一种苦荞DNA的提取方法与流程

文档序号:12411804阅读:465来源:国知局

本发明属于生物技术领域,具体涉及一种苦荞DNA的提取方法。



背景技术:

一般而言,不同植物中的成分和含量差异较大,适合于某一植物的DNA提取方法往往不能用于另一种植物DNA的提取。在此背景下,专利号为201310358777.0的中国专利对通用的植物DNA提取方法进行了改进,获得了适于假俭草DNA提取的方法。

除此之外,目前常规的植物DNA提取方法还存在提取时间长,需加温的缺点。专利号为201410188782.6对此进行了改善,其通过改进CTAB提取缓冲液并将其与常规的提取试剂(氯仿-异戊醇)连续加入至棉花粉末中,实现了无需加热和缩短提取时间的技术效果。

然而,除了不同植物间的提取方法不同之外,现有技术还存在需进行多次除杂的技术缺点。例如,ZL 201410188782.6虽然实现了将裂解膜和去蛋白质等杂质的两步操作改为一步且不需要加热处理,从而缩短了提取时间的技术效果,但其仍然需要进行后续的多次除杂操作,每次除杂时间接近半小时。

苦荞起源于我国西南部,是食药兼用的食物源,具有极高的食用和药用价值,对其进行深入研究有助于相关产业的发展。不过,由于苦荞中含有的大分子物质很多,对其进行DNA提取时,需对提取方法进行优化处理。对此,《一种适于PCR扩增的荞麦DNA大量提取及纯化方法》和《云南荞麦野生种DNA的提取与RAPD反应体系的构建》等报道进行了相应的研究。不过这些报道均存在上述缺点,未能实现快速高效的提取效果。



技术实现要素:

针对现有技术的缺点,本发明的目的在于提供一种苦荞DNA的提取方法,该方法包括如下步骤:

将苦荞粉碎研磨成粉,加入提取液并轻微混匀,置于冰浴下15~30分钟,离心,取上清,进行沉淀处理,即得DNA;

所述提取液的溶液为水,溶质的组成配方为:

如本发明的实施例所示,本发明无需进行额外除杂便可以获得高纯度的DNA,可以至少节省半小时左右的除杂时间。

另外,本发明还发现,利用本发明的方法还可以实现如ZL 201410188782.6的技术效果,同样无需将裂解和除蛋白的步骤分开进行,也无需进行加热处理。

为了便于处理,在对苦荞进行粉碎研磨时,可以于液氮条件下进行。

对苦荞进行粉碎研磨时,取其叶进行。

优选的,在冰浴下的放置时间为18~25分钟。作为最佳方案,在冰浴下的放置时间为20分钟。

所述沉淀处理包括加入乙醇水溶液或者乙醇。

优选的,所述乙醇水溶液中乙醇浓度为95%(V/V)或者70%(V/V)。作为最佳方案,所述乙醇水溶液中乙醇浓度为70%(V/V)。

本发明的有益效果:

本发明获得了一种适用于苦荞DNA快速提取的方法,该方法无需额外的除杂步骤,也无需加热处理,直接在冰浴中完成提取过程,具有一定的应用前景。

附图说明

图1为本发明实施例所得DNA的琼脂糖凝胶电泳结果图,其中,泳道1为实施例1所得DNA,泳道2为实施例2所得DNA,泳道3为实施例3所得DNA,泳道4为实施例4所得DNA,泳道5为实施例5所得DNA。

具体实施方式

下面通过实施例对本发明进行具体描述,有必要在此指出的是以下实施例只是用于对本发明进行进一步的说明,不能理解为对本发明保护范围的限制,该领域的技术熟练人员根据上述发明内容所做出的一些非本质的改进和调整,仍属于本发明的保护范围。

实施例1

配制DNA提取液,提取液的溶液为水,溶质的组成配方为:

取苦荞叶于液氮环境下进行粉碎研磨,将少量粉末(刚漫过圆锥管底)置于1.5ml的EP管中,加入上述提取液0.6ml,轻微的反复倒置3~5次,在此过程中,避免溶液震荡,然后置于冰浴下20分钟,离心,小心吸取最上层的上清液,弃掉其余部分。向所得上清液中加入预冷过的70%(V/V)乙醇水溶液,离心,用超纯水溶解DNA,即得。

实施例2

除了在冰浴下的静置时间为15分钟,所用乙醇水溶液的浓度为95%(V/V)之外,其余与实施例1一致。

实施例3

除了在冰浴下的静置时间为30分钟,将乙醇水溶液替换为乙醇之外,其余与实施例1一致。

实施例4

除了在冰浴下的静置时间为25分钟之外,其余与实施例1一致。

实施例5

除了在冰浴下的静置时间为18分钟之外,其余与实施例1一致。

实验例1

对实施例1-5提取的DNA利用琼脂糖凝胶电泳法进行检测,结果如图1所示,所得DNA条带清晰。

实验例2

对实施例1-5提取的DNA进行质量检测。如表1所示,利用本发明方法可以得到高纯度的DNA。

表1

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