一种检测JAG2基因SNP位点rs741859基因型的试剂盒及其制备方法与流程

技术特征：

1.一种检测JAG2基因SNP位点rs741859基因型的试剂盒：其特征在于包括：标准品、引物、含有荧光染料的qPCR扩增试剂；所述标准品为包含JAG2 rs741859(c*1053G>A)位点的野生型DNA序列和包含JAG2 rs741859(c*1053G>A)位点的纯合突变型DNA序列；所述引物用于扩增标准品和待检测样品。

2.根据权利要求1所述的检测JAG2基因SNP位点rs741859基因型的试剂盒，其特征在于：所述野生型DNA序列为序列W；所述纯合突变型DNA序列为序列M。

3.根据权利要求2所述的检测JAG2基因SNP位点rs741859基因型的试剂盒，其特征在于：所述标准品为连接有序列W的质粒和连接有序列M的质粒。

4.根据权利要求2所述的检测JAG2基因SNP位点rs741859基因型的试剂盒，其特征在于：所述引物为JAG2-F和JAG2-R。

5.根据权利要求1所述的检测JAG2基因SNP位点rs741859基因型的试剂盒，其特征在于：所述含有荧光染料的qPCR扩增试剂为生工生物工程(上海)股份有限公司所产的含EvaGreen的Green-2-Go qPCR Mastermix试剂盒。

6.一种如权利要求1所述的检测JAG2基因SNP位点rs741859基因型的试剂盒的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

1)引物设计与合成

根据JAG2 rs741859基因序列，应用Primer express 3软件、Primer Premier 5软件以及Oligo 7软件，设计一组引物；

2)制备标准品

A、合成含有JAG2 rs741859(c*1053G>A)位点的野生型DNA序列和纯合突变型DNA序列；

B、将野生型DNA序列和纯合突变型DNA序列分别与质粒连接；将连接后的质粒导入细菌中；培养细菌并且获得阳性克隆；

C、扩大培养步骤B所获得的阳性克隆，提取质粒得到标准品；

3)选购或配制含有荧光染料的qPCR扩增试剂。

7.根据权利要求6所述的检测JAG2基因SNP位点rs741859基因型的试剂盒的制备方法，其特征在于步骤B中所述的质粒为pMD18-T质粒。

8.根据权利要求7所述的检测JAG2基因SNP位点rs741859基因型的试剂盒的制备方法，其特征在于：所述野生型DNA序列为序列W；所述纯合突变型DNA序列为序列M。

9.根据权利要求8所述的检测JAG2基因SNP位点rs741859基因型的试剂盒的制备方法，其特征在于：步骤B中将序列W或序列M分别与pMD18-T质粒连接，所采用的连接体系为：

连接的反应时间为10-16小时，反应温度为16℃。

10.根据权利要求6所述的检测JAG2基因SNP位点rs741859基因型的试剂盒的制备方法，其特征在于：步骤C的具体操作为将阳性克隆接种于含有氨苄抗性的LB液体培养基中，温度为37℃搅拌速度为220rpm培养14-16h；再从菌体中提取质粒获得标准品。