技术领域：
本发明涉及中药提取技术领域，具体涉及一种具有清除自由基功能的覆盆子多糖类成分提取方法。
背景技术：
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覆盆子，又称树莓，蔷薇科悬钩子属浆果植物。覆盆子属于药食两用果实，富含氨基酸、矿质元素、有机酸和维生素e等人体必需的营养物质，还含有黄酮、多糖、粗三萜等功能性物质，因此，覆盆子具有抗衰老、调节生殖系统、促进细胞免疫功能以及减肥之功效，并具有优异的抑菌和提高免疫力作用。
目前，有研究显示覆盆子的多糖成分对氧自由基具有较强清除能力，但利用常规提取方法从覆盆子中提取所得的多糖成分得率和纯度较低，从而增加其制备成本。要想从覆盆子中高效提取出高含量的多糖类化合物需要借助适宜的提取方法，同时还需依靠合适的分离纯化方法才能获得高提取得率和高纯度的覆盆子多糖类成分。
技术实现要素：
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本发明所要解决的技术问题在于提供一种提取得率和纯度高、分离纯化操作简便易行的具有清除自由基功能的覆盆子多糖类成分提取方法。
本发明所要解决的技术问题采用以下的技术方案来实现：
一种具有清除自由基功能的覆盆子多糖类成分提取方法，包括如下步骤：
(1)清洗：将覆盆子放入清水中浸泡5-10min，并用3-5倍覆盆子干重的清水清洗两次，每次搅拌5-10min；
(2)干燥粉碎：将经清洗后的覆盆子用45-50℃热风风干，再利用粉碎机粉碎成粉末，过100目筛，即得覆盆子粉末；
(3)提取：将上述所制覆盆子粉末回流水提三次，每次使用覆盆子干重的5-8倍的蒸馏水提取1-3h，并且加入覆盆子干重0.5-1％的促提剂，合并滤液，滤液经减压浓缩至比重达到1.11-1.15，待自然冷却至室温后加入95％乙醇，使所得混合液中乙醇浓度达到80％，充分搅拌，静置5-8h，再次过滤，即得多糖粗品；
(4)溶解：将上述所得多糖粗品加蒸馏水溶解，过滤，除去不溶性杂质，所得滤液即为待纯化液；
(5)一次纯化：将所得待纯化液上聚酰胺柱，控制出液速度在0.5ml/min；并用蒸馏水洗脱至无多糖类成分流出，控制出液速度在2ml/min，收集洗脱液，即得一次洗脱液；
(6)二次纯化：将一次洗脱液经减压浓缩后上deae-纤维素阴离子柱，控制出液速度在0.5ml/min，并用蒸馏水洗脱至无多糖类成分流出，控制出液速度在2ml/min，收集洗脱液，即得二次洗脱液；
(7)干燥：将上述所得二次洗脱液经喷雾干燥后粉碎，即得覆盆子多糖类成分。
所述促提剂由如下重量份数的原料制成：田菁胶/多聚谷氨酸3-5份、糯米粉2-3份、泊洛沙姆0.5-1份、羟乙基纤维素0.5-1份、聚乙二醇40000.1-0.3份、甘草酸二钾0.05-0.1份、小苏打粉0.05-0.1份，其制备方法为：向糯米粉中加入泊洛沙姆和甘草酸二钾，升温至75-80℃保温研磨10min，然后加入聚乙二醇4000和小苏打粉，继续升温至105-110℃保温研磨15min，即得改性糯米粉，待自然冷却至室温后再加入田菁胶/多聚谷氨酸和羟乙基纤维素，充分混合后经真空压缩成块，并于0-5℃环境中密封静置1h，最后经粉碎机制成粉末，过300目筛，即得促提剂。
所述田菁胶/多聚谷氨酸由田菁胶和多聚谷氨酸复合而成，其制备方法为：将田菁胶和藻酸丙二醇酯升温至80-85℃保温研磨5min，再加入多聚谷氨酸和橄榄油，继续在80-85℃保温研磨15min，向所得混合物中加入15-20℃水，充分搅拌后于15-20℃下保温静置30min，然后将所得混合液送入喷雾干燥机中，干燥所得颗粒经粉碎机制成粉末，过200目筛，即得田菁胶/多聚谷氨酸。
所述田菁胶、藻酸丙二醇酯、多聚谷氨酸、橄榄油和水的重量比为3-5:0.5-1:2-3:0.1-0.3:25-30。
所述聚酰胺柱由聚酰胺填充而成，所用聚酰胺是由己二酸和己二胺经聚合反应后再经改性处理而制得，其具体制备方法为：将己二酸溶解于乙醇中，升温至65℃后滴加己二胺的乙醇溶液，继续升温至回流状态保温反应，反应结束后自然冷却，过滤，所得滤渣用乙醇洗涤，然后加入n-羟甲基丙烯酰胺、双季戊四醇和六羟甲基三聚氰胺六甲醚，升温至125-130℃保温研磨30min，所得混合物经真空压缩成块，并于10-15℃环境中密封静置1h，最后经粉碎机制成颗粒状。
所述己二酸、己二胺、n-羟甲基丙烯酰胺、双季戊四醇和六羟甲基三聚氰胺六甲醚的140-150:125-130:15-20:5-10:5-10。
本发明的有益效果是：
(1)利用水提醇沉提高多糖类成分的提取得率以及对杂质起到粗分离的目的，同时促提剂的添加显著提高多糖类成分的提取得率，使提取得率达到6.52％；
(2)利用聚酰胺柱和deae-纤维素阴离子柱进行两次纯化，有效提高多糖类成分的纯度，使纯度达到80％以上；
(3)聚酰胺经上述改性处理后，保留其对覆盆子提取液中非多糖类酚羟基杂质成分的优异吸附能力，同时改善其对这些杂质成分的解吸能力，从而在提高提取所得多糖类成分纯度的基础上实现对覆盆子提取液中其他酚羟基药效成分的有效利用，增强覆盆子的提取价值；
(4)通过上述提取方法提取所得覆盆子多糖类成分经试验证明其具有显著的清除自由基作用，从而利于将其作为原料以制成美容换肤产品，以避免使用化学药物存在的不良反应。
具体实施方式：
为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。
实施例1
(1)清洗：将覆盆子放入清水中浸泡10min，并用3倍覆盆子干重的清水清洗两次，每次搅拌5min；
(2)干燥粉碎：将经清洗后的覆盆子用45-50℃热风风干，再利用粉碎机粉碎成粉末，过100目筛，即得覆盆子粉末；
(3)提取：将上述所制覆盆子粉末回流水提三次，每次使用覆盆子干重的5倍的蒸馏水提取1.5h，并且加入覆盆子干重0.5％的促提剂，合并滤液，滤液经减压浓缩至比重达到1.11-1.15，待自然冷却至室温后加入95％乙醇，使所得混合液中乙醇浓度达到80％，充分搅拌，静置5h，再次过滤，即得多糖粗品；
(4)溶解：将上述所得多糖粗品加蒸馏水溶解，过滤，除去不溶性杂质，所得滤液即为待纯化液；
(5)一次纯化：将所得待纯化液上聚酰胺柱，控制出液速度在0.5ml/min；并用蒸馏水洗脱至无多糖类成分流出，控制出液速度在2ml/min，收集洗脱液，即得一次洗脱液；
(6)二次纯化：将一次洗脱液经减压浓缩后上deae-纤维素阴离子柱，控制出液速度在0.5ml/min，并用蒸馏水洗脱至无多糖类成分流出，控制出液速度在2ml/min，收集洗脱液，即得二次洗脱液；
(7)干燥：将上述所得二次洗脱液经喷雾干燥后粉碎，即得覆盆子多糖类成分。
促提剂的制备：向20g糯米粉中加入5g泊洛沙姆和0.5g甘草酸二钾，升温至75-80℃保温研磨10min，然后加入1g聚乙二醇4000和0.5g小苏打粉，继续升温至105-110℃保温研磨15min，即得改性糯米粉，待自然冷却至室温后再加入30g田菁胶/多聚谷氨酸和5g羟乙基纤维素，充分混合后经真空压缩成块，并于0-5℃环境中密封静置1h，最后经粉碎机制成粉末，过300目筛，即得促提剂。
田菁胶/多聚谷氨酸的制备：将50g田菁胶和5g藻酸丙二醇酯升温至80-85℃保温研磨5min，再加入30g多聚谷氨酸和2g橄榄油，继续在80-85℃保温研磨15min，向所得混合物中加入300g15-20℃水，充分搅拌后于15-20℃下保温静置30min，然后将所得混合液送入喷雾干燥机中，干燥所得颗粒经粉碎机制成粉末，过200目筛，即得田菁胶/多聚谷氨酸。
聚酰胺的制备：将150g己二酸溶解于乙醇中，升温至65℃后滴加130g己二胺的乙醇溶液，继续升温至回流状态保温反应，反应结束后自然冷却，过滤，所得滤渣用乙醇洗涤，然后加入20gn-羟甲基丙烯酰胺、5g双季戊四醇和5g六羟甲基三聚氰胺六甲醚，升温至125-130℃保温研磨30min，所得混合物经真空压缩成块，并于10-15℃环境中密封静置1h，最后经粉碎机制成颗粒状。
实施例2
(1)清洗：将覆盆子放入清水中浸泡10min，并用3倍覆盆子干重的清水清洗两次，每次搅拌5min；
(2)干燥粉碎：将经清洗后的覆盆子用45-50℃热风风干，再利用粉碎机粉碎成粉末，过100目筛，即得覆盆子粉末；
(3)提取：将上述所制覆盆子粉末回流水提三次，每次使用覆盆子干重的5倍的蒸馏水提取1.5h，并且加入覆盆子干重0.5％的促提剂，合并滤液，滤液经减压浓缩至比重达到1.11-1.15，待自然冷却至室温后加入95％乙醇，使所得混合液中乙醇浓度达到80％，充分搅拌，静置5h，再次过滤，即得多糖粗品；
(4)溶解：将上述所得多糖粗品加蒸馏水溶解，过滤，除去不溶性杂质，所得滤液即为待纯化液；
(5)一次纯化：将所得待纯化液上聚酰胺柱，控制出液速度在0.5ml/min；并用蒸馏水洗脱至无多糖类成分流出，控制出液速度在2ml/min，收集洗脱液，即得一次洗脱液；
(6)二次纯化：将一次洗脱液经减压浓缩后上deae-纤维素阴离子柱，控制出液速度在0.5ml/min，并用蒸馏水洗脱至无多糖类成分流出，控制出液速度在2ml/min，收集洗脱液，即得二次洗脱液；
(7)干燥：将上述所得二次洗脱液经喷雾干燥后粉碎，即得覆盆子多糖类成分。
促提剂的制备：向30g糯米粉中加入10g泊洛沙姆和0.5g甘草酸二钾，升温至75-80℃保温研磨10min，然后加入3g聚乙二醇4000和0.5g小苏打粉，继续升温至105-110℃保温研磨15min，即得改性糯米粉，待自然冷却至室温后再加入50g田菁胶/多聚谷氨酸和10g羟乙基纤维素，充分混合后经真空压缩成块，并于0-5℃环境中密封静置1h，最后经粉碎机制成粉末，过300目筛，即得促提剂。
田菁胶/多聚谷氨酸的制备：将30g田菁胶和5g藻酸丙二醇酯升温至80-85℃保温研磨5min，再加入20g多聚谷氨酸和2g橄榄油，继续在80-85℃保温研磨15min，向所得混合物中加入300g15-20℃水，充分搅拌后于15-20℃下保温静置30min，然后将所得混合液送入喷雾干燥机中，干燥所得颗粒经粉碎机制成粉末，过200目筛，即得田菁胶/多聚谷氨酸。
聚酰胺的制备：将140g己二酸溶解于乙醇中，升温至65℃后滴加125g己二胺的乙醇溶液，继续升温至回流状态保温反应，反应结束后自然冷却，过滤，所得滤渣用乙醇洗涤，然后加入15gn-羟甲基丙烯酰胺、5g双季戊四醇和5g六羟甲基三聚氰胺六甲醚，升温至125-130℃保温研磨30min，所得混合物经真空压缩成块，并于10-15℃环境中密封静置1h，最后经粉碎机制成颗粒状。
对照例1
(1)清洗：将覆盆子放入清水中浸泡10min，并用3倍覆盆子干重的清水清洗两次，每次搅拌5min；
(2)干燥粉碎：将经清洗后的覆盆子用45-50℃热风风干，再利用粉碎机粉碎成粉末，过100目筛，即得覆盆子粉末；
(3)提取：将上述所制覆盆子粉末回流水提三次，每次使用覆盆子干重的5倍的蒸馏水提取1.5h，并且加入覆盆子干重0.5％的促提剂，合并滤液，滤液经减压浓缩至比重达到1.11-1.15，待自然冷却至室温后加入95％乙醇，使所得混合液中乙醇浓度达到80％，充分搅拌，静置5h，再次过滤，即得多糖粗品；
(4)溶解：将上述所得多糖粗品加蒸馏水溶解，过滤，除去不溶性杂质，所得滤液即为待纯化液；
(5)一次纯化：将所得待纯化液上聚酰胺柱，控制出液速度在0.5ml/min；并用蒸馏水洗脱至无多糖类成分流出，控制出液速度在2ml/min，收集洗脱液，即得一次洗脱液；
(6)二次纯化：将一次洗脱液经减压浓缩后上deae-纤维素阴离子柱，控制出液速度在0.5ml/min，并用蒸馏水洗脱至无多糖类成分流出，控制出液速度在2ml/min，收集洗脱液，即得二次洗脱液；
(7)干燥：将上述所得二次洗脱液经喷雾干燥后粉碎，即得覆盆子多糖类成分。
促提剂的制备：向30g糯米粉中加入50g田菁胶/多聚谷氨酸和10g羟乙基纤维素，充分混合后经真空压缩成块，并于0-5℃环境中密封静置1h，最后经粉碎机制成粉末，过300目筛，即得促提剂。
田菁胶/多聚谷氨酸的制备：将30g田菁胶和5g藻酸丙二醇酯升温至80-85℃保温研磨5min，再加入20g多聚谷氨酸和2g橄榄油，继续在80-85℃保温研磨15min，向所得混合物中加入300g15-20℃水，充分搅拌后于15-20℃下保温静置30min，然后将所得混合液送入喷雾干燥机中，干燥所得颗粒经粉碎机制成粉末，过200目筛，即得田菁胶/多聚谷氨酸。
聚酰胺的制备：将140g己二酸溶解于乙醇中，升温至65℃后滴加125g己二胺的乙醇溶液，继续升温至回流状态保温反应，反应结束后自然冷却，过滤，所得滤渣用乙醇洗涤，然后加入15gn-羟甲基丙烯酰胺、5g双季戊四醇和5g六羟甲基三聚氰胺六甲醚，升温至125-130℃保温研磨30min，所得混合物经真空压缩成块，并于10-15℃环境中密封静置1h，最后经粉碎机制成颗粒状。
对照例2
(1)清洗：将覆盆子放入清水中浸泡10min，并用3倍覆盆子干重的清水清洗两次，每次搅拌5min；
(2)干燥粉碎：将经清洗后的覆盆子用45-50℃热风风干，再利用粉碎机粉碎成粉末，过100目筛，即得覆盆子粉末；
(3)提取：将上述所制覆盆子粉末回流水提三次，每次使用覆盆子干重的5倍的蒸馏水提取1.5h，并且加入覆盆子干重0.5％的促提剂，合并滤液，滤液经减压浓缩至比重达到1.11-1.15，待自然冷却至室温后加入95％乙醇，使所得混合液中乙醇浓度达到80％，充分搅拌，静置5h，再次过滤，即得多糖粗品；
(4)溶解：将上述所得多糖粗品加蒸馏水溶解，过滤，除去不溶性杂质，所得滤液即为待纯化液；
(5)一次纯化：将所得待纯化液上聚酰胺柱，控制出液速度在0.5ml/min；并用蒸馏水洗脱至无多糖类成分流出，控制出液速度在2ml/min，收集洗脱液，即得一次洗脱液；
(6)二次纯化：将一次洗脱液经减压浓缩后上deae-纤维素阴离子柱，控制出液速度在0.5ml/min，并用蒸馏水洗脱至无多糖类成分流出，控制出液速度在2ml/min，收集洗脱液，即得二次洗脱液；
(7)干燥：将上述所得二次洗脱液经喷雾干燥后粉碎，即得覆盆子多糖类成分。
促提剂的制备：向30g糯米粉中加入10g泊洛沙姆和0.5g甘草酸二钾，升温至75-80℃保温研磨10min，然后加入3g聚乙二醇4000和0.5g小苏打粉，继续升温至105-110℃保温研磨15min，即得改性糯米粉，待自然冷却至室温后再加入50g田菁胶/多聚谷氨酸和10g羟乙基纤维素，充分混合后经真空压缩成块，并于0-5℃环境中密封静置1h，最后经粉碎机制成粉末，过300目筛，即得促提剂。
田菁胶/多聚谷氨酸的制备：将30g田菁胶升温至80-85℃保温研磨5min，再加入20g多聚谷氨酸，继续在80-85℃保温研磨15min，向所得混合物中加入300g15-20℃水，充分搅拌后于15-20℃下保温静置30min，然后将所得混合液送入喷雾干燥机中，干燥所得颗粒经粉碎机制成粉末，过200目筛，即得田菁胶/多聚谷氨酸。
聚酰胺的制备：将140g己二酸溶解于乙醇中，升温至65℃后滴加125g己二胺的乙醇溶液，继续升温至回流状态保温反应，反应结束后自然冷却，过滤，所得滤渣用乙醇洗涤，然后加入15gn-羟甲基丙烯酰胺、5g双季戊四醇和5g六羟甲基三聚氰胺六甲醚，升温至125-130℃保温研磨30min，所得混合物经真空压缩成块，并于10-15℃环境中密封静置1h，最后经粉碎机制成颗粒状。
对照例3
(1)清洗：将覆盆子放入清水中浸泡10min，并用3倍覆盆子干重的清水清洗两次，每次搅拌5min；
(2)干燥粉碎：将经清洗后的覆盆子用45-50℃热风风干，再利用粉碎机粉碎成粉末，过100目筛，即得覆盆子粉末；
(3)提取：将上述所制覆盆子粉末回流水提三次，每次使用覆盆子干重的5倍的蒸馏水提取1.5h，合并滤液，滤液经减压浓缩至比重达到1.11-1.15，待自然冷却至室温后加入95％乙醇，使所得混合液中乙醇浓度达到80％，充分搅拌，静置5h，再次过滤，即得多糖粗品；
(4)溶解：将上述所得多糖粗品加蒸馏水溶解，过滤，除去不溶性杂质，所得滤液即为待纯化液；
(5)一次纯化：将所得待纯化液上聚酰胺柱，控制出液速度在0.5ml/min；并用蒸馏水洗脱至无多糖类成分流出，控制出液速度在2ml/min，收集洗脱液，即得一次洗脱液；
(6)二次纯化：将一次洗脱液经减压浓缩后上deae-纤维素阴离子柱，控制出液速度在0.5ml/min，并用蒸馏水洗脱至无多糖类成分流出，控制出液速度在2ml/min，收集洗脱液，即得二次洗脱液；
(7)干燥：将上述所得二次洗脱液经喷雾干燥后粉碎，即得覆盆子多糖类成分。
聚酰胺的制备：将140g己二酸溶解于乙醇中，升温至65℃后滴加125g己二胺的乙醇溶液，继续升温至回流状态保温反应，反应结束后自然冷却，过滤，所得滤渣用乙醇洗涤，然后加入15gn-羟甲基丙烯酰胺、5g双季戊四醇和5g六羟甲基三聚氰胺六甲醚，升温至125-130℃保温研磨30min，所得混合物经真空压缩成块，并于10-15℃环境中密封静置1h，最后经粉碎机制成颗粒状。
对照例4
(1)清洗：将覆盆子放入清水中浸泡10min，并用3倍覆盆子干重的清水清洗两次，每次搅拌5min；
(2)干燥粉碎：将经清洗后的覆盆子用45-50℃热风风干，再利用粉碎机粉碎成粉末，过100目筛，即得覆盆子粉末；
(3)提取：将上述所制覆盆子粉末回流水提三次，每次使用覆盆子干重的5倍的蒸馏水提取1.5h，并且加入覆盆子干重0.5％的促提剂，合并滤液，滤液经减压浓缩至比重达到1.11-1.15，待自然冷却至室温后加入95％乙醇，使所得混合液中乙醇浓度达到80％，充分搅拌，静置5h，再次过滤，即得多糖粗品；
(4)溶解：将上述所得多糖粗品加蒸馏水溶解，过滤，除去不溶性杂质，所得滤液即为待纯化液；
(5)一次纯化：将所得待纯化液上聚酰胺柱，控制出液速度在0.5ml/min；并用蒸馏水洗脱至无多糖类成分流出，控制出液速度在2ml/min，收集洗脱液，即得一次洗脱液；
(6)二次纯化：将一次洗脱液经减压浓缩后上deae-纤维素阴离子柱，控制出液速度在0.5ml/min，并用蒸馏水洗脱至无多糖类成分流出，控制出液速度在2ml/min，收集洗脱液，即得二次洗脱液；
(7)干燥：将上述所得二次洗脱液经喷雾干燥后粉碎，即得覆盆子多糖类成分。
促提剂的制备：向30g糯米粉中加入10g泊洛沙姆和0.5g甘草酸二钾，升温至75-80℃保温研磨10min，然后加入3g聚乙二醇4000和0.5g小苏打粉，继续升温至105-110℃保温研磨15min，即得改性糯米粉，待自然冷却至室温后再加入50g田菁胶/多聚谷氨酸和10g羟乙基纤维素，充分混合后经真空压缩成块，并于0-5℃环境中密封静置1h，最后经粉碎机制成粉末，过300目筛，即得促提剂。
田菁胶/多聚谷氨酸的制备：将30g田菁胶和5g藻酸丙二醇酯升温至80-85℃保温研磨5min，再加入20g多聚谷氨酸和2g橄榄油，继续在80-85℃保温研磨15min，向所得混合物中加入300g15-20℃水，充分搅拌后于15-20℃下保温静置30min，然后将所得混合液送入喷雾干燥机中，干燥所得颗粒经粉碎机制成粉末，过200目筛，即得田菁胶/多聚谷氨酸。
聚酰胺的制备：将140g己二酸溶解于乙醇中，升温至65℃后滴加125g己二胺的乙醇溶液，继续升温至回流状态保温反应，反应结束后自然冷却，过滤，所得滤渣用乙醇洗涤，烘干最后经粉碎机制成颗粒状。
实施例3
分别利用实施例1、实施例2、对照例1、对照例2、对照例3和对照例4所述方法对同批等量覆盆子进行多糖类成分进行提取，测定其多糖类成分的提取得率和纯度，结果如表1所示。
表1本发明多糖类成分提取得率和纯度
实施例4
测定实施例1、实施例2提取所得覆盆子多糖类成分的自由基清除作用。
(1)清除dpph自由基能力测试
将实施例1、实施例2提取所得覆盆子多糖类成分与丁基羟基甲苯分别配制成浓度10mg/ml的溶液。
将dpph溶于乙醇中，配制成浓度1.52×10-4m的溶液。
将500μl实施例1、实施例2配制的溶液分别与2500μldpph溶液混合均匀，在室温下避光静置30min，作为试验组；500μl丁基羟基甲苯与2500μldpph溶液混合均匀，在室温下避光静置30min，作为对照组。
利用紫外光/可见光光谱仪测定试验组和对照组在波长517nm的吸光值，并计算dpph自由基清除率，结果如表2所示。
(2)清除abts+自由基能力测试
将实施例1、实施例2提取所得覆盆子多糖类成分与丁基化羟基苯甲醚分别配制成浓度1mg/ml的溶液。
将250μl去离子水、250μl浓度500μm过氧化氢溶液、250μl浓度1000μmabts溶液溶液与250μl浓度8.8u/ml过氧化酶，混合均匀，待产生安定的蓝绿色abts+阳离子自由基时分别加入250μl实施例1、实施例2提取所得覆盆子多糖类成分，混合均匀，静置反应10min，作为试验组；以丁基化羟基苯甲醚配制的溶液替代覆盆子多糖类成分，作为对照组。
利用免疫酵素分析仪测定试验组与对照组在波长410nm时的吸光值，并计算abts+自由基清除率，结果如表2所示。
(3)螯合金属离子能力测试
将实施例1、实施例2提取所得覆盆子多糖类成分与乙二胺四乙酸分别配制成浓度1mg/ml的溶液。
将750μl浓度2mm氯化铁溶液与250μl甲醇分别与500μl实施例1、实施例2提取所得覆盆子多糖类成分配制的溶液混合30s，然后加入1500μl浓度5mm菲洛嗪溶液，于室温下避光静置30min，待反应完全后以转速3000rpm离心5min，取上层澄清液，作为试验组；以500μl乙二胺四乙酸配制的溶液替代覆盆子多糖类成分，作为对照组。
利用紫外光/可见光光谱仪测定试验组和对照组在波长562nm时的吸光值，计算螯合率，结果如表2所示。
(4)还原能力测试
将实施例1、实施例2提取所得覆盆子多糖类成分与丁基化羟基苯甲醚分别配制成浓度10mg/ml的溶液。
将浓度0.2m磷酸二氢钠溶液与浓度0.2m磷酸氢二钠溶液制成浓度2mm且ph值6.6的磷酸盐缓冲溶液。
将500μl实施例1、实施例2提取所得覆盆子多糖类成分配制的溶液分别与250μl磷酸盐缓冲溶液以及250μl浓度1％的赤血盐溶液混合均匀，并在50℃下水浴20min，随后急速冷却5min，再加入250μl浓度10％三氯醋酸溶液，混合均匀，将100μl上层澄清液取出，加入500μl去离子水与750μl浓度0.1％氯化铁溶液，混合均匀，在室温下避光静置30min，作为试验组。以500μl丁基化羟基苯甲醚配制的溶液替代覆盆子多糖类成分，作为对照组。
将200μl试验组与对照组分别加入96孔酵素免疫分析盘中，测定试验组与对照组在波长700nm时的吸光值，计算还原力，结果如表2所示。
表2覆盆子多糖类成分的自由基清除能力
以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。