利用逆流色谱从火龙果中快速分离多糖的方法与流程

文档序号:12639694阅读:来源:国知局

技术特征:

1.利用逆流色谱从火龙果中快速分离多糖的方法,其特征是包括以下步骤:

(1)将火龙果去皮后切片、冷冻干燥制成含水量≤0.05%的火龙果干片,将火龙果干片粉碎后沸水浸提2~3h;

(2)将浸提液冷却至室温后过滤,滤液依次进行浓缩、脱色素、脱蛋白,并再次进行浓缩,得浓缩液;

(3)在浓缩液中加入无水乙醇中进行沉淀,所得的沉淀物进行冷冻干燥,获得火龙果粗多糖;

(4)取0.25~0.35g火龙果粗多糖溶于25±5ml的双水相溶剂系统的下相中,并注入逆流色谱;

所述双水相溶剂系统由以下质量含量的成分组成:4~6%聚乙二醇6000、16~20%的聚乙烯吡咯烷酮、7~9%的磷酸二氢钾、3~5%的硫酸钾,以及作为余量的水;

(5)、每500mL的双水相溶剂系统的上相中分别加入5.0mL 0.05M HCl溶液、5.0mL0.15M HCl溶液、2.78mL 0.01M NaOH溶液,从而分别作为流动相Ⅰ、流动相Ⅱ、流动相Ⅲ;

分别取300±30mL的流动相Ⅰ、流动相Ⅱ、流动相Ⅲ依次进行洗脱,流动相Ⅰ、流动相Ⅱ、流动相Ⅲ的流速均为3.0±0.2mL/min;

收集每种流动相下相同比移值的洗脱液,将收集的3类洗脱液分别经浓缩、透析、冷冻干燥,从而分别获得3种火龙果多糖。

2.根据权利要求1所述的利用逆流色谱从火龙果中快速分离多糖的方法,其特征是:

所述步骤(1)中:粉碎至过200~300目筛,浸提时的液料质量比为35~50L/1kg;

浸提后所得的残渣重复上述沸水浸提2~3次,合并所有的浸提液。

3.根据权利要求1或2所述的利用逆流色谱从火龙果中快速分离多糖的方法,其特征是所述步骤(2)为:将滤液先浓缩至原体积的1/10~1/5,然后加入占浓缩液0.002~0.003重量倍的活性碳均匀混合,静置3~5h吸附色素,过滤,所得的滤液Ⅱ中加入占滤液Ⅱ0.01倍体积的三氯乙酸进行混合、震荡5~10分钟,离心,所得的上清液浓缩至为原体积的1/5~1/3;得浓缩液。

4.根据权利要求3所述的利用逆流色谱从火龙果中快速分离多糖的方法,其特征是所述步骤(3)为:在浓缩液中加入2~5体积倍的无水乙醇震荡3~5分钟,然后于4±1℃醇析24±2h,离心,所得的沉淀物冷冻干燥,得火龙果粗多糖。

5.根据权利要求4所述的利用逆流色谱从火龙果中快速分离多糖的方法,其特征是:

所述双水相溶剂系统由以下质量含量的成分组成:5%聚乙二醇6000、18%的聚乙烯吡咯烷酮、8%的磷酸二氢钾、4%的硫酸钾,65%水。

6.根据权利要求3所述的利用逆流色谱从火龙果中快速分离多糖的方法,其特征是所述步骤(5)中:

用薄层层析法进行检测,收集每种流动相下相同比移值的洗脱液;

浓缩至原体积的1/4~1/6;

所述透析为经8000~14000Da透析膜透析。

7.根据权利要求3所述的利用逆流色谱从火龙果中快速分离多糖的方法,其特征是步骤(1)的切片为:将果肉切片至厚度3~5mm,冷冻干燥为:于-50~-55℃的温度、50~100Pa的真空度进行干燥至水分含量≤0.05%。

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