本发明属于药物化学技术领域，主要涉及一种具有抗肿瘤活性的2h-苯并[b][1,4]噁嗪并吡唑化合物的制备方法。
背景技术：
杂环化合物是有机化合物中最庞大的一类，约占65％以上，而且在自然界分布也十分广泛，其化学结构千变万化，各自有着特殊的性质和重要用途。苯并噁嗪类物质(benzoxazinoid,bx)是一类广泛存在于乔本科植物中的次生代谢物，具有广谱抗病抗虫活性。这些化合物以丁布为代表，是研究昆虫和植物相互关系的重要化合物。基于苯并噁嗪化合物的重要作用，近年来人们对这类化合物进行了广泛的研究，合成了不少具有生物活性的化合物。吡唑拥有多种生理作用，包括止痛、抗发炎、退烧、抗心律失常、镇静、松弛肌肉、精神兴奋、抗痉挛、一元胺氧化酶抑制剂，抗糖尿病和抗菌。吡唑可作为某些医药、农药的中间体，在医药、农药的研究开发中占有十分重要的地位。吡唑类化合物因其作用谱广、药效强烈等特点而受到越来越多的关注。在医药应用上吡唑类化合物对许多的疾病具有疗效；在农药应用上，吡唑类化合物具有杀虫、杀菌和除草活性，并且表现出高效、低毒和结构多样性。因此，吡唑类药物具有广阔的研究和开发前景。吡唑也可作为某些光敏材料单体的侧链，具有广泛的应用。结合两种结构的优势，我们设计合成出一系列新的2h-苯并[b][1,4]噁嗪并吡唑化合物，并对其进行了抗肿瘤活性测试。
技术实现要素：
本发明解决的技术问题是提供了一种合成方法简单，分子结构新颖，具有抗肿瘤活性的2h-苯并[b][1,4]噁嗪并吡唑化合物及其制备方法。
本发明为解决上述技术问题采用如下技术方案，一种新型的具有抗肿瘤活性的2h-苯并[b][1,4]噁嗪并吡唑化合物的制备方法，其特征在于具体步骤为：
a、邻氨基苯乙基溴与一氧化碳，在醋酸钯作为催化剂，碳酸钠作为碱性物质，甲苯作为溶剂，反应得到苯并哌啶酮。
b、苯并哌啶酮在劳森试剂作用下，甲苯作为溶剂，反应得到苯并哌啶硫酮。
c、苯并哌啶硫酮在乙二胺作用下经过烯醇式转变得到化合物3,4-二氢化氮杂萘-2-硫醇
d、3,4-二氢化氮杂萘-2-硫醇与溴代丙醛在三乙胺作用下得到
e、
f、
g、
h、
进一步限定，步骤a的具体过程为：在高压釜中，把邻氨基苯乙基溴、一定量的醋酸钯和一定量的碳酸钠加入甲苯中，用氮气置换反应釜中的气体后，在真空条件下通入一氧化碳使反应釜中的压力达到0.2mpa；缓慢升高温度至50℃，反应4h后tlc监控原料反应完全，过滤反应液，在真空条件下蒸除溶剂，剩余物加入二氯甲烷中，再用纯净水洗涤三次，有机相经无水硫酸钠干燥后，蒸除溶剂得到苯并哌啶酮。
进一步限定，步骤b的具体过程为：在反应瓶中加入苯并哌啶酮、劳森试剂和苯酚，加热回流10h，把反应液加入冰水中冷却，用二氯甲烷萃取三次，合并有机相，减压蒸馏出二氯甲烷，得到苯并哌啶硫酮。
进一步限定，步骤c的具体过程为：在反应瓶中，把苯并哌啶硫酮加入丙酮中，再加入一定量的二乙胺，加入回流一点时间后，tlc监控原料反应完全，蒸除溶剂得到化合物3,4-二氢化氮杂萘-2-硫醇。
进一步限定，步骤d的具体过程为：在反应瓶中，把3,4-二氢化氮杂萘-2-硫醇加入到dmf中，再加入一定量的三乙胺和溴代丙醛，升温至110℃反应1h，tlc监控原料反应完全，把反应液倒入冰水中，有大量固体析出，抽滤反应液，滤饼为纯品化合物
进一步限定，步骤e的具体过程为：在反应瓶中，把
进一步限定，步骤f的具体过程为：在反应瓶中，把
进一步限定，步骤a的具体过程为：在高压釜中，把
进一步限定，步骤n的具体过程为：在反应瓶中，把
本发明所述的具有抗肿瘤活性的2h-苯并[b][1,4]噁嗪并吡唑化合物的制备方法中的合成路线为：
本发明合成了一系列具有抗肿瘤活性的2h-苯并[b][1,4]噁嗪并吡唑化合物，发现该化合物对肺癌细胞a549具有较好的抑制作用。
具体实施方式
以下通过实施例对本发明的上述内容做进一步详细说明，但不应该将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例，凡基于本发明上述内容实现的技术均属于本发明的范围。
实施例1
在高压釜中，把邻氨基苯乙基溴20g(0.1mol)、醋酸钯2g和碳酸钠20g加入甲苯100ml中，用氮气置换反应釜中的气体后，在真空条件下通入一氧化碳使反应釜中的压力达到0.2mpa；缓慢升高温度至50℃，反应4h后tlc监控原料反应完全，过滤反应液，在真空条件下蒸除溶剂，剩余物加入二氯甲烷200ml中，再用纯净水50ml洗涤三次，有机相经无水硫酸钠干燥后，蒸除溶剂得到苯并哌啶酮13g
实施例2
在反应瓶中加入苯并哌啶酮15g(0.1mol)、劳森试剂30g和甲苯100ml，加热回流10h，把反应液加入冰水中冷却，用二氯甲烷100ml萃取三次，合并有机相，减压蒸馏出二氯甲烷，得到苯并哌啶硫酮15g
实施例3
在反应瓶中，把苯并哌啶硫酮16.3g加入丙酮200ml中，再加入二乙胺50ml，加热回流一段时间后，tlc监控原料反应完全，蒸除溶剂得到化合物3,4-二氢化氮杂萘-2-硫醇16g
实施例4
在反应瓶中，把3,4-二氢化氮杂萘-2-硫醇16g加入到dmf100ml中，再加入三乙胺30ml和溴代丙醛12g(0.1mol)，升温至110℃反应1h，tlc监控原料反应完全，把反应液倒入冰水中，有大量固体析出，抽滤反应液，滤饼为纯品化合物
实施例5
在反应瓶中，把
实施例6
在反应瓶中，把
实施例7
在高压釜中，把
实施例8
反应瓶中，把
实施例9
抗肿瘤活性测试
收集生长期肺癌细胞a549，以mts法测定一下化合物的抗癌活性，将细胞以适当浓度(每毫升4×104个细胞)加到96孔细胞培养板中(含10％胎小牛血清得培养液配成单个细胞悬液)，培养24小时后，在37℃、体积浓度为5％的co2条件下与不同浓度的化合物作用72小时，然后将mts(最终质量浓度2mg/ml)和dms(最终摩尔浓度30μm)的混合物直接加入含细胞的培养基中，继续置培养箱孵育4h。作用4h后，弃去上清液，每孔加入150μldmso，振荡，细胞存活率通过其对mts作用的代谢物在酶联免疫监测仪490nm波长下的吸收率测定。
初步生物活性测试表明，该类化合物苯磺酸上的邻位取代基为吸电子基团比给电子基团对肺癌细胞a549的抑制作用要好。
综上所述，本发明提供了一种具有抗肿瘤活性的2h-苯并[b][1,4]噁嗪并吡唑化合物及其制备方法，这是该类化合物该用途的首次发现，具有重大的研发潜力。
以上实施例描述了本发明的基本原理、主要特征及优点，本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明原理的范围下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进均落入本发明保护的范围内。