抗氧化活性肽及其在美容领域的用途的制作方法

文档序号:13570229阅读:174来源:国知局
本发明涉及化妆品领域,具体涉及一种抗氧化活性肽及其应用。
背景技术
:自由基和衰老之间的关系已被十分普遍地接受,其依据是无氧呼吸过程中产生的自由基会导致氧化损伤,而氧化损伤会积累并导致稳态机制的丧失、干扰基因表达模式以及使得细胞功能丧失,进而导致衰老和死亡。氧化物质的产生、抗氧化剂的保护和对氧化损伤的修复三者之间存在相互联系。已经进行了许多研究来确定抗氧化剂防护是否会随年龄增长而下降。这些研究包括对其主要组分的分析:sod、cat、谷胱甘肽还原酶、谷胱甘肽-s-转移酶的活性或表达,以及具有抗氧化剂特性的低分子量化合物的浓度。例如,黑腹果蝇体内sod和cat的过表达会将预期寿命增加30%并且降低通过蛋白质氧化导致的损伤。将表皮组织暴露于uv线之下会产生自由基以及其他活性氧簇,导致细胞氧化应激,这会明显促进衰老。使皮肤过多暴露于紫外线辐射之下会导致急性或慢性损伤。在急性情况下,会产生红斑或烧伤,而慢性的过度暴露会增加患皮肤癌和衰老的风险。此外,已知表皮细胞会通过增加各种蛋白的表达来对急性或慢性氧化应激起反应,所述蛋白例如维持细胞完整性和抵抗氧化损伤所涉及的酶。氧化是肌肤衰老的最大威胁,饮食不健康,日晒、压力、环境污染等都能让肌肤自由基泛滥,从而产生面色黯淡、缺水等氧化现象。这些都是身体产生氧化的“罪魁祸首”。所以无论从健康层面还是从护肤层面,我们都需要在日常生活中注意抗氧化。人体的抗氧化物质有自身合成的,也有由食物供给的。酶和非酶抗氧化物质在保护由于运动引起的过氧化损伤中起至关重要的作用。补充抗氧化物质有利于运动机体减少自由基的产生或加速其清除,以对抗自由基的副作用,因而对一般人和运动员的健康都有益,可延缓运动性疲劳发生和加快体能恢复。年龄大的体力活动者比年轻者服用抗氧化剂效果更好。多肽是分子结构介于氨基酸和蛋白质之间的一类化合物,使蛋白质具有一定的生理功能。在人类的生命活动中,肽在体内的消化吸收优于游离的氨基酸,且有着区别于氨基酸的体内输送体系。某些短肽在提供人体生长、发育所必需的营养物质的同时,还能够预防或治疗疾病,调节人体机能,这些具有生物活性的多肽被称为生物活性肽。研究发现,很多不同来源的多肽都具有抗氧化能力,如水解酪蛋白、大豆蛋白、牛血清白蛋白、卵白蛋白、油料种子蛋白、小麦醇溶蛋白和玉米蛋白等得到的多肽都具有一定的抗氧化性。cn106589068a公开了一种鲷鱼抗氧化多肽及其制备方法,该方法以鲷鱼鱼皮或鱼鳞蛋白为原料,通过对酸性蛋白酶的酶解,分离纯化得到纯抗氧化多肽。该抗氧化多肽消除了天然抗氧化剂所具有的缺陷并且消除了公众对人工合成抗氧化剂的忧虑,为开发基于食品源的抗氧化多肽以及探索其在食品、医学上的广泛应用奠定了良好基础。cn201210407446公开了一种抗氧化活性合成肽及其用途,且实验证明,其所合成3条多肽具有抗氧化活性,由于该抗氧化肽具有分子量小,活性高,易于人工合成,成本低等特点,可以广泛的用于食品、化妆品、医药等行业的大规模生产。但是,目前市面上还没有让消费者满意的用于化妆品领域的抗氧化肽,尤其是能够应用至化妆品上并产生有益效果的肽。技术实现要素:为了解决上述问题,本发明的发明人经过坚持不懈的努力,开发出了具有抗氧化活性的五肽组合,并发现其在化妆品中具有良好的应用。因而,本发明目的之一为提供具有抗氧化活性的肽,其具有argtyrproleuaspglulys(peptide.01)序列的肽。本发明还提供具有抗氧化活性的肽组合,其包含argtyrproleuaspglulys(peptide.01)序列的肽和glnlysvallyslysphegluser(peptide.02)序列的肽。本发明还提供了具有促进皮肤具有光泽、消除暗黄的化妆品组合物,其包括具有peptide.01的肽,或包含peptide.01和peptide.02的肽组合。本发明的肽或肽组合具有抗氧化活性,进而具有促进皮肤具有光泽、消除暗黄的效果。因此,本发明提供了peptide.01的肽或peptide.01和peptide.02的肽组合在制备用于促进皮肤具有光泽、消除暗黄的组合物中的用途。本发明的肽和肽组合具有抗氧化活性,进而具有促进皮肤具有光泽、消除暗黄的效果。特别的是,本发明的肽和肽组合适于以化妆品形式来使用。因此,本发明还提供化妆品组合物,其包含peptide.01的肽或peptide.01和peptide.02的肽组合。具体实施方式本发明的肽可以使用有机化学的合成方法,例如可以使用固相法(boc法、fmoc法)或液相法等一般的方法,例如可以是使用肽合成装置自动合成。对于肽合成的反应条件等而言,可以基于本领域技术人员的技术常识任意地设定所选择的合成方法或适当的反应条件等。化学合成的肽的纯化方法也是本领域技术人员所熟知的。通过固相合成法得到的肽可以通过高压液相色谱纯化,冷冻干燥而得。本说明书中在述及这些肽时,除了特别明示的情况或者在文字上明显排除的情况下之外,“肽”包含它们的盐。这种盐中,包含钠盐、钾盐等可在生理条件下存在的盐。作为本发明组合物,根据添加形态或制品形态而不同,相对于最终制品本发明的肽的含量为0.0001质量%~1.0质量%、优选为0.005质量%~0.5质量%、更优选为0.005质量%~0.010质量%。本发明的肽或肽组合是在美容上可接受的载体中提供的。载体可以是疏水的或亲水的。适当的疏水载体包括例如,蜡样非离子物质,例如脂肪醇和脂肪酸的酯和醚,碳链长度为c4到c22,优选c8到c18,最优选c12到c18。脂肪性疏水载体的例子包括肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、棕榈酸辛酯、羊毛酸异丙酯、乙酰化羊毛脂醇、c12-c15醇的苯甲酸酯、辛酸鲸蜡酯、棕榈酸鲸蜡酯、肉豆蔻酸肉豆蔻酯、乳酸肉豆蔻酯、醋酸鲸蜡酯、二辛酸/癸酸丙二醇酯、油酸癸酯、乙酰化羊毛脂、庚酸硬脂酸酯、苹果酸二异硬脂酸酯、羟基硬脂酸辛酯、羟基硬脂酸辛酯、异硬脂酸异丙酯等等。适当的亲水载体溶液可以是,例如二醇和化妆品中常用的烷氧基化的二醇,包括乙二醇、二乙二醇、三乙二醇、丙二醇、二丙二醇等等。本文已采用的术语和表述用作描述性而不是限制性术语,并且在此种术语和表述的使用中并不预期排除所示和所述特征或其部分的任何等价物,但应认识到各种修饰在请求保护的本发明的范围内是可能的。因此,应当理解尽管本发明已通过优选实施方案和任选特征具体公开,但本领域技术人员可以采用本文公开的概念的修饰和变化,并且此类修饰和变化被视为在如由附加权利要求定义的本发明的范围内。为更清楚地说明本发明,现结合如下实施例进行详细说明,但这些实施例仅仅是对本发明的示例性描述,并不能解释为对本申请的限制。实施例下面的实施例是用于以非限制性的方式说明本发明。实施例1argtyrproleuaspglulys(peptide.01)序列的肽的固相合成选用高分子树脂,按照氨基酸序列argtyrproleuaspglulys的特征,先将lys的羧基以共价键的形式与树脂相连,然后lys的氨基和glu的羧基缩水反应,处理后,再添加asp,asp的氨基和leu的羧基反应,依次从右到左添加氨基酸,加好最后一个arg氨基酸后,再切除树脂即得到目标合成七肽。高效液相色谱纯化得到最后的产品,纯化过程使用phenomenexc18(4.6*250mm)色谱柱,流速为1.0ml/min。采用两个通道进行洗脱,溶剂a:含有0.1%三氟乙酸的水;溶剂b:含有0.09%三氟乙酸的溶液(80%乙腈+20%水);洗脱梯度过程中b初始比例为39%,在20min内,b的比例上升到49%,检测波长220nm。收集合成七肽溶液,液氮速冷,然后冻干。得到纯度为90%以上的产品,并经esi-ms鉴定结构。实施例2glnlysvallyslysphegluser(peptide.02)序列的肽的固相合成按照与实施例1相同的方案,合成peptide.02肽。实施例3合成的peptide.01肽的abts自由基清除作用用蒸馏水配制7mmol/l的abts+溶液和2.45mmol/l的过硫酸钾溶液(使用前必须先在室温下放置16h),分别将abts+和过硫酸钾溶液按1∶1体积比混合,临用前用ph7.4,5mmol/l的磷酸盐缓冲溶液将混合液稀释至吸光值a734为0.70±0.02。取0.5ml不同浓度的样品和0.5ml的abts自由基溶液混合静置10min后于734nm下测其吸光值。用去离子水和还原型谷胱甘肽代替样品分别作空白对照和阳性对照。abts自由基清除活力按下列公式计算:式中,a0:空白对照组吸光值;as:样品组吸光值。经本实施例测定,peptide.01肽对abts自由基具有较强的清除活力,在浓度为2.5μg/ml时自由基清除率已达80%,当浓度增加到25.0μg/ml时,peptide.01肽的自由基清除率几乎达到97%,远远大于同浓度的阳性对照gsh的自由基清除率。实施例4合成的peptide.01肽、和peptide.01与peptide.02的肽组合用orac法测定抗氧化肽的抗氧化活性值基于orac反应在70mm磷酸钾缓冲液(ph=7.5)环境中进行,荧光剂fl以该缓冲液配制成高浓度储备液,小体积分装后4℃保存。实验时取出必要量以同样70mm磷酸钾缓冲液稀释至反应体系中的终浓度为70nm。aaph(自由基产生剂)以70mm磷酸钾缓冲液配制至反应体系终浓度为12mm使用。标准抗氧化物质trolox以及待测样品也均用缓冲液溶解和稀释。aaph和trolox临时配制使用。具体测定操作为,在96孔板各微孔中分别加入5μm(待测多肽溶液是肽组合的溶液时,peptide.01和peptide.01的浓度均为0.25μm)待测多肽溶液20μl后添加fl120μl在37℃下预置12min后,用多道移液器迅速在各孔中加入aaph60μl启动反应,并将微孔板置于荧光分析仪中在37℃下以激发波长485nm,发射波长520nm,进行连续测定,每1min测定一次各孔荧光强度,测定时间为2h。orac实验需要设定两种对照,即没有添加自由基的fl荧光自然衰减对照(-aaph)和没有抗氧化剂存在时的自由基作用对照(+aaph)。样品的抗氧化能力与自由基作用下荧光衰退曲线的延缓部分面积(netauc)直接相关。抗氧化剂作用下的荧光衰退曲线下面积与无抗氧化剂存在时自由基作用的荧光衰退曲线下面积之差,即荧光熄灭曲线的延迟部分面积netauc为抗氧化剂的保护面积。auc=1+(f1/f0+f2/f0+f3/f0+……+fn/f0)其中f0指开始时荧光值读数;fn指在第n分钟时荧光值读数;netauc=auc抗氧化剂-auc对照。最终结果表示成每微摩尔浓度的待测多肽溶液相当的抗氧化能力所需要的trolox的微摩尔浓度。结果为peptide.01抗氧化多肽的orac活性值分别为6.85±0.3(μmoltrolox/μmol),肽组合的为9.02±0.5(μmoltrolox/μmol),显著高于同等条件下的阳性对照vc和gsh(orac活性值分别为0.96和1.41)。说明上述多肽和肽组合均具有较高的抗氧化活性。实施例5:精华液的配制成分含量(重量%)本发明的肽(peptide.01)0.03谷胱甘肽1.51.3丙二醇3.0白黎芦醇5.0植物甾醇油酸酯3.0富勒烯3.0大豆卵磷脂3.0卡波姆10.0紫苏提取物0.1玫瑰花提取物0.1铁皮石斛提取物0.1马齿苋提取物0.1透明质酸0.2烟酰胺0.1月桂酰精氨酸乙酯0.5纯化水残余量总计100将富勒烯、大豆卵磷脂、卡波姆、植物甾醇油酸酯混合,搅拌均匀后加入其他组分后搅拌并调制成精华液。实施例6:精华液的配制成分含量(重量%)本发明的肽组合(质量比1:1的peptide.01和peptide.02)0.02谷胱甘肽2.51.3丙二醇2.0白黎芦醇6.0植物甾醇油酸酯4.0富勒烯2.0大豆卵磷脂2.0卡波姆12.0紫苏提取物0.5玫瑰花提取物0.2铁皮石斛提取物0.2马齿苋提取物0.4透明质酸0.8烟酰胺0.5月桂酰精氨酸乙酯0.1纯化水残余量总计100将富勒烯、大豆卵磷脂、卡波姆、植物甾醇油酸酯混合,搅拌均匀后加入其他组分后搅拌并调制成精华液。实施例7:精华液的配制成分含量(重量%)本发明的肽(质量比1:1的peptide.01和peptide.02)0.04谷胱甘肽0.51.3丙二醇4.0白黎芦醇4.0植物甾醇油酸酯2.0富勒烯4.0大豆卵磷脂4.0卡波姆8.0紫苏提取物0.2玫瑰花提取物0.15铁皮石斛提取物0.15马齿苋提取物0.2透明质酸1.0烟酰胺0.25月桂酰精氨酸乙酯0.3纯化水残余量总计100将富勒烯、大豆卵磷脂、卡波姆、植物甾醇油酸酯混合,搅拌均匀后加入其他组分后搅拌并调制成精华液。实施例8精华液的活性验证按照实施例5、6和7所示的配方,调制精华液的皮肤外用组合物(提升皮肤光泽,去除暗黄用),并市购同类产品作为对比实施例。对于各皮肤外用组合物,分别让10名30-35岁的女性在脸部按照下述标准评价涂布制剂时的使用感。5分:皮肤表面光泽度高、且光滑效果突出;4分:皮肤表面光泽度一般,且光滑效果可见;3分:没有可见的变化;2分:皮肤表面略有粗涩的感觉,没有美白和显示光滑的效果;1分:皮肤表面有粗涩的感觉,没有美白和显示光滑的效果。算出上述评价结果的平均分,结果表明,实施例5、6和7的平均分均在4.7分以上,对照样品的平均分为3.0分。实施例6和7的效果最突出,平均分为4.9。虽然用上述实施方式描述了本发明,应当理解的是,在不背离本发明的精神的前提下,本发明可进行进一步的修饰和变动,且这些修饰和变动均属于本发明的保护范围之内。序列表<110>银川利智信知识产权咨询服务有限公司<120>抗氧化活性肽及其在美容领域的用途<130>hy1701<160>2<170>siposequencelisting1.0<210>1<211>7<212>prt<213>人工序列()<220>当前第1页12
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