含笑内酯衍生物、其药物组合物及其制备方法和用途与流程

本发明属于医药技术领域，具体涉及一类新的含笑内酯衍生物，含有它们的药物组合物，及其在制备抗肿瘤和抗炎免疫药物中的用途。

背景技术：

近三十年来，虽然肿瘤的各种诊断和治疗水平有了明显进步，但在世界范围内，肿瘤的发病率和死亡率仍在不断升高。据世界卫生组织(who)预测，到2020年，全球肿瘤的发病人数将增至2000万，死亡人数将达到1200万。2015年，全球820万人死于癌症，其中中国280万。现在中国每天有7500人死于癌症。中国因癌症死亡人数，世界第一。在中国，癌症的患病率是10万分之280，呈现逐年快速增长的趋势。恶性肿瘤的主要生物学特征是侵袭和转移，是肿瘤病人的主要临床致死原因，占肿瘤死亡人数的83％。因此，肿瘤的预防和治疗成为当今疾病治疗领域的重大难题之一。

近几年来，肿瘤化疗取得了相当的进步，肿瘤患者生存时间明显延长，特别是对白血病、恶性淋巴瘤等的治疗有了突破，但对危害人类生命健康最严重的、占恶性肿瘤90％以上的实体瘤的治疗未能达到满意的效果。药学家和肿瘤学家越来越深刻地认识到：要提高肿瘤治疗的疗效，必须从肿瘤发生发展的机制着手，才能取得新的突破性进展。近年来，分子肿瘤学、分子药理学的发展使肿瘤本质正在逐步阐明；大规模快速筛选、组合化学、基因工程等先进技术的发明和应用加速了药物开发进程；抗肿瘤药物的研究与开发已进入一个崭新的时代。当今抗肿瘤药物的发展战略有以下几点：①以占恶性肿瘤90％以上的实体瘤为主攻对象；②从天然产物中寻找活性成分；③针对肿瘤发生发展的机制，寻找新的分子作用(酶、受体、基因)靶点；④大规模快速筛选；⑤新技术的导入和应用：组合化学、结构生物学、计算机辅助设计、基因工程、dna芯片、药物基因组学(功能基因组学与药理学结合)等。

抗肿瘤药物正从传统的细胞毒性药物，向针对肿瘤机制的多环节作用的新型抗肿瘤药物发展,目前国内外关注的抗肿瘤作用的新靶点和相应的新型抗肿瘤剂或手段有：①以细胞信号转导分子为靶点：包括蛋白激酶抑制剂、法尼基转移酶抑制剂、mapk信号转导通路抑制剂、细胞周期调控剂等；②以新生血管为靶点：新生血管生成抑制剂；③减少癌细胞脱落、粘附和基底膜降解：抗肿瘤转移药；④以端粒酶为靶点：端粒酶抑制剂；⑤针对肿瘤细胞耐药性：耐药逆转剂；⑥促进恶性细胞向成熟分化：分化诱导剂；⑦特异性杀伤癌细胞：(抗体或毒素)导向治疗；⑧增强放疗和化疗的疗效：肿瘤治疗增敏剂；⑨提高或调节机体免疫功能：生物反应调节剂；⑩肿瘤的免疫治疗：目前比较热门的单克隆抗体药物pd-1和pd-l1等治疗^[5]。

近年来，从天然产物中寻找抗癌活性化合物已经成为抗癌药物的开发热点，前20年间，全世界推出的药物小分子新化学实体中，有61％可追溯到天然产物。天然产物在某些治疗领域出现率非常高：78％的抗菌化合物和74％的抗肿瘤化合物都是天然产物，或从某个天然产物衍生而来，实践证明，天然产物在抗癌药物发现中的独特作用重新引起高度重视。传统治疗肿瘤的化疗药物均存在耐药问题，尤其是肿瘤干细胞更不敏感。抗癌中药博大精深，高效低毒，从中有可能筛选出高效杀肿瘤干细胞，从而治疗恶性肿瘤的药物。

倍半萜内酯类化合物小白菊内酯(parthenolide)是从小白菊中提取的化合物，最初被用来治疗皮肤感染、风湿病以及偏头痛。近期研究表明，小白菊内酯可抑制前列腺癌、乳腺癌、胃癌、白血病癌、肾癌、肺癌、结肠腺癌、成神经管细胞癌等癌细胞的生长，在动物模型上小白菊内酯还能治疗紫外线引起的皮肤癌。对其作用机理研究发现，小白菊内酯能抑制转录因子nf-kb的激活，其活性可能主要来源于p65/nf-kb亚基的cys38上的巯基与小白菊内酯发生了michael加成反应，由于nf-kb是调控肿瘤侵袭、转移、药物抗性的重要基因，抑制nf-kb的激活有可能提高肿瘤对于抑瘤剂所引起的细胞凋亡的敏感性。最近，纽约罗切斯特大学医学院的joedan,c.t.博士及其同事发现小白菊内酯能够在基本不损伤正常干细胞的情况下，针对性地消灭引发急性和慢性骨髓性白血病的干细胞，从而有可能根本上遏制白血病复发，小白菊内酯这一独特的作用机制，已引起人们的广泛关注。

含笑内酯(micheliolide)也属于倍半萜内酯类化合物，为愈创木烷型倍半萜内酯类化合物，在木兰科植物黄兰mickeliachampacal.的根皮、台湾含笑compressa(maxim.)sarg.的根皮中均有分布。有报道发现含笑内酯在治疗白血病方面同小白菊内酯的效果几乎等同，且其对正常细胞无明显杀伤作用的文献报道[j.nat.prod.1993,6,90-98；bioorg.med.chem.lett.2003,11,1503-1510]。前期发现含笑内酯及其衍生物用于治疗如下癌症：白血病、乳腺癌、前列腺癌，肝癌、食道癌、胃癌、口腔癌、何杰金淋巴癌、胰腺癌、直肠结肠癌、子宫颈癌、非何杰金淋巴癌、神经胶质瘤、黑瘤、膀胱癌、卵巢癌、甲状腺癌、前列腺癌和卡波西肉瘤，并已申请专利[申请号：201010153701.0；201010153685.5]。现有制备含笑内酯的方法主要通过化学合成，中国专利申请号201010153685.5公开了一种含笑内酯的制备方法，以小白菊内酯为原料，在适当有机溶剂中，在lewis酸催化下重排得到含笑内酯，产率达60％以上。

图1act001的化学结构

act001是含笑内酯二甲基胺的衍生物(图1)，是由天然提取物小白菊内酯为原料通过重排反应、二甲氨化和成盐反应制备，act001具有抗脑胶质瘤和白血病作用，目前正在澳洲和中国进行i期临床研究。小白菊内酯和含笑内酯均为倍半萜烯内酯化合物，具有抗炎、免疫调节、抗血小板聚集等特征。该类天然产物主要通过抑制肿瘤坏死因子(tnf-ɑ)、白介素-1(interleukin-1,il-1)、il-12及环氧化酶-2(cox-2)等的表达而具有抗炎作用；也有文献报道通过抑制nf-kb的活化以及磷酸化来促进癌细胞的凋亡，同时抑制l-8、血管内皮生长因子(vascularendotheliagrowthfactor,vegf)的产生而起到抗肿瘤的作用；目前含笑内酯和二甲胺加合物act001主要是用于治疗皮肤感染、偏头痛、风湿病以及治疗肿瘤等疾病。研究表明act001及小白菊内酯是具有抗炎、抗肿瘤、抗血小板聚集、抑制血管平滑肌细胞的增殖、抑制破骨细胞的活性等特征。

技术实现要素：

本发明提供新一类含笑内酯衍生物(5-羟基含笑内酯及其酯衍生物，5-氧代含笑内酯)及其药学上可接受的盐，其制备方法、药物组合物以及其在制备抗肿瘤及抗炎免疫药物中的用途。

为解决本发明的技术问题，本发明提供如下技术方案：

本发明技术方案的第一方面是提供了下列通式所示的含笑内酯衍生物及其药学上可接受的盐：

其中：

r1为氢或c1-8酰基，四氢吡咯甲酰基，四氢呋喃甲酰基，ar-c1-4酰基，ar-o-c1-4酰基，ar-s-c1-4酰基，y-n-c1-4酰基；其中c1-8酰基优选自直链或支链烷酰基、烯酰基和炔酰基；

ar为芳基或取代芳基；y为杂环芳基或取代杂环芳基；ar优选自苯基、苯甲酰基、萘基、吡啶基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、异恶唑基、异噻唑基、吡唑基、恶唑基、噻唑基、咪唑基、哒嗪基、吡嗪基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、吲哚基、喹啉基、异喹啉基、嘌呤基、苯并恶唑基、苯并噻唑基等；y优选自尿嘧啶基、四氢异喹啉基、邻苯二甲酰亚胺基、萘二甲酰亚胺基。r2为c1-7酰基，c1-6烷基；其中，c1-7酰基优选自于乙酰基、丙酰基、丁酰基、异丁酰基，氯乙酰基，苯甲酰基等；c1-6烷基优选自于甲基，乙基，丙基，异丙基，丁基，异丁基，环戊基，环己基等；或者r1＝r2；

r3、r4合并为双键，或者

r3为氢，r4为-ch2nr5r6，其中r5和r6分别为c1-4烃基。

本发明提供了式(i)的含笑内酯衍生物及其药学上可接受的盐，

其特征在于，c5位羟基为(rs)-、(s)-、(r)-和构型；

上述式(i、ii)的含笑内酯衍生物中

优选地，r1为酰基，特别是取代苯甲酰基，取代苯乙酰基，取代萘甲酰基，取代喹啉甲酰基，取代噻吩甲酰基，取代苯硫乙酰基、取代苯并咪唑丁酰基。

优选地，含笑内酯衍生物为下列结构：

优选地，r2为氢或酰基，特别是碳原子数为1-7的酰基。

优选地，r3为氢，r4为-nr5r6，取代的c1-8烷基，优选其中r5和r6分别为c1-4烷基。

其中当r1为h、r2为h和r3＝r4为双键时为5-羟基含笑内酯。

本发明技术方案的第二方面是提供了式(i、ii)含笑内酯衍生物的制备方法如下：

本发明的部分化合物分子中含有碱性基团，可如本专业公认的那样，通过酸处理，转化成药学上可接受的盐。这类成盐的例子包含无机酸盐如盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐或硫酸氢盐、硝酸盐、磷酸盐或磷酸氢盐等以及有机酸盐如甲酸盐、乙酸盐、苯甲酸盐、丁二酸盐、富马酸盐、马来酸盐、乳酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、琥珀酸盐、葡糖酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐等。

本发明技术方案的第三方面是提供了第一方面所述的式(i、ii)的含笑内酯衍生物及其药学上可接受的盐或第三方面所述药物组合物在制备预防或治疗肿瘤或炎症免疫疾病的药物中的应用，其中的肿瘤优选为非小细胞肺癌、结肠癌、胃癌、白血病、淋巴瘤、脑胶质瘤、肝癌等，但不限于上述肿瘤。所述的炎症免疫疾病优选自类风湿关节炎、糖尿病肾病、器官纤维化。

本发明还提供了一种包含上述式(i、ii)含笑内酯衍生物的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物包含权利要求1-5任一项的含笑内酯衍生物及其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体或赋形剂。

本发明化合物用作药物时，可以直接使用，或者以药物组合物形式使用。该药物组合物含有0.1-99％，优选为0.5-90％的本发明化合物，其余为药物学上可接受的、对人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂或与其他抗癌药物联合应用。本发明的药物组合物可以制备成注射剂、片剂、胶囊剂、丸剂、散剂等。

本发明的药物组合物可为控释给药剂型、缓释给药剂型、各种微粒给药系统。

本发明的含笑内酯衍生物及其药学上可接受的盐在制备抗肿瘤和抗炎免疫药物中的应用。

本发明所述的肿瘤优选非小细胞肺癌、结肠癌、胃癌、白血病、淋巴瘤、脑胶质瘤等，但不限于上述肿瘤。

本发明所述的炎症免疫疾病优选类风湿关节炎、糖尿病肾病、器官纤维化、牛皮癣等免疫性疾病，但不限于上述疾病。

本发明技术方案的第四方面是提供了一种药物组合物，所述的药物组合物包含本发明第一方面所述的含笑内酯衍生物及其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体或赋形剂。

本发明的化合物可以例如胶囊剂，片剂，粉剂，粒剂，糖浆或类似剂型形式口服给药，或通过注射，软膏，栓剂或类似剂型非肠胃给药。这些药物制剂可通过使用本领域熟知的辅助剂，如粘合剂，赋形剂，稳定剂，崩解剂，矫味剂，润滑剂等等以普通方法生成，虽然剂量随症状和病人的年龄，疾病或失调的性质及严重性和给药的途径和方式而变，但对成年病人口服给药的情况来说，本发明化合物正常给药为每天总剂量1至1000mg，优选为5至500mg，以为单剂量，或者为分剂量形式；例如每日二次或三次；对于静脉注射的情况，每天可以分一至三次给用0.1至100mg，优选为0.5至50mg的剂量。

有益技术效果

本发明重点提供具有通式(i)(ii)所示的含笑内酯衍生物，主要在含笑内酯的5位碳上引入了氧和羟基，羟基再成酯得到酯类衍生物；不饱和双键和胺加成形成胺化物。通过初步的活性筛选显示，此类衍生物比含笑内酯的抗肿瘤活性提高。提示此类衍生物具有较好的抗肿瘤前景。

附图说明

图1：正在进行临床试验act001的化合物结构

图2：化合物对小鼠肝癌h22的生长抑制作用

图3：化合物对小鼠脑瘤g422的生长抑制作用注：mcl3表示实施例3化合物。

具体实施方式

缩写词：

boc：叔丁氧羰基

dcm：二氯甲烷

dma：二甲胺

dmf：n,n-二甲基甲酰胺

dmap：4-二甲氨基吡啶

edci：1-乙基-(3-二甲氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐

mcl:含笑内酯

ptl:小白菊内酯

ptma：对甲苯磺酸

5-ohmcl:5-羟基含笑内酯

thf：四氢呋喃

tmz：替莫唑胺

本发明公开了一类含笑内酯衍生物，含有它们的盐、溶剂合物、前药与药物组合物的应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

下面结合实施例，进一步阐述本发明：

图.含笑内酯衍生物合成反应式

实施例1含笑内酯(mcl)

将二氯甲烷80ml和对甲苯磺酸(2.0mmol)加入200ml三口瓶中，搅拌下滴加小白菊内酯(ptl,50mmol)和二氯甲烷18ml配置的溶液，滴完后于室温条件下继续搅拌过夜。tlc确认ptl原料完全转化后，使用nahco3(0.35g)以及3.5ml水配制成溶液，加入反应液搅拌1小时，搅拌过程中，反应液逐渐由紫红色褪色为黄色，分出水相，有机相用饱和盐水洗涤2次，浓缩得到黄色固体，用丙酮重结晶低温冷却得浅黄色固体mcl(82％)。

¹hnmr(400mhz,chloroform-d)δ6.22(s,1h,h-13),5.50(s,1h,h-13),3.82(t,1h,h-12),2.75-2.64(m,2h,h-3,h-11),2.62(s,1h,oh),2.50-1.25(m,8h,),1.69(s,3h,ch3),1.33(s,3h,ch3).

实施例25-羟基含笑内酯(5-ohmcl)

将含笑内酯(mcl)(1.0mmol),seo2(0.3mmol)，叔丁基过氧化氢tbhp(2.0mmol)，30ml二氯甲烷，置于100ml圆底烧瓶中，回流反应3小时。经硅藻土过滤，滤液浓缩，柱层析分离(洗脱剂)得到黄色固体(52.6％)。

¹hnmr(400mhz,chloroform-d):δ6.22(s,1h,h-13),5.52(s,1h,h-13),4.33(s,1h,h-5),3.90-3.82(m,1h,h-12),3.37(t,j＝9.5hz,1h,h-3),2.91(d,j＝12.8hz,1h,h-11),2.67-1.58(m,11h),1.29(s,3h,h-15).

实施例35-氧代含笑内酯

将5-羟基含笑内酯(1.0mmol)，dess-martin试剂(0.5mmol)，碳酸氢钠(10mmol)，30ml二氯甲烷，置于100ml圆底烧瓶中，室温搅拌反应3小时。原料反应完毕后，用饱和亚硫酸氢钠溶液淬灭反应，加入30ml二氯甲烷，有机相分别用水、饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离(洗脱剂)得到白色固体(93.6％)。

¹hnmr(400mhz,chloroform-d)δ6.34(s,1h,h-13),5.61(s,1h,h-13),4.28(t,j＝10.0hz,1h,h-12),3.16-3.12(m,1h,h-3),3.00(d,j＝10.9hz,1h,h-11),2.76-1.60(m，10h),1.33(s,3h,h-15).

实施例45-羟基含笑内酯的色酮-2-甲酸酯

将5-羟基含笑内酯(1.0mmol)，色酮-2-甲酸(1.0mmol)，edci(1.5mmol)，dmap(0.1mmol)，20ml二氯甲烷，置于50ml圆底烧瓶中，常温搅拌反应至原料无剩余。反应液转移至分液漏斗中，加入30ml二氯甲烷，有机相分别用饱和碳酸氢钠、水、饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离(洗脱剂)得到白色固体(40.6％)。¹hnmr(400mhz,chloroform-d)δ8.56(s,1h,ar-h),8.03(t,j＝10.0hz,2h,ar-h),7.91(d,j＝10.0hz,2h,ar-h),6.24(d,j＝3.4hz,1h,h-13),5.78(d,j＝5.0hz,1h,h-5),5.51(d,j＝3.4hz,1h,h-13),3.99(t,j＝10.0hz,1h,h-12),3.39(t,j＝15.0hz,1h,h3),3.10(d,j＝15.0hz,1h,h-11),2.53-1.52(m,9h),1.38(s,3h,h-15).

实施例55-羟基含笑内酯的2-萘甲酸酯

将5-羟基含笑内酯(1.0mmol)，2-萘甲酸(1.0mmol)，edci(1.5mmol)，dmap(0.1mmol)，20ml二氯甲烷，置于50ml圆底烧瓶中，常温搅拌反应至原料无剩余。反应液转移至分液漏斗中，加入30ml二氯甲烷，有机相分别用饱和碳酸氢钠、水、饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离(洗脱剂)得到白色固体(47.8％)。¹hnmr(400mhz,chloroform-d)δ8.55(s,1h,ar-h),8.04-7.86(m,4h,ar-h),7.64-7.51(m,2h,ar-h),6.23(d,j＝3.4hz,1h,h-13),5.78(d,j＝3.4hz,1h,h-5),5.50(d,j＝3.4hz,1h,h-13),4.00(t,j＝15.0hz,1h,h-12),3.39(t,j＝15.0hz,1h,h-3),3.10(d,j＝15.0hz,1h,h-11),2.67(s,1h,-oh),2.60-1.71(m,9h),1.36(s,3h,h-15).

实施例65-羟基含笑内酯的3-甲基-2-噻吩甲酸酯

将5-羟基含笑内酯(1.0mmol)，3-甲基-2-噻吩甲酸(1.0mmol)，edci(1.5mmol)，dmap(0.1mmol)，20ml二氯甲烷，置于50ml圆底烧瓶中，常温搅拌反应至原料无剩余。反应液转移至分液漏斗中，加入30ml二氯甲烷，有机相分别用饱和碳酸氢钠、水、饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离(洗脱剂)得到白色固体(37.5％)。

¹hnmr(400mhz,chloroform-d)δ7.41(d,j＝5.0hz,1h,h-20),6.92(d,j＝5.0hz,1h,h-19),6.22(d,j＝3.3hz,1h,h-13),5.63(dd,j＝4.9,1.9hz,1h,h-5),5.49(d,j＝3.1hz,1h,h-13),4.01–3.85(m,1h,h-12),3.40–3.24(m,1h,h-3),3.01(dt,j＝10.9,2.5hz,1h,h-11),2.64(s,1h,-oh),2.55(s,3h,h-21),2.51–1.58(m,9h),1.34(s,3h,h-15).

实施例75-羟基含笑内酯的α-呋喃甲酸酯

将5-羟基含笑内酯(1.0mmol)，α-呋喃甲酸(1.0mmol)，edci(1.5mmol)，dmap(0.1mmol)，20ml二氯甲烷，置于50ml圆底烧瓶中，常温搅拌反应至原料无剩余。反应液转移至分液漏斗中，加入30ml二氯甲烷，有机相分别用饱和碳酸氢钠、水、饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离(洗脱剂)得到白色固体(43.4％)。¹hnmr(400mhz,chloroform-d)δ7.58(s,1h,ar-h),7.17(d,j＝3.5hz,1h,ar-h),6.52(d,j＝3.5hz,1h,ar-h),6.23(d,j＝3.4hz,1h,h-13),5.65(d,j＝4.9hz,1h,h-5),5.48(d,j＝3.4hz,1h,h-13),3.92(t,j＝10.0hz,1h,h-12),3.30(t,j＝15.0hz,1h,h3),3.01(d,j＝15.0hz,1h,h-11),2.60-1.60(m,9h),1.33(s,3h,h-15).

实施例85-羟基含笑内酯的苯氧乙酸酯

将5-羟基含笑内酯(1.0mmol)，苯氧乙酸(1.0mmol)，edci(1.5mmol)，dmap(0.1mmol)，20ml二氯甲烷，置于50ml圆底烧瓶中，常温搅拌反应至原料无剩余。反应液转移至分液漏斗中，加入30ml二氯甲烷，有机相分别用饱和碳酸氢钠、水、饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离(洗脱剂)得到白色固体(52.7％)。¹hnmr(400mhz,chloroform-d)δ7.31–7.27(m,2h,ar-h),7.02–6.94(m,1h,ar-h),6.89–6.83(m,2h,ar-h),6.24(d,j＝3.3hz,1h,h-13),5.84(d,j＝6.4hz,1h,h-5),5.52(d,j＝3.1hz,1h,h-13),4.61(d,j＝2.6hz,2h,h-17),3.84(t,j＝10.3hz,1h,h-12),2.78(d,j＝10.8hz,1h,h-11),2.72–2.59(m,1h,h-3),2.37-1.61(m,10h),1.34(s,3h,h-15).

实施例95-羟基含笑内酯的2-苯基喹啉-4-羧酸酯

将5-羟基含笑内酯(1.0mmol)，2-苯基喹啉-4-羧酸(1.0mmol)，edci(1.5mmol)，dmap(0.1mmol)，20ml二氯甲烷，置于50ml圆底烧瓶中，常温搅拌反应至原料无剩余。反应液转移至分液漏斗中，加入30ml二氯甲烷，有机相分别用饱和碳酸氢钠、水、饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离(洗脱剂)得到白色固体(38.3％)。

¹hnmr(400mhz,chloroform-d)δ8.65–8.57(m,1h,ar-h),8.28(s,1h,ar-h),8.27-8.21(m,1h,ar-h),8.20-8.13(m,2h,ar-h),7.70(dd,2h，ar-h),7.59–7.53(m,2h,ar-h),7.53–7.47(m,1h,h-30),6.25(d,j＝3.4hz,1h,h-13),5.91(dd,j＝4.8,2.2hz,1h,h-5),5.54(d,j＝3.1hz,1h,h-13),3.99(dd,j＝10.8,10.2hz,1h,h-12),3.30(d,j＝9.6hz,1h,h-3),3.05(dt,j＝10.9,2.5hz,1h,h-11),2.64(s,1h,-oh),2.62–1.81(9h,h-4,h-8,h-9,h-14),1.37(s,3h,h-15).

实施例105-羟基含笑内酯的5-氟尿嘧啶-n¹-乙酸酯

将5-羟基含笑内酯(1.0mmol)，2-乙酸-5-氟尿嘧啶(1.0mmol)，edci(1.5mmol)，dmap(0.1mmol)，15mldmf，置于50ml圆底烧瓶中，常温搅拌反应至原料无剩余。反应液浓缩后，转移至分液漏斗中，加入50ml二氯甲烷，有机相分别用饱和碳酸氢钠、水、饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离(洗脱剂)得到白色固体(32.9％)。

¹hnmr(400mhz,chloroform-d)δ8.01(s,1h,-nh),7.76–7.46(m,1h,h-18),6.23(d,j＝3.4hz,1h,h-13),5.52(q,j＝3.9,3.1hz,2h,h-5,h-13),4.54–4.34(m,2h,h-17),3.88(t,j＝10.5hz,1h,h-12),3.24–3.13(m,1h,h-3),2.95–2.89(m,1h,h-11),2.72(s,1h,-oh),2.48–1.36(9h,h-4,h-8,h-9,h-14),1.32(s,3h,h-15)。

实施例115-羟基含笑内酯的5-硝基-2-甲酸酯

将5-羟基含笑内酯(1.0mmol)，5-硝基-2-甲酸(1.0mmol)，edci(1.5mmol)，dmap(0.1mmol)，15mldmf，置于50ml圆底烧瓶中，常温搅拌反应至原料无剩余。反应液浓缩后，转移至分液漏斗中，加入50ml二氯甲烷，有机相分别用饱和碳酸氢钠、水、饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离(洗脱剂)得到白色固体(43.3％)。

¹hnmr(400mhz,chloroform-d)δ7.38–7.28(m,2h,h-18,h-19),6.25(d,j＝3.4hz,1h,h-13),5.72(dd,j＝4.8,2.1hz,1h,h-5),5.51(d,j＝3.1hz,1h,h-13),4.01–3.86(m,1h,h-12),3.28(s,1h,h-3),3.01(d,j＝10.9hz,1h,h-11),2.65(s,1h,-oh),2.55–1.74(9h,h-4,h-8,h-9,h-14),1.35(s,3h,h-15).

实施例125-羟基含笑内酯的3,4,5-三甲氧基苯甲酸酯

将5-羟基含笑内酯(1.0mmol)，3,4,5-三甲氧基苯甲酸(1.0mmol)，edci(1.5mmol)，dmap(0.1mmol)，20ml二氯甲烷，置于50ml圆底烧瓶中，常温搅拌反应至原料无剩余。反应液转移至分液漏斗中，加入30ml二氯甲烷，有机相分别用饱和碳酸氢钠、水、饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离(洗脱剂)得到白色固体(37,9％)。

¹hnmr(400mhz,chloroform-d)δ7.25(s,2h,ar-h),6.23(d,j＝3.4hz,1h,h-13),5.69(dd,j＝4.8,2.2hz,1h,h-5),5.50(d,j＝3.1hz,1h,h-13),3.95(dd,j＝10.9,10.1hz,1h,h-12),3.90(d,j＝0.8hz,9h,h-23,h-24,h-25),3.33–3.19(m,1h,h-3),2.99(dt,j＝10.9,2.8hz,1h,h-11),2.63(s,1h,-oh),2.55-1.69(9h,h-4,h-8,h-9,h-14),1.35(s,3h,h-15).

实施例135-羟基含笑内酯的对氟苯硫乙酸酯

将5-羟基含笑内酯(1.0mmol)，对氟苯硫乙酸(1.0mmol)，edci(1.5mmol)，dmap(0.1mmol)，20ml二氯甲烷，置于50ml圆底烧瓶中，常温搅拌反应至原料无剩余。反应液转移至分液漏斗中，加入30ml二氯甲烷，有机相分别用饱和碳酸氢钠、水、饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离(洗脱剂)得到白色固体(68.3％)。¹hnmr(400mhz,chloroform-d)δ7.41-7.33(m,2h,ar-h),7.04-6.94(m,2h,ar-h),6.20(d,j＝3.4hz,1h,h-13),5.42–5.36(m,2h,h-13,h-5),3.87-3.79(m,1h,h-12),3.60(d,j＝3.5hz,2h,h-18),3.05-2.92(m,1h,h-3),2.83(dt,j＝10.9,2.6hz,1h,h-11),2.59(s,1h,-oh),2.42–1.53(9h,h-4,h-8,h-9,h-14),1.29(s,3h,h-15).

实施例145-羟基含笑内酯的烟酸酯

将5-羟基含笑内酯(1.0mmol)，烟酸(1.0mmol)，edci(1.5mmol)，dmap(0.1mmol)，20ml二氯甲烷，置于50ml圆底烧瓶中，常温搅拌反应至原料无剩余。反应液转移至分液漏斗中，加入30ml二氯甲烷，有机相分别用饱和碳酸氢钠、水、饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离(洗脱剂)得到白色固体(37.5％)。

1hnmr(400mhz,chloroform-d)δ9.21(dd,j＝2.2,0.9hz,1h,h-18),8.80(dd,j＝4.9,1.7hz,1h,h-19),8.29–8.23(m,1h,h-21),7.41(ddd,j＝8.0,4.9,0.9hz,1h,h-20),6.24(d,j＝3.4hz,1h,h-13),5.74(dd,j＝4.9,2.1hz,1h,h-5),5.50(d,j＝3.1hz,1h,h-13),3.95(dd,j＝10.9,10.1hz,1h,h-12),3.36–3.21(m,1h,h-3),3.10–2.93(m,1h,h-11),2.67(s,1h,-oh),2.56–1.72(m,9h),1.35(s,3h,h-15).

实施例155-羟基含笑内酯的4-联苯乙酸酯

将5-羟基含笑内酯(1.0mmol)，4-联苯乙酸(1.0mmol)，edci(1.5mmol)，dmap(0.1mmol)，15mldmf，置于50ml圆底烧瓶中，常温搅拌反应至原料无剩余。反应液浓缩后，转移至分液漏斗中，加入50ml二氯甲烷，有机相分别用饱和碳酸氢钠、水、饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离(洗脱剂)得到白色固体(44.7％)。

¹hnmr(400mhz,chloroform-d)δ7.57–7.30(m,9h,ar-h),6.16(d,j＝3.4hz,1h,h-13),5.43(dd,j＝4.8,2.0hz,1h,h-5),5.35(d,j＝3.1hz,1h,h-13),3.89–3.79(m,1h,h-12),3.66(m,2h,h-17),3.07–2.97(m,1h,h-3),2.84(dt,j＝10.9,2.5hz,1h,h-11),2.57(s,1h,-oh),2.38–1.54(9h,h-4,h-8,h-9,h-14),1.29(s,3h,h-15).

实施例165-羟基含笑内酯的布洛芬酯

将5-羟基含笑内酯(1.0mmol)，布洛芬(1.0mmol)，edci(1.5mmol)，dmap(0.1mmol)，20ml二氯甲烷，置于50ml圆底烧瓶中，常温搅拌反应至原料无剩余。反应液转移至分液漏斗中，加入30ml二氯甲烷，有机相分别用饱和碳酸氢钠、水、饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离(洗脱剂)得到白色固体(31.9％)。

¹hnmr(400mhz,chloroform-d)δ7.16–7.04(m,4h,ar-h),6.22(t,j＝3.5hz,1h,h-13),5.65(d,j＝6.4hz,1h,h-5),5.51(d,j＝2.9hz,1h,h-13),3.82(t,j＝10.3hz,1h,h-12),3.63(q,j＝7.1hz,1h,h-17),2.71(d,j＝10.5hz,1h,h-11),2.68–2.57(m,1h,h-3),2.59(s,1h,-oh),2.48–1.59(m,15h),1.46(d,j＝7.1hz,3h,h-15),0.87(dd,j＝6.6,2.1hz,6h,h-26,h-28).

实施例175-羟基含笑内酯的2-吡咯羧酸酯

将5-羟基含笑内酯(1.0mmol)，2-吡咯羧酸(1.0mmol)，edci(1.5mmol)，dmap(0.1mmol)，20ml二氯甲烷，置于50ml圆底烧瓶中，常温搅拌反应至原料无剩余。反应液转移至分液漏斗中，加入30ml二氯甲烷，有机相分别用饱和碳酸氢钠、水、饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离(洗脱剂)得到白色固体(45.3％)。

¹hnmr(400mhz,chloroform-d)δ9.22(s,1h,-nh),7.01-6.96(m,1h,h-20),6.93(s,1h,h-18),6.28(d,j＝3.7hz,1h,h-19),6.22(d,j＝3.4hz,1h,h-13),5.64(d,j＝2.8hz,1h,h-5),5.48(d,j＝3.1hz,1h,h-13),3.99-3.88(m,1h,h-12),3.37-3.21(m,1h,h-3),3.05-2.96(m,1h,h-11),2.67(s,1h,-oh),2.52-1.66(9h,h-4,h-8,h-9,h-14),1.34(s,3h,h-15).

实施例185-羟基含笑内酯的n-邻苯二甲酰甘氨酸酯

将5-羟基含笑内酯(1.0mmol)，邻苯二甲酰甘氨酸(1.0mmol)，edci(1.5mmol)，dmap(0.1mmol)，20ml二氯甲烷，置于50ml圆底烧瓶中，常温搅拌反应至原料无剩余。反应液转移至分液漏斗中，加入30ml二氯甲烷，有机相分别用饱和碳酸氢钠、水、饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离(洗脱剂)得到白色固体(39.4％)。

¹hnmr(400mhz,chloroform-d)δ7.82(m,4h,ar-h),6.24(d,j＝3.4hz,1h,h-13),5.53(d,j＝3.1hz,1h,h-12),5.50(dd,j＝4.8,2.0hz,1h,h5),4.45(d,j＝3.2hz,2h,h-17),3.83(t,j＝10.5hz,1h,h-12),3.09-2.97(m,1h,h3),2.74-2.65(m,1h,h-11),2.43-1.63(10h,h-4,h-8,h-9,h-14,-oh),1.27(s,3h,h-15).

实施例195-羟基含笑内酯的脯氨酸酯

将5-羟基含笑内酯(1.0mmol)，boc保护的脯氨酸(1.0mmol)，edci(1.5mmol)，dmap(0.1mmol)，20ml二氯甲烷，置于50ml圆底烧瓶中，常温搅拌反应至原料无剩余。反应液转移至分液漏斗中，加入30ml二氯甲烷，有机相分别用饱和碳酸氢钠、水、饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离(洗脱剂)得到白色固体，将固体溶解于10ml二氯甲烷中，加入三氟乙酸(1.0mmol)反应3小时后，浓缩得白色固体(30.3％)。

¹hnmr(400mhz,chloroform-d)δ6.21(dd,j＝9.2,3.4hz,1h,h-13),5.45(m,2h,h-5,h-13),4.32–4.21(m,1h,h-17),3.87(m,1h,h-12),3.58–3.32(m,2h,h-20),3.13(m,1h,h-3),2.62(d,j＝14.4hz,1h,h-11),2.50–1.49(m,15h),1.31(s,3h,h-15).

实施例205-羟基含笑内酯的苯并呋喃-2-羧酸酯

将5-羟基含笑内酯(1.0mmol)，苯并呋喃-2-羧酸(1.0mmol)，edci(1.5mmol)，dmap(0.1mmol)，20ml二氯甲烷，置于50ml圆底烧瓶中，常温搅拌反应至原料无剩余。反应液转移至分液漏斗中，加入30ml二氯甲烷，有机相分别用饱和碳酸氢钠、水、饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离(洗脱剂)得到白色固体(45.2％)。

¹hnmr(400mhz,chloroform-d)δ7.72-7.57(m,2h,h-10,h-23),7.53(d,j＝0.9hz,1h,h-18),7.50-7.28(m,2h,h-21,h-22),6.24(d,j＝3.4hz,1h,h-13),5.74(dd,j＝4.9,2.0hz,1h,h-5),5.51(d,j＝3.1hz,1h,h-13),3.96(dd,j＝10.8,10.2hz,1h,h-12),3.41-3.32(m,1h,h-3),3.07(dt,j＝11.0,2.6hz,1h,h-11),2.64(s,1h,-oh),2.59-1.77(9h,h-4,h-8,h-9,h-14),1.36(s,3h,h-15).

实施例215-羟基含笑内酯的2-吲哚甲酸酯

将5-羟基含笑内酯(1.0mmol)，2-吲哚甲酸(1.0mmol)，edci(1.5mmol)，dmap(0.1mmol)，20ml二氯甲烷，置于50ml圆底烧瓶中，常温搅拌反应至原料无剩余。反应液转移至分液漏斗中，加入30ml二氯甲烷，有机相分别用饱和碳酸氢钠、水、饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离(洗脱剂)得到白色固体(42.9％)。

¹hnmr(400mhz,chloroform-d)δ8.86(s,1h,h-nh),7.75-7.11(m,5h,h-18,h-20,h-21,h-22,h-23),6.24(d,j＝3.4hz,1h,h-13),5.73(dd,j＝4.8,2.0hz,1h,h-5),5.50(d,j＝3.1hz,1h,h-13),3.96(t,j＝10.5hz,1h,h-12),3.40–3.29(m,1h,h-3),3.07(dt,j＝11.0,2.4hz,1h,h-11),2.67(s,1h,-oh),2.57-1.76(9h,h-4,h-8,h-9,h-14),1.36(s,3h,h-15).

实施例225-羟基含笑内酯的(1,8-二萘酰亚胺)-n-丙酸酯

将5-羟基含笑内酯(1.0mmol)，(1,8-二萘酰亚胺)-n-丙酸(1.0mmol)，edci(1.5mmol)，dmap(0.1mmol)，20ml二氯甲烷，置于50ml圆底烧瓶中，常温搅拌反应至原料无剩余。反应液转移至分液漏斗中，加入30ml二氯甲烷，有机相分别用饱和碳酸氢钠、水、饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离(洗脱剂)得到白色固体(48.2％)。

¹hnmr(400mhz,chloroform-d)δ8.86(dd,j＝8.8,1.0hz,1h,ar-h),8.72(dd,j＝7.3,1.0hz,1h,ar-h),8.68(d,j＝8.0hz,1h,ar-h),8.41(d,j＝8.0hz,1h,ar-h),8.00(dd,j＝8.7,7.3hz,2h,ar-h),6.25(d,j＝3.4hz,1h,h-13),5.57(d,j＝3.1hz,1h,h-5),5.47(dd,j＝4.7,2.1hz,1h,h-13),4.50(td,j＝7.0,3.7hz,2h,h-18),3.93–3.83(m,1h,h-12),3.24–3.14(m,1h,h-3),2.93–2.84(m,1h,h-11),2.80(t,j＝7.1hz,2h,h-17),2.58(s,1h,-oh),2.46–1.57(s,9h),1.30(s,3h).

实施例235-羟基含笑内酯的(4-溴苯基)-4-氧代丁酸酯

将5-羟基含笑内酯(1.0mmol)，(4-溴苯基)-4-氧代丁酸(1.0mmol)，edci(1.5mmol)，dmap(0.1mmol)，20ml二氯甲烷，置于50ml圆底烧瓶中，常温搅拌反应至原料无剩余。反应液转移至分液漏斗中，加入30ml二氯甲烷，有机相分别用饱和碳酸氢钠、水、饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离(洗脱剂)得到白色固体(38.0％)。

¹hnmr(400mhz,chloroform-d)δ7.87–7.76(m,2h,ar-h),7.68–7.52(m,2h,ar-h),6.24(d,j＝3.4hz,1h,h-13),5.53(d,j＝3.1hz,1h,h-13),5.45(dd,j＝4.7,2.1hz,1h,h-5),3.94–3.80(m,1h,h-12),3.36–3.14(m,3h,h-18,h-3),2.92–2.82(m,1h,h-11),2.74(td,j＝6.1,1.3hz,2h,h-17),2.60(s,1h,-oh),2.45–1.58(m,9h),1.30(s,3h).

实施例245-羟基含笑内酯的(6,7-二甲氧基四氢异喹啉)-n-丙酸酯

将5-羟基含笑内酯(1.0mmol)，(6,7-二甲氧基四氢异喹啉)-n-丙酸(1.0mmol)，edci(1.5mmol)，dmap(0.1mmol)，20ml二氯甲烷，置于50ml圆底烧瓶中，常温搅拌反应至原料无剩余。反应液转移至分液漏斗中，加入30ml二氯甲烷，有机相分别用饱和碳酸氢钠、水、饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离(洗脱剂)得到白色固体(41.8％)。

¹hnmr(400mhz,chloroform-d)δ6.49(d,j＝26.0hz,2h,ar-h),6.03(d,j＝3.3hz,1h,h-13),5.41(dd,j＝4.7,2.0hz,1h,h-5),5.28(d,j＝3.2hz,1h,h-13),3.82(d,j＝5.7hz,7h,h-12,h-28,h-29),3.66–3.42(m,2h,h-19),3.10(m,1h,h-3),2.91–1.38(m,19h),1.27(s,3h).

实施例255-羟基含笑内酯的(3-氯乙酰胺基)苯甲酸酯

将5-羟基含笑内酯(1.0mmol)，(3-氯乙酰胺基)苯甲酸(1.0mmol)，edci(1.5mmol)，dmap(0.1mmol)，20ml二氯甲烷，置于50ml圆底烧瓶中，常温搅拌反应至原料无剩余。反应液转移至分液漏斗中，加入30ml二氯甲烷，有机相分别用饱和碳酸氢钠、水、饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离(洗脱剂)得到白色固体(43.2％)。

¹hnmr(400mhz,chloroform-d)δ8.33(s,1h,-nh),8.06(t,j＝1.9hz,1h,ar-h),7.99–7.67(m,2h,ar-h),7.46(t,j＝8.0hz,1h,ar-h),6.21(d,j＝3.4hz,1h,h-13),5.70(dd,j＝4.9,2.0hz,1h,h-5),5.48(d,j＝3.1hz,1h,h-13),4.20(s,2h,h-24),3.94(dd,j＝10.8,10.2hz,1h,h-12),3.39–3.24(m,1h,h-3),3.13–3.01(m,1h,h-11),2.70(s,1h,-oh),2.55–1.38(m,9h),1.35(s,3h).

实施例265-羟基含笑内酯的萘普生酯

将5-羟基含笑内酯(1.0mmol)，萘普生(1.0mmol)，edci(1.5mmol)，dmap(0.1mmol)，20ml二氯甲烷，置于50ml圆底烧瓶中，常温搅拌反应至原料无剩余。反应液转移至分液漏斗中，加入30ml二氯甲烷，有机相分别用饱和碳酸氢钠、水、饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离(洗脱剂)得到白色固体(44.7％)。

¹hnmr(500mhz,chloroform-d)δ7.75–7.64(m,3h,ar-h),7.38(d,j＝8.3hz,1h,ar-h),7.16(m,2h,ar-h),6.25(s,1h,h-13),5.74(d,j＝5.8hz,1h,h-5),5.54(s,1h,h-13),3.96(s,3h,h-29),3.84(t,j＝8.9hz,2h,h-5,h-17),2.74(d,j＝10.2hz,1h,h-2),2.66(s,1h,h-11),2.34(s,1h,-oh),2.21–1.23(m,12h),1.01(s,3h,h-15).

实施例275-羟基含笑内酯的苯硫乙酸酯

chemicalformula:c23h26o5s

molecularweight:414.51600

将5-羟基含笑内酯(1.0mmol)，苯硫乙酸(1.0mmol)，edci(1.5mmol)，dmap(0.1mmol)，20ml二氯甲烷，置于50ml圆底烧瓶中，常温搅拌反应至原料无剩余。反应液转移至分液漏斗中，加入30ml二氯甲烷，有机相分别用饱和碳酸氢钠、水、饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离(洗脱剂)得到白色固体(65.2％)。

¹hnmr(400mhz,chloroform-d)δ7.27-7.34(m,5h,ar-h),6.16(d,j＝3.4hz,1h,h-13),5.36(d,j＝12.0hz,1h,h-5),5.34(d,j＝3.4hz,1h,h-13),3.79(t,1h,j＝12.0hz,h-12),3.65(d,j＝3.5hz,2h,h-18),2.50(m,2h),2.35-2.15(m,3h),1.75(m,2h),1.71(s,3h,ch3),1.28(s,3h,ch3).

实施例285-羟基含笑内酯的苯达莫西汀酯

将5-羟基含笑内酯(1.0mmol)，盐酸苯达莫西汀(1.0mmol)，edci(1.5mmol)，dmap(0.1mmol)，20ml二氯甲烷，置于50ml圆底烧瓶中，常温搅拌反应至原料无剩余。反应液转移至分液漏斗中，加入30ml二氯甲烷，有机相分别用饱和碳酸氢钠、水、饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离(洗脱剂)得到白色固体(48.3％)。¹hnmr(400mhz,chloroform-d)δ7.17(d,j＝8.8hz,1h,ar-h),7.06(d,j＝2.3hz,1h,ar-h),6.77(dd,j＝8.8,2.4hz,1h,ar-h),6.21(d,j＝3.4hz,1h,h-13),5.46(d,j＝3.1hz,1h,h-13),5.43(dd,j＝4.8,2.1hz,1h,h-5),3.86(dd,j＝10.9,10.1hz,1h,h-12),3.77–3.56(m,11h),3.23–3.12(m,1h,h-3),2.93(dd,j＝4.5,1.8hz,1h,h-11),2.92–1.40(m,16h),1.30(s,3h,h-15).

实施例295,9-二[(4-双氯乙氨基)苯丁酰基]含笑内酯

chemicalformula:c43h54cl4n2o6

molecularweight:836.71300

将5-羟基含笑内酯(1.0mmol)，苯丁酸氮芥(2.0mmol)，edci(2.5mmol)，dmap(0.2mmol)，20ml二氯甲烷，置于50ml圆底烧瓶中，常温搅拌反应至原料无剩余。反应液转移至分液漏斗中，加入30ml二氯甲烷，有机相分别用饱和碳酸氢钠、水、饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离(洗脱剂)得到白色固体(31.9％)。¹hnmr(400mhz,chloroform-d)δ7.06(t,4h,ar-h),6.65(d,j＝12hz,4h,ar-h),6.25(s,1h,h-13),5.49(s,1h,h-13),5.45(m,1h,h-5),3.89(t,j＝12hz,1h,h-12),3.74–3.58(m,16h,clch2ch2n),3.24(t,j＝10hz,1h,h-3),2.92(d,j＝12hz,1h,h-11),2.56(m,6h),2.38(m,8h),1.83(m,7h),1.77(s,3h,h-14),1.64(t,j＝16hz,2h,h-9),1.31(s,3h,h-15).

实施例305-羟基二甲氨基含笑内酯的对氟苯硫乙酸酯

chemicalformula:c26h36fno5s

molecularweight:493.63440

将5-羟基含笑内酯的对氟苯硫乙酸酯(1.0mmol)溶于10ml二氯甲烷中，搅拌下加入二甲胺的二氯甲烷溶液5ml，常温搅拌反应至原料无剩余。反应液浓缩，得到白色固体(52.7％)。

¹hnmr(400mhz,chloroform-d)δ7.38(t,j＝3.4hz,2h,ar-h),7.00(t,j＝3.4hz,2h,ar-h),5.20(d,2h,h-5),3.98(t,1h,j＝8.0hzh-12),3.54(s,2h,h-21),3.00(m,3h,h-2,3,4),2.70(m,3h),2.69(s,3h,nch3),2.65(s,3h,nch3),2.42-2.25(m,5h),1.85(d,1h),1.61(s,3h,h-16),1.5(m,1h),1.29(s,3h,h-15).

实施例315-羟基二甲氨基含笑内酯的苯硫乙酸酯

chemicalformula:c25h33no5s

molecularweight:459.60100

将5-羟基含笑内酯的苯硫乙酸酯(1.0mmol)溶于10ml二氯甲烷中，搅拌下加入二甲胺的二氯甲烷溶液5ml，常温搅拌反应至原料无剩余。反应液浓缩，得到白色固体(63.9％)。

1hnmr(400mhz,chloroform-d)δ7.37(m,2h,ar-h),7.29(m,2h,ar-h),7.21(m,1h,ar-h),5.32(d,j＝5.2hz,1h,h-5),3.91–3.81(m,1h,h-12),3.62(m,2h,h-21),2.73(m,1h,h-3),2.63(d,j＝12.8hz,1h,h-11),2.54–2.25(m,6h),2.20(s,6h,nch3),1.78(d,j＝9.6hz,2h),1.70(s,3h,h-14),1.65–1.50(m,2h),1.28(s,3h,h-15).

药理实验

实验例1含笑内酯衍生物体外抗肿瘤检测

mtt法测定肿瘤细胞存活率

将对数生长期的细胞用胰酶消化后，配制成一定浓度的单细胞悬液，根据细胞生长速度的差异，按1500-3000个/孔接种于96孔板，每孔加入细胞悬液100μl。次日加入含不同浓度药物及相应溶剂对照的新鲜培养基，每孔加100μl(dmso终浓度<0.1％)，每种受试化合物设4个剂量组(0.05，0.5，5，50μmol/l)每组设三个平行孔。于37℃，5％co2继续培养96h后弃上清，每孔加入200μl新鲜配制的含0.5mg/mlmtt的无血清培养基。继续培养4h，弃上清，每孔加入200μldmso溶解mtt甲簪沉淀，微型振荡器振荡混匀后，酶标仪在检测波长570nm条件下测定光密度值(od)，以溶剂对照处理的肿瘤细胞为对照组，按下列公式计算药物对肿瘤细胞的抑制率，并按中效方程计算ic50：

衍生物体外抗肿瘤筛选结果见表1、表2、表3

表1含笑内酯衍生物mtt筛选结果

表2含笑内酯衍生物mtt筛选结果

hct116：人结肠癌细胞株；nci-h1650：人肺癌细胞株；mgc803：人胃癌细胞株；hl-60：人早幼粒白血病细胞株；k562：人慢性髓系白血病细胞株；

k562/a02：人慢性髓系白血病耐阿霉素细胞株；u-87mg：人胶质母细胞瘤细胞株；ht29：人结肠癌细胞株；mcf-7：人乳腺癌细胞株；mcf-7/taxol：对紫杉醇耐药的人乳腺癌细胞株。

表3含笑内酯衍生物mtt筛选结果

svgp12：人脑胶质细胞(为正常细胞)；u-87mg：人胶质母细胞瘤细胞株；hs683：人视神经母细胞瘤细胞株；u251：人胶质母细胞瘤细胞株；t98g：人胶质母细胞瘤细胞株；daoy：人髓母细胞瘤细胞株；sh-sy5y：人神经母细胞瘤细胞株；sk-n-sh：人神经母细胞瘤细胞株；hct116：人结肠癌细胞株；hepg2：人肝癌细胞株；bgc823：人胃癌细胞株；nci-h460：人肺癌细胞株。

实验例2含笑内酯衍生物体内抗小鼠肝癌h22效果

小鼠肝癌移植瘤h22实验

km小鼠(16～18g)，雄性，无菌条件下取传代接种后7d、生长良好的腹水肿瘤细胞，用无菌生理盐水稀释，调整细胞密度至5×10⁷个/ml，取0.2ml接种于小鼠腋窝皮下。次日随机分组并给药，对照组每日口服灌胃蒸馏水，每20g小鼠灌胃0.4ml，每日一次；ctx(环磷酰胺)配制成6.0mg/ml，每20g小鼠腹腔注射给药0.2ml，共给药1次；受试药组分别配制成5.0mg/ml浓度的药液，每20g小鼠灌胃给药0.4ml，每日给药一次，连续给药9日。实验结束时将小鼠脱臼处死，然后剥离肿瘤，称重并拍照。最后计算肿瘤抑制率。

体内抗肿瘤活性效果见表4和图2。

表4化合物对小鼠肝癌h22的生长抑制作用

***p<0.001，与溶剂对照组比较。

实验例3含笑内酯衍生物体内抗小鼠异位胶质瘤效果

小鼠异位胶质瘤g422实验

km小鼠(19～21g)，雄性，取生长良好的g422肿瘤组织，剪碎，研磨，用无菌生理盐水按1：3比例稀释后制成肿瘤细胞悬液，每只小鼠腋背部接种0.2ml瘤液。接种后次日动物随机分组，称重，并开始给药。溶剂对照组按每20g小鼠灌胃0.4ml无菌蒸馏水，每日1次，共11天。tmz(替莫唑胺)配制成1.5mg/ml，给药体积为每20g小鼠灌胃0.4ml,每天给药1次，共连续给药5天，实施例3分别配制成2.0mg/ml，4.0mg/ml，给药体积为每20g小鼠灌胃0.4ml，每日给药1次，共给药11天。实验结束时将小鼠脱臼处死，然后剥离肿瘤，称重并拍照。最后计算肿瘤抑制率。见表5、6、7、8、9-1、9-2。

表5化合物对小鼠脑瘤g422的生长抑制作用

***p<0.001，与溶剂对照组比较。

表6化合物对小鼠脑瘤g422的生长抑制作用

***p<0.001，与溶剂对照组比较。

表7化合物对脑瘤g422小鼠脾指数及胸腺指数的影响

*p<0.05，**p<0.01，与溶剂对照组比较。

表8化合物对脑瘤g422小鼠外周血计数的影响

*p<0.05，**p<0.01，与溶剂对照组比较；

wbc：白细胞计数

lym％：淋巴细胞比率

mon％：单核细胞比率

neut％：中性粒细胞比率

表9-1化合物对脑瘤g422小鼠外周血计数的影响

表9-2化合物对脑瘤g422小鼠外周血计数的影响

*p<0.05，与溶剂对照组比较；

rbc：红细胞计数

hgb：血红蛋白

hct：红细胞比容

mcv：红细胞平均容积

mch：红细胞平均血红蛋白含量

mchc：红细胞平均血红蛋白浓度

rdw：红细胞分布宽度

表10化合物对脑瘤g422小鼠外周血计数的影响

plt：血小板计数

pct：血小板比积

mpv：血小板平均体积

pdw：血小板体积分布宽度。