不同的是起始原料用的是(e)-3-(4-氟苯基)丙烯醛。
得到产物为无色油状物。收率：78.2％。
(3r,4r,5s)-4-乙酰胺基-5-(((e)-3-(4-氟苯基)烯丙基)氨基)-3-(戊烷-3-氧基)环己烯-1-烯-1-羧酸乙酯(ia-3-1)的制备
操作步骤同实施例1，所不同的是起始原料用的是化合物11。
得到产物为白色固体，收率：62.9％。
1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.24(d,j＝8.9hz,1h),7.46(q,j＝8.6hz,4h),7.37–7.24(m,1h),6.81(d,j＝15.9hz,1h),6.65(s,1h),6.44–6.30(m,1h),4.22(d,j＝8.3hz,1h),3.95–3.84(m,1h),3.77(ddt,j＝20.9,13.7,6.9hz,2h),3.50-3.20(3h),2.86(dd,j＝17.2,5.0hz,1h),2.60-2.40(1h),1.92(s,3h),1.42(tt,j＝13.3,6.9hz,4h),0.84(t,j＝7.4hz,3h),0.79(t,j＝7.4hz,3h).
实施例12：
(3r,4r,5s)-5-(2-([1,1’-联苯]-4-基)乙酰胺)-4-乙酰胺基-3-(戊烷-3-氧基)环己烯-1-烯-1-羧酸乙酯(12)的制备
称取磷酸奥司他韦(0.41g,1mmol)、2-([1,1'-联苯基]-4-基)乙酸(0.22g,1.2mmol)、hatu(0.45g,1.2mmol)于20ml二氯甲烷和5ml三乙胺溶液中，30℃搅拌8h(tlc检测反应完毕展开剂：乙酸乙酯)。蒸除溶剂，加入30ml水，用30ml乙酸乙酯萃取三次，无水硫酸镁干燥，过滤，蒸除溶剂后进行快速柱层析分离得到白色固体即为化合物(3r,4r,5s)-5-(2-([1,1’-联苯]-4-基)乙酰胺)-4-乙酰胺基-3-(戊烷-3-氧基)环己烯-1-烯-1-羧酸乙酯(12)，收率：82.6％。
(3r,4r,5s)-5-(2-([1,1’-联苯]-4-基)乙酰胺)-4-乙酰胺基-3-(戊烷-3-氧基)环己烯-1-烯-1-羧酸(ib-1-1)的制备
操作步骤同实施例1，所不同的是起始原料用的是化合物12。
得到产物为白色固体，收率：78.6％。
1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.64(s,1h),8.03(d,j＝8.8hz,1h),7.79(d,j＝9.1hz,1h),7.64(d,j＝7.5hz,2h),7.58(d,j＝7.9hz,2h),7.46(t,j＝7.5hz,2h),7.35(t,j＝8.5hz,3h),6.61(s,1h),4.05(d,j＝7.5hz,1h),3.90(dt,j＝15.2,7.8hz,1h),3.79(q,j＝9.2hz,1h),3.50–3.35(m,3h),2.50–2.39(m,1h),2.20(dd,j＝17.1,10.5hz,1h),1.64(s,3h),1.40(tp,j＝14.6,7.1hz,4h),0.83(t,j＝7.2hz,3h),0.75(t,j＝7.2hz,3h).
实施例13：
(3r,4r,5s)-4-乙酰胺基-5-肉桂酰胺-3-(戊烷-3-氧基)环己烯-1-烯-1-羧酸乙酯(13)的制备
操作步骤同实施例12，所不同的是起始原料用的是化合物肉桂酸。
得到产物为白色固体，收率：84.6％。
(3r,4r,5s)-4-乙酰胺基-5-肉桂酰胺-3-(戊烷-3-氧基)环己烯-1-烯-1-羧酸(ib-2-1)的制备
操作步骤同实施例1，所不同的是起始原料用的是化合物13。
得到产物为白色固体，收率79.4％。
1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.59(s,1h),7.98(d,j＝8.9hz,1h),7.84(d,j＝9.2hz,1h),7.56(d,j＝7.2hz,2h),7.47–7.32(m,4h),6.65(s,1h),6.60(d,j＝15.8hz,1h),4.13(d,j＝8.1hz,1h),4.06(tt,j＝9.9,5.2hz,1h),3.83(t,j＝9.0hz,1h),3.41(p,j＝5.5hz,1h),2.57(dd,j＝17.6,5.1hz,1h),2.29–2.18(m,1h),1.74(s,3h),1.42(th,j＝13.8,7.0hz,4h),0.85(t,j＝7.3hz,3h),0.77(t,j＝7.3hz,3h).
实施例14：
(3r,4r,5s)-5-([1,1’-联苯]-4-磺酰胺)-4-乙酰胺基-3-(戊烷-3-氧基)环己烯-1-烯-1-羧酸乙酯(14)的制备
称取磷酸奥司他韦(0.41g,1mmol)、[1,1'-联苯基]-4-磺酰氯(0.25g,1mmol)、于20ml二氯甲烷和5ml三乙胺溶液中，25-30℃搅拌8h(tlc检测反应完毕展开剂：乙酸乙酯)。蒸除溶剂，加入30ml水，用30ml乙酸乙酯萃取三次，无水硫酸镁干燥，过滤，蒸除溶剂后进行快速柱层析分离得到白色固体即为化合物(3r,4r,5s)-5-([1,1’-联苯]-4-磺酰胺)-4-乙酰胺基-3-(戊烷-3-氧基)环己烯-1-烯-1-羧酸乙酯(12)，收率：84.7％。
(3r,4r,5s)-5-([1,1’-联苯]-4-磺酰胺)-4-乙酰胺基-3-(戊烷-3-氧基)环己烯-1-烯-1-羧酸(14)(ib-3-1)的制备
操作步骤同实施例1，所不同的是起始原料用的是化合物14。
得到产物为白色固体，收率：78.6％。
1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.56(s,1h),7.92–7.83(m,4h),7.77–7.66(m,4h),7.52(d,j＝15.0hz,2h),7.44(t,j＝7.3hz,1h),6.55(s,1h),4.10(d,j＝8.2hz,1h),3.67(q,j＝9.0hz,1h),3.35–3.21(m,2h),2.31(dd,j＝17.6,5.3hz,1h),2.17(dd,j＝17.7,10.3hz,1h),1.69(s,3h),1.38(ddp,j＝20.8,13.7,6.9hz,4h),0.81(t,j＝7.4hz,3h),0.76(t,j＝7.4hz,3h).
实施例15：
(3r,4r,5s)-5-(((z)-[1,1'-联苯基]-4-基(胺基)亚甲基)胺)-4-乙酰胺基-3-(戊烷-3-氧基)环己烯-1-烯-1-羧酸乙酯氢碘酸盐
称取奥司他韦(0.62g,2mmol)、[1,1'-联苯基]-4-碳酰亚胺基硫代氧酸甲酯氢碘酸盐(0.71g,2mmol)、于30ml乙醇中，25-30℃搅拌4h(tlc检测反应完毕展开剂：乙酸乙酯)。蒸除溶剂，加入30ml水，用30ml乙酸乙酯萃取3次，无水硫酸镁干燥，过滤，蒸除溶剂后进行快速柱层析分离得到白色固体即为化合物(3r,4r,5s)-5-(((z)-[1,1'-联苯基]-4-基(胺基)亚甲基)胺)-4-乙酰胺基-3-(戊烷-3-氧基)环己烯-1-烯-1-羧酸乙酯氢碘酸盐(15)，收率：67.2％。
(3r,4r,5s)-5-(((z)-[1,1'-联苯基]-4-基(胺基)亚甲基)胺)-4-乙酰胺基-3-(戊烷-3-氧基)环己烯-1-烯-1-羧酸(ic-1-1)
操作步骤同实施例1，所不同的是起始原料用的是化合物15。
得到产物为白色固体，收率：62.9％。
1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.65(s,1h),9.60(s,1h),9.26(s,1h),7.90(d,j＝8.1hz,2h),7.77(t,j＝5.9hz,4h),7.52(t,j＝7.4hz,2h),7.46(d,j＝7.2hz,1h),6.48(s,1h),4.36(s,2h),3.95(q,j＝9.2hz,1h),2.76(d,j＝14.1hz,1h),2.59(d,j＝9.3hz,1h),1.89(s,1h),1.85(s,3h),1.56–1.32(m,4h),0.86(t,j＝7.2hz,3h),0.81(t,j＝7.2hz,3h).
实施例16：
(3r,4r,5s)-5-((z)-2-([1,1'-联苯基]-4-基甲基)胍基)-4-乙酰胺基-3-(戊烷-3-氧基)环己烯-1-烯-1-羧酸乙酯(16)的制备
称取奥司他韦(0.62g,2mmol)、n-甲酸叔丁酯-(z)-n'-([1,1'-联苯]-4-基甲基)–s-甲基异硫脲(0.71g,2mmol)、于30ml干燥乙腈和5ml三乙胺中，30℃搅拌16h(tlc检测反应完毕展开剂：乙酸乙酯)。蒸除溶剂，加入30ml水，用30ml乙酸乙酯萃取3次，稀盐酸洗涤无水硫酸镁干燥，过滤，蒸除溶剂后得到浅黄色油状物，直接用于下一步。
将上一步所得的油状物溶于15ml二氯甲烷，加入15ml三氟乙酸，室温搅拌6小时。蒸除溶剂得到浅黄色油状物(16)，直接用于下一步。
(3r,4r,5s)-5-((e)-2-([1,1'-联苯基]-4-基甲基)胍基)-4-乙酰胺基-3-(戊烷-3-氧基)环己烯-1-烯-1-羧酸(id-1-1)的制备
此步骤操作步骤同实施例1第二步，所不同的是起始原料用的是上一步的浅黄色油状物。
得到产物为白色固体，收率：25.7％。
1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.77(s,1h),8.06(d,j＝8.4hz,1h),7.70–7.65(m,4h),7.60(s,1h),7.53–7.44(m,3h),7.39(dd,j＝7.7,4.0hz,3h),6.65(s,1h),4.44(d,j＝5.7hz,2h),4.13(s,1h),3.80(d,j＝8.2hz,2h),3.5-3.2(m,2h),2.67(d,j＝15.6hz,1h),2.30(dd,j＝16.3,7.9hz,1h),1.79(s,3h),1.42(th,j＝14.0,7.0hz,4h),0.82(dt,j＝19.8,7.4hz,6h).
实施例17：
目标化合物的体外抗流感病毒活性测试
测试材料和方法：
(1)h5n1、h5n2、h5n6、h5n8流感病毒毒株：由山东省农科院家禽研究所提供。
(2)鸡胚成纤维细胞(cef)：由山东省农科院家禽研究所提供。
(3)样品处理：样品临用前溶于dmso配成适当浓度，并用维持液稀释，各6个稀释度。
(4)阳性对照药：盐酸奥司他韦羧酸、扎那米韦、利巴韦林、盐酸金刚烷胺、盐酸金刚乙胺。
(5)测试方法：样品稀释后与流感病毒溶液混合，经过一段时间后接毒于鸡胚成纤维细胞，孵育后测试各浓度混合液和空白溶液的滴度，计算出抑制率及ec50。
实验方法：
首先测定各新型奥司他韦衍生物衍生物的cc50(使得50％的cef细胞发生病变时的药物浓度)。测定方法：待试药物用dmso配成2000μm的母液，实验时用细胞维持液稀释为相应浓度。在96孔板中已长成单层的或细胞cef细胞，移除培养液，分别用含有不同浓度稀释药物的细胞维持液代替。每个浓度设3个重复，同时设正常细胞对照组。置于37℃、5％co2培养箱里培养72h。倒置显微镜下观察不同浓度药物处理后的细胞毒性情况，并用mts比色法测定细胞存活率。计算药物的cc50。
细胞存活率＝(药物组平均od值/细胞对照组平均od值)×100％
取生长期的cef细胞接种于96孔板，于37℃、5％co2的培养箱中培养长成单层后，弃去培养液，洗两次，加入混合测试化合物的100tcid50的病毒悬液200μl，在37℃、5％co2的培养箱中孵育72h后。显微镜目测药物组细胞的病变效应。整个实验过程设定不做任何处理的细胞对照组，不加入试验药物的病毒对照组。将观察完毕的细胞培养板上清液移除，pbs洗涤两次，用mts比色法测定并计算病毒抑制率，计算药物的ec50。。
病毒抑制率＝(药物处理组(药物+病毒)od-病毒对照组od)/(细胞对照组od-病毒对照组od)
按照上述实验方法对合成的部分新型奥司他韦衍生物衍生物进行了细胞水平的抗h5n1、h5n2、h5n6、h5n8的活性筛选，各新型奥司他韦衍生物衍生物的cc50均大于100μm。部分新型奥司他韦衍生物衍生物的活性结果如表1所示。
表1部分奥司他韦衍生物和阳性对照药物的结构及其体外抗流感病毒活性(cef细胞)
注：aec50:保护50％感染禽流感病毒的cef细胞免于细胞病变的化合物浓度；a代表化合物ec50<0.5μm，b代表化合物ec50的范围为0.5-5μm，c代表化合物ec50的范围为5-50μm，c代表化合物ec50>50μm；oseltamivircarboxylate、zanamivir、ribavirin、1-adamantanaminehydrochloride、rimantadinehydrochloride分别代表对照药物奥司他韦羧酸、扎那米韦、利巴韦林、盐酸金刚烷胺和盐酸金刚乙胺。