本发明涉及含吡唑啉结构的噻吩并嘧啶类化合物，其几何异构体及其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物或前药，它们的制备方法以及含有所述化合物的药物组合物。
背景技术：
肿瘤是机体在各种致瘤因素作用下，局部组织的细胞在基因水平上失去对其生长的正常调控导致异常增生与分化而形成的新生物。新生物一旦形成，不因病因消除而停止生长，他的生长不受正常机体生理调节，而是破坏正常组织与器官，这一点在恶性肿瘤尤其明显。与良性肿瘤相比，恶性肿瘤生长速度快，呈浸润性生长，易发生出血、坏死、溃疡等，并常有远处转移，造成人体消瘦、无力、贫血、食欲不振、发热以及严重的脏器功能受损等，最终造成患者死亡。由于pi3k通路，在肿瘤的发生和发展中具有重要的作用，因此以pi3k/akt信号通路中关键分子为靶点的小分子抑制剂已成为当前抗肿瘤药物研究的热点，近年来，随着pi3k通路抑制剂的深入研究，越来越多的相关抑制剂被报道，其中一批脂肪环并嘧啶类化合物被证实具有很好的pi3k/mtor抑制活性以及良好的体内、药代动力学活性。文献报道的gdc-0941(如下结构式所示)属于噻吩并嘧啶类化合物，是由genentech公司开发的口服pi3k抑制剂，目前已完成i期临床试验。gdc-0941对p110α和δ的ic50值均达到3nm，为p110β、γ的10倍和25倍，具有良好的选择性。临床前研究表明，gdc-0941对多种人肿瘤细胞株表现出显著的抑制增殖作用，其ic50值达0.009ug/ml。课题组前期工作中以gdc-0941为先导化合物，进一步改造得到的化合物a也表现出了良好的抗肿瘤活(如下结构式所示)，文献(synthesis,characterizationandpharmacologicalstudyof4,5-dihydropyrazolinescarryingpyrimidinemoiety[j].europeanjournalofmedicinalchemistry,55(2012)467-474.)和(novel3,5-diarylpyrazolinesashumanbioorganic&medicinalchemistryletters14(2004)2715–2717)报道了一系列新颖的吡唑啉衍生物，其中化合物b，c，d显示出非常优良的抗肿瘤活性。gdc-0941、化合物a、b，c，d的结构式如下：
本发明设计合成了一系列噻吩并嘧啶类化合物，此系列化合物保留了噻吩并嘧啶的主体结构的同时引入了吡唑啉活性基团，设计并合成了多种噻吩并嘧啶类化合物。本发明着重考察的是不同取代的噻吩并嘧啶类化合物的抗肿瘤活性，以期筛选出活性与选择性更佳的抗肿瘤药物。经体外对多种pi3k/mtor抑制剂高表达细胞株进行抗肿瘤活性筛选，结果表明具有较强的抗肿瘤活性和选择性，许多化合物还进行了pi3kα和mtor激酶的体内活性测试。实验表明某些化合物具有高效的抗肿瘤活性。
技术实现要素：
本发明提供如通式ⅰ所示的噻吩并嘧啶类化合物，其几何异构体及其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物或前药，通式i如下：
其中
x＝s，y＝ch或x＝ch，y＝s；
r1选自h、
r2选自h或-ch3；
ar1、ar2分别为苯基、萘基、吡啶基、噻吩基，所述苯基、萘基、吡啶基、噻吩基任选1～4个相同或不同的r3取代；
r3为1～4个相同或不同的选自氢、卤素、羟基、三氟甲基、三氟甲氧基、氨基、叠氮基、硝基、氰基、巯基、c1～c4)烷基、c3～c6环烷基、c1～c4烯基、c1～c4炔基、c1～c4烷氧基、c1～c4烷硫基、烯丙基、(2-甲基)烯丙基、c1～c4烷氧基甲基、c1～c4烷基酰基或c1～c3亚烷基二氧基的取代基。
本发明优选涉及如上述通式ⅰ的化合物、其几何异构体、及其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物或前药，
其中，
x＝s，y＝ch或x＝ch，y＝s；
r1选自h、
r2选自h；
ar1、ar2分别为苯基、萘基、吡啶基、噻吩基，所述苯基、萘基、吡啶基、噻吩基任选1～4个相同或不同的r3取代；
r3选自氢、卤素、羟基、三氟甲基、三氟甲氧基、氨基、叠氮基、硝基、氰基、巯基、(c1～c4)烷基、(c3～c6)环烷基、(c1～c4)烯基、(c1～c4)炔基、(c1～c4)烷氧基、(c1～c4)烷硫基、烯丙基、(2-甲基)烯丙基、(c1～c4)烷氧基甲基、(c1～c4)烷基酰基或(c1～c3)亚烷基二氧基的取代基。
所述通式i的噻吩并嘧啶类化合物为选自下列化合物中的一种，但这些化合物并不意味着对本发明的任何限制：
(1)4-(2-(5-(3,4-二氯苯基)-3-(4-氟苯基)-4,5-二氢-1h-吡唑-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基)吗啉
(2)4-(2-(5-(3,4-二氯苯基)-3-苯基-4,5-二氢-1h-吡唑-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基)吗啉
(3)4-(2-(3,5-双(4-氟苯基)-4,5-二氢-1h-吡唑-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基)吗啉
(4)4-(2-(5-(3,4-二氯苯基)-3-(对甲苯基)-4,5-二氢-1h-吡唑-1-基)噻吩并[2,3-d]基)吗啉
(5)4-(2-(3-(4-溴苯基)-5-(3,4-二氯苯基)-4,5-二氢-1h-吡唑-1-基)噻吩并[2,3-d]基)吗啉
(6)4-(2-(3,5-二苯基-4,5-二氢-1h-吡唑-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基)吗啉
(7)4-(2-(5-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-4,5-二氢-1h-吡唑-1-基)噻吩并[2,3-d]吗啉
(8)4-(2-(5-(3,4-二氯苯基)-3-(4-甲氧基苯基)-4,5-二氢-1h-吡唑-1-基)噻吩并[2,3-d]基)吗啉
(9)4-(2-(5-(4-溴苯基)-3-(对甲苯基)-4,5-二氢-1h-吡唑-1-基)噻吩并[2,3-d]吗啉
(10)4-(2-(3-(4-甲氧基苯基)-5-苯基-4,5-二氢-1h-吡唑-1-基)噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基)吗啉
(11)4-(2-(5-(4-氟苯基)-3-(4-甲氧基苯基)-4,5-二氢-1h-吡唑-1-基)噻吩并[2,3-d]吗啉
(12)4-(2-(5-(4-溴苯基)-3-苯基-4,5-二氢-1h-吡唑-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基)吗啉
(13)2-巯基-3-((6-(1-(4-吗啉代-6-(1,1,1-三氟-2-羟基丙-2-基)噻吩并[2,3-d])-3-(5-(丙-2-炔-1-基)吡啶-2-基)-4,5-二氢-1h-吡唑-5-基)吡啶-3-基)硫基)琥珀酸
(14)6-(1-(4-((s)-3-甲基吗啉代)-6-吗啉代噻吩并[2,3-d]嘧啶-2-基)-3--2-基)-4,5-二氢-1h-吡唑-5-基)烟腈
(15)4-(2-(5-(3,4-二氯苯基)-3-(4-氟苯基)-4,5-二氢-1h-吡唑-1-基)噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基)吗啉
(16)4-(2-(5-(3,4-二氯苯基)-3-苯基-4,5-二氢-1h-吡唑-1-基)噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基)吗啉
(17)4-(2-(3,5-双(4-氟苯基)-4,5-二氢-1h-吡唑-1-基)噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基)吗啉
(18)4-(2-(5-(3,4-二氯苯基)-3-(对甲苯基)-4,5-二氢-1h-吡唑-1-基)噻吩并[3,2-d]基)吗啉
(19)4-(2-(3-(4-溴苯基)-5-(3,4-二氯苯基)-4,5-二氢-1h-吡唑-1-基)噻吩并[3,2-d]基)吗啉
(20)4-(2-(3,5-二苯基-4,5-二氢-1h-吡唑-1-基)噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基)吗啉
(21)4-(2-(5-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-4,5-二氢-1h-吡唑-1-基)噻吩并[3,2-d]基)吗啉
(22)4-(2-(5-(3,4-二氯苯基)-3-(4-甲氧基苯基)-4,5-二氢-1h-吡唑-1-基)噻吩并[3,2-d]基)吗啉
(23)4-(2-(5-(4-溴苯基)-3-(对甲苯基)-4,5-二氢-1h-吡唑-1-基)噻吩并[3,2-d]吗啉
(24)4-(2-(3-(4-甲氧基苯基)-5-苯基-4,5-二氢-1h-吡唑-1-基)噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基)吗啉
(25)4-(2-(5-(4-氟苯基)-3-(4-甲氧基苯基)-4,5-二氢-1h-吡唑-1-基)噻吩并[3,2-d]吗啉
(26)4-(2-(5-(4-溴苯基)-3-苯基-4,5-二氢-1h-吡唑-1-基)噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基)吗啉
(27)1,1,1-三氟甲基-2-(2-(3-(5-甲基吡啶-2-基)-5-(5-甲硫基吡啶-2-基)-4,5-二氢-1h-吡唑-1-基)-4-吗啉噻吩并[3,2-d]嘧啶-6-基)噻喃-2-醇
(28)6-(1-(4,6-二吗啉基噻吩并[2,3-d]嘧啶-2-基)-3-(5-(((甲硫基)甲基)硫基)吡啶-2-基)(5-氯-2,3-二氢-1h-吡唑-5-基)烟腈
下面的合成路线描述了本发明通式i含吡
路线1目标化合物的合成路线
本发明通过路线1首先合成中间体a1，再与含不同取代基查尔酮侧链反应，得到目标化合物。
按照本发明所属领域的一些通常方法，本发明中上述通式i的含吡唑啉结构的噻吩并嘧啶类化合物可以与酸生成药学上可接受的盐。可药用加成盐包括无机酸和有机酸加成盐，与下列酸加成的盐是特别优选的：盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、苯磺酸、萘二磺酸、乙酸、丙酸、乳酸、三氟乙酸、马来酸、柠檬酸、富马酸、草酸、酒石酸、苯甲酸等。
此外，本发明还包括本发明衍生物的前药。本发明衍生物的前药是上述通式i的衍生物，它们自身可能具有较弱的活性甚至没有活性，但是在给药后，在生理条件下(例如通过代谢、溶剂分解或另外的方式)被转化成相应的生物活性形式。
本发明可以含有上述通式i的含吡唑啉结构的噻吩并嘧啶类化合物，及其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物作为活性成份，与药学上可接受的载体或赋型剂混合制备成组合物，并制备成临床上可接受的剂型，上述药学上可接受的赋型剂是指任何可用于药学领域的稀释剂、辅助剂和/或载体。本发明的衍生物可以与其他活性成份组合使用，只要它们不产生其他不利的作用，例如过敏反应。
本发明上述通式i的含吡唑啉结构的噻吩并嘧啶类化合物用于患者的临床剂量可以根据：活性成分在体内的治疗功效和生物利用度、它们的代谢和排泄速率和患者的年龄、性别、疾病期来进行适当调整，不过成人的每日剂量一般应当为20～600mg，优选为60～400mg。因此，当本发明的药物组合物被制成单位剂型时，考虑到上述有效剂量，每单位制剂应当含有20～600mg上式通式ⅰ的含吡唑啉结构的噻吩并嘧啶类化合物，优选为60～400mg。按照医生或药师的指导，这些制剂可以以一定间隔分若干次给药(优选为一至五次)。
本发明的药用组合物可配制成若干种剂型，其中含有药物领域中一些常用的赋形剂。如上所述的若干种剂型可以采用注射剂、片剂、胶囊剂、气雾剂、栓剂、膜剂、滴丸剂、外用搽剂、软膏剂等剂型药物。
用于本发明药物组合物的载体是药物领域中可得到的常见类型，包括：粘合剂、润滑剂、崩解剂、助溶剂、稀释剂、稳定剂、悬浮剂、无色素、矫味剂、防腐剂、加溶剂和基质等。药物制剂可以经口服或胃肠外方式(例如静脉内、皮下、腹膜内或局部)给药，如果某些药物在胃部条件下不稳定的，可将其配制成肠衣片剂。
本发明的活性化合物或其可药用盐及其溶剂化物可作为唯一的抗增生性药物单独使用，或者可以与现已上市的抗增生性药物联合使用，用于治疗和/或预防增生性疾病，如牛皮癣、良性前列腺肥大、动脉粥样硬化和再狭窄。
本发明化合物体外具有抑制肿瘤细胞生长活性，因此，它可以用作制备治疗和/或预防癌症的药物，如肺癌、肝癌、前列腺癌等。
通过体外抑制肺癌细胞a549、人前列腺癌细胞pc-3和肝癌细胞hepg2活性试验，本发明化合物对肺癌细胞、前列腺癌细胞以及肝癌细胞具有显著抑制作用，特别用于制备治疗和/或预防前列腺癌、肺癌和肝癌的药物。
本发明的活性化合物或其可药用盐及其溶剂化物可作为唯一的抗肿瘤药物单独使用，或者可以与现已上市的抗肿瘤药物(如铂类药物顺铂、喜树碱类药物伊立替康、长春花碱类药物诺维本、脱氧胞昔类药物吉西他滨、足叶乙甙、紫杉醇等)联合使用。联合治疗通过将各个治疗组分同时、顺序或隔开给药来实现。
具体实施方式：
为了更地解释本发明以下结合具体实施例对本发明作进一步的详细说明，但它们不对本发明构成限定。
实施例旨在阐述而不是限制本发明的范围。衍生物的核磁共振氢谱用brukerarx-400测定，质谱用agilent1100lc/msd测定；所用试剂均为分析纯或化学纯。
通式i的噻吩并嘧啶化合物：
本发明实施例1-28的结构式如下表1所示
表1实施例1～28的结构式
步骤a4-(2-肼噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基)吗啉(a1)的制备
向装有2.5g4-(2-氯噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基)吗啉的烧瓶中加入100ml(80％)水合肼，升温至80℃，反应5h,析出固体，抽滤，得淡黄色产物4-(2-肼噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基)吗啉(a1)
步骤b4-(2-(5-(3,4-二氯苯基)-3-(4-氟苯基)-4,5-二氢-1h-吡唑-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基)吗啉
将查尔酮(0.001mol)、4-(2-肼噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基)吗啉(0.001mol)溶于13ml乙醇中，逐滴滴加1ml10％naoh溶液，，加毕反应15min，tlc检测反应完全后停止反应。
向反应液中加适量的水并用稀盐酸溶液调节ph为6-7，析出固体，搅拌10min，抽滤，滤饼干燥。
实施例1
4-(2-(5-(3,4-二氯苯基)-3-(4-氟苯基)-4,5-二氢-1h-吡唑-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基)吗啉
先按照步骤a合成中间体a1，最后中间体a1通过步骤e与查尔酮反应，得到4-(2-(5-(3,4-二氯苯基)-3-(4-氟苯基)-4,5-二氢-1h-吡唑-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基)吗啉。
1hnmr(400mhz,dmso)δ8.11(d,j＝5.5hz,1h),7.84(dd,j＝8.5,5.6hz,2h),7.57(dd,j＝9.7,5.0hz,2h),7.30(dd,j＝11.3,6.8hz,3h),7.22(d,j＝8.3hz,1h),5.73(dd,j＝12.0,6.0hz,1h),3.89(dd,j＝17.8,12.2hz,1h),3.78–3.50(m,9h).
按照实施例1的方法，先按照步骤a合成中间体a1，最后中间体a1通过步骤e与含不同取代基的查尔酮，分别制得实施例2～14化合物。
实施例2
4-(2-(5-(3,4-二氯苯基)-3-苯基-4,5-二氢-1h-吡唑-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基)吗啉
1hnmr(400mhz,dmso)δ8.07(d,j＝5.4hz,1h),7.77(d,j＝7.1hz,2h),7.55(d,j＝8.4hz,2h),7.47–7.40(m,3h),7.23(dd,j＝17.5,6.9hz,2h),5.72(dd,j＝12.1,5.7hz,1h),3.87(dd,j＝18.0,12.3hz,1h),3.63(ddd,j＝46.4,29.5,10.3hz,8h),3.18(dd,j＝18.1,5.8hz,1h).
实施例3
4-(2-(3,5-双(4-氟苯基)-4,5-二氢-1h-吡唑-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基)吗啉
1hnmr(400mhz,dmso)δ8.40(d,j＝5.6hz,1h),8.09–8.03(m,2h),7.56(d,j＝5.5hz,1h),7.40(dd,j＝16.4,7.6hz,4h),7.18(t,j＝8.8hz,2h),5.80(dd,j＝11.5,5.8hz,1h),4.16–3.43(m,10h).
实施例4
4-(2-(5-(3,4-二氯苯基)-3-(对甲苯基)-4,5-二氢-1h-吡唑-1-基)噻吩并[2,3-d]基)吗啉
1hnmr(400mhz,dmso)δ8.40(d,j＝5.5hz,1h),7.87(d,j＝8.1hz,2h),7.71(s,1h),7.61(d,j＝8.4hz,1h),7.55(d,j＝5.5hz,1h),7.33(dd,j＝15.3,8.2hz,3h),5.78(dd,j＝11.6,5.9hz,1h),4.06(dd,j＝18.2,12.0hz,1h),3.81(s,3h),3.65(s,2h),3.54(s,1h),3.44(dd,j＝18.5,6.1hz,3h),2.38(s,3h).
实施例5
4-(2-(3-(4-溴苯基)-5-(3,4-二氯苯基)-4,5-二氢-1h-吡唑-1-基)噻吩并[2,3-d]基)吗啉
1hnmr(400mhz,dmso)δ8.06(d,j＝5.5hz,1h),7.71(d,j＝8.6hz,2h),7.64(d,j＝8.2hz,2h),7.54(d,j＝8.0hz,2h),7.24(d,j＝5.4hz,1h),7.20(d,j＝8.2hz,1h),5.73(s,1h),3.86(s,1h),3.62(d,j＝12.3hz,4h),3.53(s,4h),3.17(d,j＝17.9hz,1h).
实施例6
4-(2-(3,5-二苯基-4,5-二氢-1h-吡唑-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基)吗啉
1hnmr(400mhz,dmso)δ8.04(d,j＝5.5hz,1h),7.77(d,j＝7.6hz,2h),7.48–7.37(m,3h),7.30–7.17(m,6h),5.71(dd,j＝12.0,5.3hz,1h),3.87(dd,j＝17.4,12.2hz,1h),3.63(dt,j＝19.1,10.7hz,6h),3.49(d,j＝13.7hz,2h),3.45–3.40(m,1h).
实施例7
4-(2-(5-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-4,5-二氢-1h-吡唑-1-基)噻吩并[2,3-d]吗啉
1hnmr(400mhz,dmso)δ8.09(d,j＝5.4hz,1h),7.87–7.80(m,2h),7.48(d,j＝8.2hz,2h),7.28(dd,j＝18.4,7.2hz,3h),7.20(d,j＝8.2hz,2h),5.71(dd,j＝12.1,5.6hz,1h),3.88(dd,j＝17.6,12.1hz,1h),3.74–3.49(m,9h).
实施例8
4-(2-(5-(3,4-二氯苯基)-3-(4-甲氧基苯基)-4,5-二氢-1h-吡唑-1-基)噻吩并[2,3-d]基)吗啉
1hnmr(400mhz,dmso)δ8.39(s,1h),7.92(d,j＝8.4hz,2h),7.72–7.51(m,3h),7.32(s,1h),7.10(d,j＝8.5hz,2h),5.76(s,1h),4.06(s,2h),3.83(s,8h),3.64(s,3h).
实施例9
4-(2-(5-(4-溴苯基)-3-(对甲苯基)-4,5-二氢-1h-吡唑-1-基)噻吩并[2,3-d]吗啉
1hnmr(400mhz,dmso)δ8.04(d,j＝5.5hz,1h),7.79–7.58(m,2h),7.60–7.35(m,2h),7.35–7.07(m,5h),5.68(dd,j＝12.1,5.5hz,1h),4.63–3.41(m,10h),2.33(s,3h).
实施例10
4-(2-(3-(4-甲氧基苯基)-5-苯基-4,5-二氢-1h-吡唑-1-基)噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基)吗啉
1hnmr(400mhz,dmso)δ8.17(d,j＝4.9hz,1h),7.79(d,j＝8.1hz,2h),7.35(d,j＝4.7hz,1h),7.29(d,j＝7.3hz,2h),7.24(d,j＝7.7hz,3h),7.03(d,j＝8.3hz,2h),5.69(d,j＝6.4hz,1h),3.98–3.87(m,2h),3.80(s,3h),3.68(s,4h),3.57(s,4h).
实施例11
4-(2-(5-(4-氟苯基)-3-(4-甲氧基苯基)-4,5-二氢-1h-吡唑-1-基)噻吩并[2,3-d]吗啉
1hnmr(400mhz,dmso)δ7.91–7.86(m,2h),7.50(t,j＝5.0hz,1h),7.39–7.24(m,4h),7.16(t,j＝8.8hz,1h),7.06(d,j＝8.6hz,2h),5.72(dd,j＝11.0,5.3hz,1h),4.07–3.96(m,1h),3.82(s,3h),3.74(s,4h),3.65–3.56(m,3h),3.48(s,2h).
实施例12
4-(2-(5-(4-溴苯基)-3-苯基-4,5-二氢-1h-吡唑-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基)吗啉
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.77(d,j＝7.3hz,2h),7.51–7.37(m,6h),7.21(dd,j＝17.0,6.8hz,3h),5.71(dd,j＝12.0,5.3hz,1h),3.86(dd,j＝17.5,12.3hz,1h),3.73–3.57(m,7h),3.53(t,j＝9.8hz,2h).
实施例13
2-巯基-3-((6-(1-(4-吗啉代-6-(1,1,1-三氟-2-羟基丙-2-基)噻吩并[2,3-d])-3-(5-(丙-2-炔-1-基)吡啶-2-基)-4,5-二氢-1h-吡唑-5-基)吡啶-3-基)硫基)琥珀酸
esi-ms[m+h]+m/z:645.8
实施例14
6-(1-(4-((s)-3-甲基吗啉代)-6-吗啉代噻吩并[2,3-d]嘧啶-2-基)-3--2-基)-4,5-二氢-1h-吡唑-5-基)烟腈
esi-ms[m+h]+m/z:664.88
步骤c4-(2-(5-(3,4-二氯苯基)-3-(4-氟苯基)-4,5-二氢-1h-吡唑-1-基)噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基)吗啉
将查尔酮(0.001mol)、4-(2-肼噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基)吗啉(0.001mol)溶于13ml乙醇中，逐滴滴加1ml10％naoh溶液，，加毕反应15min，tlc检测反应完全后停止反应。
向反应液中加适量的水并用稀盐酸溶液调节ph为6-7，析出固体，搅拌10min，抽滤，滤饼干燥。
实施例15
4-(2-(5-(3,4-二氯苯基)-3-(4-氟苯基)-4,5-二氢-1h-吡唑-1-基)噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基)吗啉
先按照步骤b成中间体a2，最后中间体a2通过步骤e与查尔酮化合物反应，得到4-(2-(5-(3,4-二氯苯基)-3-(4-氟苯基)-4,5-二氢-1h-吡唑-1-基)噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基)吗啉
esi-ms[m+h]+m/z:528.43
按照实施例1的方法，先按照步骤b合成中间体a2，最后中间体a2通过步骤e与含不同取代基的查尔酮反应，分别制得实施例15～28化合物。
实施例16
4-(2-(5-(3,4-二氯苯基)-3-苯基-4,5-二氢-1h-吡唑-1-基)噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基)吗啉
esi-ms[m+h]+m/z:510.44
实施例17
4-(2-(3,5-双(4-氟苯基)-4,5-二氢-1h-吡唑-1-基)噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基)吗啉
esi-ms[m+h]+m/z:477.53
实施例18
4-(2-(5-(3,4-二氯苯基)-3-(对甲苯基)-4,5-二氢-1h-吡唑-1-基)噻吩并[3,2-d]基)吗啉
esi-ms[m+h]+m/z:524.46
实施例19
4-(2-(3-(4-溴苯基)-5-(3,4-二氯苯基)-4,5-二氢-1h-吡唑-1-基)噻吩并[3,2-d]基)吗啉
esi-ms[m+h]+m/z:589.33
实施例20
4-(2-(3,5-二苯基-4,5-二氢-1h-吡唑-1-基)噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基)吗啉
esi-ms[m+h]+m/z:441.55
实施例21
4-(2-(5-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-4,5-二氢-1h-吡唑-1-基)噻吩并[3,2-d]基)吗啉
esi-ms[m+h]+m/z:538.44
实施例22
4-(2-(5-(3,4-二氯苯基)-3-(4-甲氧基苯基)-4,5-二氢-1h-吡唑-1-基)噻吩并[3,2-d]基)吗啉
esi-ms[m+h]+m/z:540.46
实施例23
4-(2-(5-(4-溴苯基)-3-(对甲苯基)-4,5-二氢-1h-吡唑-1-基)噻吩并[3,2-d]吗啉
esi-ms[m+h]+m/z:534.48
实施例24
4-(2-(3-(4-甲氧基苯基)-5-苯基-4,5-二氢-1h-吡唑-1-基)噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基)吗啉
esi-ms[m+h]+m/z:471.58
实施例25
4-(2-(5-(4-氟苯基)-3-(4-甲氧基苯基)-4,5-二氢-1h-吡唑-1-基)噻吩并[3,2-d]吗啉
esi-ms[m+h]+m/z:489.57
实施例26
4-(2-(5-(4-溴苯基)-3-苯基-4,5-二氢-1h-吡唑-1-基)噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基)吗啉
esi-ms[m+h]+m/z:520.45
实施例27
1,1,1-三氟甲基-2-(2-(3-(5-甲基吡啶-2-基)-5-(5-甲硫基吡啶-2-基)-4,5-二氢-1h-吡唑-1-基)-4-吗啉噻吩并[3,2-d]嘧啶-6-基)噻喃-2-醇
esi-ms[m+h]+m/z:616.7
实施例28
6-(1-(4,6-二吗啉基噻吩并[2,3-d]嘧啶-2-基)-3-(5-(((甲硫基)甲基)硫基)吡啶-2-基)(5-氯-2,3-二氢-1h-吡唑-5-基)烟腈
esi-ms[m+h]+m/z:645.8
体外细胞毒活性
对按照本发明上式i的含吡唑结构的噻吩并嘧啶类化合物衍生物进行了体外抑制肺癌细胞a549、前列腺癌pc-3、肝癌细胞hepg2活性筛选，对照品gdc-0941按照文献(j.med.chem.,2008,51(18),pp5522–5532)所述方法制备得到。
1)细胞复苏并传代2～3次稳定后，用胰蛋白酶溶液(0.25％)使其从培养瓶底部消化下来。将细胞消化液倒入离心管中后，之后加入培养液以终止消化。将离心管在800r/min下离心10min，弃去上清液后加入5ml培养液，吹打混匀细胞，吸取10μl细胞混悬液加入细胞计数板中计数，调整细胞浓度为104个/孔。96孔板中除a1孔为空白孔不加细胞外，其余皆加入100μl细胞混悬液。将96孔板放入培养箱中培养24h。
2)用50μl二甲基亚砜溶解受试样品，然后加入适量培养液，使样品溶解成2mg/ml药液，然后在24孔板中将样品稀释为20、4、0.8、0.16、0.032μg/ml。
每个浓度加入3孔，其中周围两行两列细胞长势受环境影响较大，只和为空白细胞孔使用。将96孔板放入培养箱中培养72h。
3)将96孔板中带药培养液弃去，用磷酸缓冲溶液(pbs)将细胞冲洗两遍，在每孔中加入mtt(四氮唑)(0.5mg/ml)100μl放入培养箱中4h后，弃去mtt溶液，加入二甲基亚砜100μl。在磁力振荡器上振荡使存活细胞与mtt反应产物充分溶解，放入酶标仪中测定结果。通过bliss法可求出药物ic50值。
化合物的肝癌细胞hepg2、肺癌细胞a549、前列腺癌pc-3活性结果见表2。
实验结果如表2所示。表1中ic50>＝80％，以“+++”表示，80％>ic50>＝60％，以“++”表示，60％>ic50>＝40％，以“+”表示，ic50<＝40％，以“-”表示，“na”表示无活性，“nd”表示未测试。
表2目标化合物体外抗肿瘤活性
从上述试验结果可以清楚地看出，本发明所要保护的通式i的吡
本发明中通式i含吡
应用例1：片剂
以实施例2化合物6g，按照药剂学一般压片法加辅料12g混匀后，压制成100片，每片重180mg。
应用例2：胶囊剂
以实施例8化合物15g，按照药剂学胶囊剂的要求将辅料20g混匀后，装入空心胶囊，每个胶囊重150mg。
应用例3：注射剂
以实施例9化合物10g，按照药剂学常规方法，进行活性炭吸附，经0.65μm微孔滤膜过滤后，填入氮气罐制成水针制剂，每只装2ml，共灌装100瓶。
应用例4：气雾剂
以实施例12化合物10g，用适量丙二醇溶解后，加入蒸馏水及其他辐料后，制成100ml的澄清溶液即得。
应用例5：栓剂
以实施例15化合物5g，将之研细加入甘油适量，研匀后加入已熔化的甘油明胶，研磨均匀，倾入已涂润滑剂的模型中，制得栓剂25颗
应用例6：膜剂
以实施例17化合物5g，将聚乙烯醇、药用甘油、水等搅拌膨胀后加热溶解，80目筛网过滤，再将实施例12化合物加入到滤液中搅拌溶解，涂膜机制膜50片。
应用例7：滴丸剂
以实施例18化合物15g，与明胶等基质50g加热熔化混匀后，滴入低温液体石蜡中，共制得滴丸1000丸。
应用例8：外用搽剂
以实施例20化合物25g，按照常规药剂学方法与乳化剂等辅料10g混合研磨，再加蒸馏水至500ml制得。
应用例9：软膏剂
以实施例24化合物5g，研细后与凡士林等油性基质250g研匀制得。
尽管已经通过特定实施方案描述了本发明，但修改和等价变化对于精通此领域的技术人员而言是显见的，且它们都包含在本发明范围之内。