本发明属于细胞培养领域，具体涉及一种cik细胞培养基。
背景技术：
：细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-inducedkiller，cik)是人外周血单个核细胞在白细胞介素-1、白细胞介素-2、抗cd3单克隆抗体和γ-干扰素联合刺激下获得的增殖能力强、细胞毒作用强的免疫效应细胞，在细胞治疗领域发挥着不可替代的作用。如何提高cik细胞对肿瘤细胞的杀伤力一直是免疫治疗领域研究热点，因为cik细胞的杀伤力直接关乎细胞治疗的疗效。技术实现要素：本发明旨在提供一种cik细胞培养基，以培养出更具杀伤力的cik细胞。本发明通过如下技术方案得以实现：一种cik细胞培养基，为含有胎牛血清的rpmi-1640培养基，还含有人胱抑素c，人胱抑素c的质量浓度为20-30mg/l。优选地，胎牛血清体积浓度为10-20％。优选地，还含有抗生素。优选地，抗生素为青霉素和链霉素，青霉素的浓度为100u/ml，链霉素的浓度为120u/ml。人胱抑素c在提高cik细胞对肿瘤杀伤活性方面的应用。优选地，所述肿瘤为人髓性白血病。本发明优点：本发明提供的培养基可以有效提高cik细胞对肿瘤的杀伤力。附图说明图1为不同组cik细胞对k562细胞的杀伤率(％)。具体实施方式为了更好地解释本发明的技术方案，下面结合具体实施例进一步介绍。实施例中未特别强调的实验材料均为常规实验材料，属于本领域技术人员易于获得的范畴。实施例1：一、实验材料rpmi-1640培养液，美国gibco公司；胎牛血清，美国gibco公司；人胱抑素c，桂林英美特生物技术有限公司，货号kay0001，纯度>96％。二、实验方法1、cik细胞的培养扩增取肝素抗凝的健康志愿者外周血20ml，用淋巴细胞分离液密度梯度离心(2400×g，20min)，轻轻吸取灰白色层的单个核细胞，用生理盐水洗涤3次，以rpmi-1640培养液调整细胞密度为5×106/ml，加到培养瓶内，每瓶15ml，置37℃、5％co2培养箱中培养2h，轻轻摇匀，吸出悬浮细胞，离心后去上清分为两组进行培养：(a)常规组：用含有胎牛血清(体积浓度15％)和ifn-γ(1000u/ml)的rpmi-1640培养基调节细胞密度为2.5×106/ml，然后于37℃、5％co2培养箱内培养24h后再加入il-2(500u/ml)、抗cd3单抗(25ng/ml)继续培养。(b)改进组：用终浓度为25mg/l的人胱抑素c代替ifn-γ，其他同常规组。每隔3d根据细胞浓度补充含有胎牛血清的rpmi-1640培养基，并补充il-2。培养12天后收集cik细胞备用。2、cik细胞的杀伤活性分别将常规组、改进组培养至第12天的cik细胞与对数期的k562细胞按照效靶比5:1和10:1混合，同时设单独的靶细胞及效应细胞孔，用ldh释放法，测定490nm的吸光度(a)值，计算各组cik对k562细胞的杀伤率(％)。三、实验结果培养至第12天常规组、改进组的cik细胞对k562细胞的杀伤率如表1和图1所示。与常规组cik细胞相比，改进组cik细胞对k562细胞的杀伤率明显较高。表1不同组cik细胞对k562细胞的杀伤率(％)效靶比5:1杀伤率(％)效靶比10:1杀伤率(％)常规组32.5±4.145.2±4.7改进组47.3±3.962.5±4.3上述结果表明，人胱抑素c可以提高cik细胞的肿瘤杀伤活性。实施例2一种cik细胞培养基，为含有胎牛血清(体积浓度为15％)的rpmi-1640培养基，还含有人胱抑素c(质量浓度为25mg/l)和青霉素(100u/ml)、链霉素(120u/ml)。实施例3一种cik细胞培养基，为含有胎牛血清(体积浓度为10％)的rpmi-1640培养基，还含有人胱抑素c(质量浓度为20mg/l)和青霉素(100u/ml)、链霉素(120u/ml)。实施例4一种cik细胞培养基，为含有胎牛血清(体积浓度为20％)的rpmi-1640培养基，还含有人胱抑素c(质量浓度为30mg/l)和青霉素(100u/ml)、链霉素(120u/ml)。本发明证明人胱抑素c可以提高cik细胞的肿瘤杀伤活性，本发明提供的含有人胱抑素c的培养基可以用于诱导培养cik细胞。上述实施例仅用于进一步解释本发明的技术方案，本领域技术人员应当明白，任何简单替换或修改均不脱离本发明，本发明的保护范围并不受限于上述具体实施例。技术特征：技术总结本发明公开了一种CIK细胞培养基，该CIK细胞培养基为含有胎牛血清的RPMI‑1640培养基，还含有人胱抑素C，人胱抑素C的质量浓度为20‑30mg/L。本发明证明人胱抑素C可以提高CIK细胞的肿瘤杀伤活性，本发明提供的含有人胱抑素C的培养基可以用于诱导培养CIK细胞。技术研发人员：胡攀勇;张钟祥;黄欣受保护的技术使用者：南京佰泰克生物技术有限公司技术研发日：2017.07.31技术公布日：2017.09.19