一种西曲瑞克的分离纯化方法与流程

本发明涉及药物纯化领域，特别是一种高效分离纯化西曲瑞克的方法。

背景技术：

西曲瑞克(cetrorelix)是一种黄体激素释放激素(lhrh)拮抗剂。lhrh可与垂体细胞的膜受体结合。西曲瑞克与内源性lhrh竞争性的结合这些受体，从而控制促性腺激素的分泌。西曲瑞克可通过下丘脑-垂体-性腺途径一直依赖性激素的分泌，从而达到间接抑制癌症生长或预防、缓解、治疗其他病症的目的，可用于治疗治疗对激素敏感的前列腺癌和乳腺癌和一些良性妇科疾病(子宫内膜异位症，子宫肌瘤和子宫内膜变薄)。西曲瑞克与gnrh激动剂相比，具有疗程短、不良反应少、可有效降低ohss发生率等优点。

西曲瑞克为十肽：

ac-d-2nal¹-d-4cl-phe²-d-3pal³-ser⁴-tyr⁵-d-cit⁶-leu⁷-arg⁸-pro⁹-d-ala¹⁰-nh2，结构式如下：

目前国内外专利、文献等对西曲瑞克的报道多为合成方法专利，分离纯化方法鲜有报道。cn201510332163.4提供了一种西曲瑞克的合成方法，其中描述了采用c18或c8反相柱色谱分离纯化，流动相为0.05％-0.5％盐酸或磷酸或三氟醋酸的水溶液和乙腈溶液，样品峰合并后转盐，但该方法工序步骤多，导致操作复杂收率降低。因此有必要对西曲瑞克的分离、纯化和制备做更进一步的研究。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种高效分离纯化西曲瑞克的方法，仅需一步层析纯化即可满足西曲瑞克单杂小于0.1％的要求，纯化收率高而稳定，同时本发明分离方法简单方便，可用于规模化生产，大大降低生产成本。

为达到上述目的，本发明的技术方案如下：一种西曲瑞克的分离纯化方法，其特征在于，将西曲瑞克粗提取物进行溶解、过滤；将上述过滤后的西曲瑞克溶液上样到装有unisil微球的层析柱中进行层析；采用酸性水溶液和有机溶剂作为流动相对西曲瑞克溶液进行梯度洗脱；分段收集目的峰值的西曲瑞克溶液，对符合要求的组份液进行汇总。

优选的，所述酸性水溶液为醋酸水溶液。

优选的，所述unisil微球的型号是c18或c8。

优选的，所述有机溶剂为甲醇、乙醇、乙腈、丙酮、异丙醇。

优选的，上样前，对层析柱进行平衡，先高浓度有机相进行除杂，后用浓度低于20％的有机相进行平衡。

优选的，所述梯度洗脱过程为，先用乙睛含量为10-20％的流动相冲洗1-5个柱体积，再用乙睛含量为20-70％的流动相洗脱主峰。

unisilc18或unisilc8是粒径分别为10μm、孔径的高分子微球，该微球具有严格控制的粒径大小和孔径结构(如图1)，为单分散的、具有孔道结构的微球，使其作为色谱填料时具有很好的针对性。

本发明采用有机溶剂和含1％醋酸的水溶液作为流动相，仅用6-10个柱体积就可完成西曲瑞克主峰的洗脱，因此本过程所用流动相安全、无污染且成本较低，并且使用的流动相量较少，纯化周期比较短。

本发明采用单分散的unisilc18或unisilc8作为固定相，仅需一步层析即可使西曲瑞克纯度高于99.5％，单杂小于0.1％，收率可达70％。

因此，本发明方法分离纯化西曲瑞克，不仅纯度高、收率高且稳定，而且操作简单方便，所用固定相可重复利用，所用流动相量少节约，大大降低成本。

附图说明

图1为实施例1使用的unisilc18或unisilc8微球的的扫描电镜照片。

图2为实施例1提纯前的西曲瑞克粗提取物的高效液相色谱分析。

图3为实施例1纯化后的西曲瑞克的高效液相色谱分析。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明的技术方案作进一步的描述，但本发明并不限于这些实施例。

一种西曲瑞克的分离纯化方法，将西曲瑞克粗提取物进行溶解、过滤；将上述过滤后的西曲瑞克溶液上样到装有unisil微球的层析柱中进行层析；采用酸性水溶液和有机溶剂作为流动相对西曲瑞克溶液进行梯度洗脱；分段收集目的峰值的西曲瑞克溶液，对符合要求的组份液进行汇总。

优选的，所述酸性水溶液为醋酸水溶液。

优选的，所述unisil微球的型号是c18或c8。

优选的，所述有机溶剂为甲醇、乙醇、乙腈、丙酮、异丙醇。

优选的，上样前，对层析柱进行平衡，先高浓度有机相进行除杂，后用浓度低于20％的有机相进行平衡。

优选的，所述梯度洗脱过程为，先用乙睛含量为10-20％的流动相冲洗1-5个柱体积，再用乙睛含量为20-70％的流动相洗脱主峰。

实施例1

取纯度为95.46％的西曲瑞克粗提取物，加入1％的醋酸，溶解，加水，加乙腈，溶液中西曲瑞克含量为10mg/ml。待溶液澄清后，用孔径为0.45μm滤膜过滤，收集滤液待用。采用4.6×250mm的色谱柱，unisilc18或c8微球(苏州纳微科技有限公司生产)作为层析柱填料，装柱体积为4.2ml。对层析柱进行柱前预处理，先用高浓度有机相进行除杂，后用浓度低于20％的有机相进行平衡。然后采用1％的醋酸水溶液(a相)和乙睛(b相)作为流动相进行梯度洗脱，流速控制在1ml/min。梯度洗脱过程为，先用20％的b相冲洗20分钟，后在14分钟内浓度梯度由20％b提高至70％b，分段收集目的峰值的溶液，对符合要求的组份液进行汇总，经高效液相色谱分析，洗脱液中西曲瑞克的纯度大于99.8％，单杂小于0.1％，收率大于70％。

图2是提纯前的西曲瑞克粗提取物的高效液相色谱分析，可见有一定的杂质。图3是提纯后的西曲瑞克高效液相色谱分析，可见杂质非常少，杂峰非常小。

实施例2

取纯度为95.46％的西曲瑞克粗提取物，加入1％的醋酸，溶解，加水，加乙腈，溶液中西曲瑞克含量为10mg/ml。待溶液澄清后，用孔径为0.45μm滤膜过滤，收集滤液待用。采用4.6×250mm的色谱柱，unisilc18或c8微球(苏州纳微科技有限公司生产)作为层析柱填料，装柱体积为4.2ml。对层析柱进行柱前预处理，采用1％的醋酸水溶液(a相)和乙睛(b相)作为流动相进行梯度洗脱，流速控制在1ml/min。梯度洗脱过程为，先用10％的b相冲洗8分钟，后用23％b相洗脱，分段收集目的峰值的溶液，对符合要求的组份液进行汇总，经高效液相色谱分析，洗脱液中西曲瑞克的纯度大于99.8％，单杂小于0.1％，收率大于70％。

本发明用于西曲瑞克的深度精纯，仅需一步层析纯化即可满足西曲瑞克单杂小于0.1％的要求，纯化收率高而稳定，同时本发明分离方法简单方便，可用于规模化生产，大大降低生产成本。

以上所述的仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明创造构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。