一种家蚕BmBDV的LAMP‑LFD快速试剂盒及检测方法与流程

文档序号:12779152阅读:来源:国知局

技术特征:

1. 一种家蚕BmBDV病毒LAMP-LFD检测试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括BmBDV病毒 LAMP预反应液:所述预反应液包括引物BmBDV-FIP和BmBDV-BIP、引物 BmBDV-F3和BmBDV-B3、引物BmBDV-LF和BmBDV-LB、 探针BmBDV-FITC-PROBE;

其中所述引物BmBDV-FIP如SEQ ID NO:3所示,引物BmBDV-BIP如SEQ ID NO:4所示,引物 BmBDV-F3如SEQ ID NO:1所示,引物BmBDV-B3如SEQ ID NO:2所示,引物BmBDV-LF如SEQ ID NO:5所示,引物 BmBDV-LB如SEQ ID NO:6所示, 探针BmBDV-FITC-PROBE如如SEQ ID NO:7所示。

2. 根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒中各引物和探针含量为:1.5~2.0mM 引物BmBDV-FIP和BmBDV-BIP,0.2~0.4mM引物 BmBDV-F3和BmBDV-B3,0.2~0.5mM 引物BmBDV-LF和BmBDV-LB,0.05~0.1μM 探针BmBDV-FITC-PROBE。

3.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,

所述LAMP预反应液还包括:20~40mM Tris-HCl (pH8.0~9.0), 10~15mM 氯化钾, 15~20mM 硫酸铵, 8~10mM 硫酸镁, 0.1~0.2% Triton X-100,1.2~1.4mM dNTP, 6-8U Bst DNA 聚合酶大片段(New England Biolabs),0.6~0.8M 甜菜碱。

4.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒中还配有LFD试纸用的缓冲液、阳性对照样品、阴性对照样品以及LAMP核酸反应管中添加有稳定液,其中LFD试纸用的缓冲液为1×TAE缓冲液,阳性对照样品为BmBDV病毒基因组DNA,阴性对照样品为无核酸的去离子水,核酸反应稳定液为液体石蜡油。

5.权利要求1-5任一项所述试剂盒用于家蚕BmBDV病毒信息的获取。

6.一种家蚕BmBDV病毒信息的获取方法,所述方法采用权利要求1所述的试剂盒进行检测,按照下述步骤进行:

S1. 家蚕样品中BmBDV基因组DNA的快速提取:

S2. 家蚕BmBDV病毒LAMP扩增:

(1)根据待检样品数,配制所需的预反应液,在预反应液中加入2~5μL DNA模板,再加入适量的去离子水,使反应体系总体积为25μL;

(2)标记清楚后,将检测反应管置于61-65℃,反应30~60min,80℃灭活;

S3.家蚕BmBDV病毒LFD试纸检测:

(1)取家蚕BmBDV病毒LAMP扩增产物6~10μL,置于LFD试纸加样孔;

(2)在LFD试纸加样孔一端,滴加50~100μL缓冲液,待缓冲液移动到试纸的另一端,表明反应基本结束,根据显色条带情况判断LAMP-LFD检测的结果。

7.根据权利要求6所述的方法,其特征在于,步骤(2)中所述反应温度为62℃,反应时间为30min。

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