本发明涉及微生物检测
技术领域：
，具体而言，涉及一种检测培养基以及复合微生态制剂中乳酸菌总数的检测方法。
背景技术：
：微生态制剂作为一种饲料添加剂，已经广泛运用至畜牧业和养殖业。为了改善动物肠道环境，减少抗生素的使用，常用的微生态制剂已经不再是单一的微生态产品，而是更多的采用两种或者两种以上的益生菌复合配制的微生态产品。其中就包括乳酸菌和酵母菌的复配。乳酸菌总数的检测，已有国家标准可以遵循，如gb4789.35-2010乳酸菌总数检验，但是市场上为适应多种条件和多种宿主，将多种不同的微生态制剂，如乳酸菌、酵母菌按照一定比例复合配制得到的复合微生态产品。而在检测复合微生态制剂中乳酸菌总数的时候，按照国标检测方法进行的话，乳酸菌的总数检测就会受其他微生态产品的严重干扰，如酵母类，其原因有：一、酵母类的微生物虽然培养时间稍长，但是在采用mrs培养基进行检测时，其前期的酵母类菌落形态，如酿酒酵母和乳酸菌的菌落形态非常相近(酵母生长在固体培养基上时，菌落表面一般光滑、湿润、有粘稠性，大多数是乳白色；乳酸菌生长在固体培养基上时，菌落边缘整齐、圆形，表面光泽，乳白色)，会造成乳酸菌的计数不准确。二、复合制剂中酵母类的添加量与乳酸菌类的较为接近时，后期虽然依然可以从菌落形态上分辨，但是培养时间长；而在酵母添加量远大于乳酸菌时，酵母会长满平板，造成乳酸菌无法检出。所以复合微生态制剂中乳酸菌总数的准确和快速检测是生产厂家以及饲料厂家的一大难点技术。目前虽然可用抗生素抑制酵母类的生长，如纳他霉素等；但是，在培养基中添加抗生素，需先行用无菌滤膜过滤备用，然后等溶解过后的固体培养基冷却至适宜温度后加入，这样使操作繁琐，且增加了染菌几率。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种检测培养基，其能够有效抑制乳酸菌中酵母的生长。本发明的另一目的在于提供一种复合微生态制剂中乳酸菌总数的检测方法，其能省掉添加抗生素的繁琐操作，在检测过程中，就可以有效抑制乳酸菌中酵母的生长，不需要额外添加抗生素。本发明的实施例是这样实现的：一种检测培养基，按重量份数计，其组分按重量份数计包括：牛肉浸粉5-10份、酵母浸粉5-8份、麦芽糖5-20份、硫酸镁0.1-0.3份、乙酸钠3-5份、柠檬酸铵10-20份、硫酸锰0.05-0.1份、山梨酸钾0.2-0.8份、谷氨酸钠1-5份、琼脂粉15-20份以及蒸馏水1000份；检测培养基的ph值为5.5-7.0。一种复合微生态制剂中乳酸菌总数的检测方法，其包括以上述检测培养基对复合微生态制剂的待检测样品进行培养，并对长出的菌落进行计数和观察。本发明实施例的有益效果例如包括：本发明通过对检测培养基进行改良，起到抑制复合微生态制剂中酵母类微生物，而不影响乳酸菌的生长的作用，进而达到准确检测乳酸菌总数的目的。该检测培养基的组成简单、制备操作方便，检测方法简单，有利于快速检测结果。乳酸菌生长在培养基表面，便于菌落的形态观察和分析。具体实施方式下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。下面对本发明实施例的检测培养基以及复合微生态制剂中乳酸菌总数的检测方法进行具体说明。一种检测培养基，其组分按重量份数计包括：牛肉浸粉5-10份、酵母浸粉5-8份、麦芽糖5-20份、硫酸镁0.1-0.3份、乙酸钠3-5份、柠檬酸铵10-20份、硫酸锰0.05-0.1份、山梨酸钾0.2-0.8份、谷氨酸钠1-5份、琼脂粉15-20份以及蒸馏水1000份；所述检测培养基的ph值为5.5-7.0。牛肉浸粉是以牛肉为原料，经热处理，过滤、浓缩、干燥制成牛肉原粉，再将牛肉原粉经过水解、固液分离、冷藏、过滤、浓缩及干燥等工序获得的粉末。酵母浸粉是采用新鲜酵母为原料，经酵母酶解自溶、分离过滤、浓缩、干燥而得到的一种黄色的粉状物。牛肉浸粉和酵母浸粉为培养乳酸菌提供氮源，麦芽糖为培养乳酸菌提供碳源。镁元素是许多酶的活化剂，能促进碳水化合物的新陈代谢、核酸的合成、磷酸盐的转化等，本实施例中选用硫酸镁为培养基提供镁元素。硫酸镁、乙酸钠、柠檬酸铵以及硫酸锰为培养乳酸菌提供生长因子，并且还能抑制某些杂菌，琼脂是培养基的凝固剂。本实施例中通过向培养基内加入山梨酸钾以及谷氨酸钠，其中，山梨酸钾能够提高培养基抑制酵母菌的作用，而谷氨酸钠能够起到促进乳酸菌生长的作用。并且调节培养基的ph值为5.5-7.0，由于乳酸菌在培养过程中会产生乳酸，培养基会逐渐呈酸性，进一步抑制酵母菌的生长。优选地，检测培养基的组分按重量份数计包括：牛肉浸粉8-10份、酵母浸粉5-6份、麦芽糖10-20份、硫酸镁0.1-0.2份、乙酸钠3-4份、柠檬酸铵10-15份、硫酸锰0.05-0.07份、山梨酸钾0.2-0.5份、谷氨酸钠2-5份、琼脂粉15-18份以及蒸馏水1000份；所述检测培养基的ph值为5.5-6.0。进一步地，还可以在上述培养基中加入苯甲酸、苯甲酸钠、苯甲酸钾、对羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸乙酯以及对羟基苯甲酸丁酯中的一种或多种；苯甲酸、苯甲酸钠、苯甲酸钾、对羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸乙酯以及对羟基苯甲酸丁酯的加入能够进一步加强检测培养基对酵母类微生物的抑制作用。优选地，检测培养基中还包括对羟基苯甲酸乙酯1-5份以及对羟基苯甲酸丁酯1-5份，对羟基苯甲酸乙酯以及对羟基苯甲酸丁酯对霉菌和酵母菌具有较强的抑制作用，对细菌特别是对乳酸菌及革兰阴性杆菌的作用较差，通过在检测培养基中加入对羟基苯甲酸乙酯以及对羟基苯甲酸丁酯，能够在不影响乳酸菌的培养作用下有效抑制酵母菌的生长。对上述混合均匀的检测培养基进行灭菌，具体地，将检测培养基置于灭菌温度为115℃-121℃的条件下灭菌20-30分钟。还需要说明的是，为了增强检测培养基对酵母类微生物的抑制作用，本实施例中，优选通过自主制备山梨酸钾和谷氨酸钠，通过对山梨酸钾和谷氨酸钠的制备工艺进行改进，使得山梨酸钾对酵母类微生物的抑制作用更强，同时谷氨酸钠对乳酸菌生长的促进作用更强。具体地，本实施例中，山梨酸钾是通过将山梨酸、碳酸钾以及叶酸溶于水中，于70-80℃下反应30-40min得到山梨酸钾溶液，接着将山梨酸钾溶液置于干燥温度为150-160℃下进行喷雾干燥，得到山梨酸钾；其中，山梨酸、碳酸钾以及叶酸的质量比为：1:0.3-0.4:0.03-0.06。本实施例中，通过在山梨酸和碳酸钾中加入叶酸，叶酸不仅仅能够为乳酸菌的生长提供养分，同时还能加快在山梨酸和碳酸钾的反应速度，缩短反应时间。本实施例中，谷氨酸钠也是自主制备而得，具体地，将淀粉、尿素、磷酸钾、硫酸铁和硫胺混合后杀菌，接种嗜氨小杆菌，搅拌培养，在搅拌过程中送入无菌空气，经过滤除去菌体后得到谷氨酸结晶体，利用碳酸钠中和谷氨酸结晶体，得到谷氨酸钠。其中，无菌空气的送入量为淀粉、尿素、磷酸钾、硫酸铁和硫胺总量的25-40％。本实施例中，以制备动物饲料常用的脱脂大豆为原料，实验室容易获得，制备谷氨酸钠的操作简单，仪器为实验室常用仪器，制得的谷氨酸钠的纯度高，利于使用。此外，本发明实施例还提供了一种复合微生态制剂中乳酸菌总数的检测方法，其包括以上述制备的检测培养基对复合微生态制剂的待检测样品进行培养，并对长出的菌落进行计数和观察。由于上述制备的检测培养基能够有效抑制酵母类微生物的生长，但是不会抑制乳酸菌的生长，因此，能够极大的减少检测乳酸菌时酵母类微生物对检测结果的影响。具体地，该复合微生态制剂中乳酸菌总数的检测方法包括以下步骤：s1：样品稀释，取样品，用生理盐水稀释至预设浓度得菌悬液；a、称1g样品，于99ml0.85％生理盐水中，150r/min室温下振荡60min，即制成浓度为0.01菌悬液；b、取0.5ml0.01菌悬液于4.5ml生理盐水中即成10-3菌悬液，依次稀释至适宜稀释度。s2：制作平板a、将灭过菌的培养基倒于空白培养皿中，15-20ml/min，冷却制成培养基平板；b、取适宜稀释度菌悬液0.1-0.3ml分别涂布于平板培养基上。s3：培养和计数：将培养皿平板倒置于35-40℃恒温箱内，培养24-72h，观察长出的单菌落，选择含有30-300个菌落的培养基平板进行结果计算。乳酸菌单菌落形态观察：在本发明培养基上，乳酸菌为乳白色、圆形、边缘整齐、凸起、表面有光泽，菌落直径0.5-2mm。本发明通过对检测培养基进行改良，起到抑制复合微生态制剂中酵母类微生物，而不影响乳酸菌的生长的作用，进而达到准确检测乳酸菌总数的目的。该检测培养基的组成简单、制备操作方便，检测方法简单，有利于快速检测结果。乳酸菌生长在培养基表面，便于菌落的形态观察和分析。以下结合实施例对本发明的检测培养基以及复合微生态制剂中乳酸菌总数的检测方法进一步进行阐述。实施例1：复合微生态制剂(含有乳酸菌和酵母，且酵母添加量与乳酸菌添加量相近)的检测1、实施例1提供的检测培养基：牛肉浸粉10g，酵母浸粉5g，麦芽糖20g，硫酸镁0.1g、乙酸钠3g、柠檬酸铵10g、硫酸锰0.05g、谷氨酸钠2g、山梨酸钾0.5g、琼脂粉15g、蒸馏水1000ml。用10％盐酸或30％氢氧化钠调ph值6.0，115℃灭菌30分钟。待培养基冷却至50℃左右，倾倒空白培养皿，20ml/皿，制成平板培养基，冷却至室温。2、称1g样品，于99ml0.85％生理盐水中，150r/min室温下振荡60min，即制成10-2菌悬液；取0.5ml10-2菌悬液于4.5ml生理盐水中即成10-3菌悬液，依次稀释至适宜稀释度。取0.1ml适宜稀释度菌悬液均匀涂布于1制成在平板培养基中。3、将培养皿倒置于37℃培养箱中培养48-72h，观察长出的菌落，选择含有30-300个菌落的培养基平板进行结果计算。本发明检测结果，乳酸菌为2.5×107cuf/g，酵母类未检出。实施例2：复合微生态制剂(含有乳酸菌和酵母，且酵母的添加量远大于乳酸菌的添加量)的检测1、实施例2提供的检测培养基：牛肉浸粉10g，酵母浸粉5g，麦芽糖20g，硫酸镁0.1g、乙酸钠3g、柠檬酸铵10g、硫酸锰0.05g、谷氨酸钠2g、山梨酸钾0.5g、琼脂粉15g、蒸馏水1000ml。用10％盐酸调或30％氢氧化钠ph值6.0，115℃灭菌30分钟。待培养基冷却至50℃左右，倾倒空白培养皿，20ml/皿，制成平板培养基，冷却至室温。2、称1g样品，于99ml0.85％生理盐水中，150r/min室温下振荡60min，即制成10-2菌悬液；取0.5ml10-2菌悬液于4.5ml生理盐水中即成10-3菌悬液，依次稀释至适宜稀释度。取0.1ml适宜稀释度菌悬液均匀涂布与1制成在平板培养基中。3、将培养皿倒置于37℃培养箱中培养48-72h，观察长出的菌落，选择含有30-300个菌落的培养基平板进行结果计算。本发明检测结果，乳酸菌为3.4×104cuf/g，酵母类未检出。实施例3：单一微生态制剂(仅含有乳酸菌)的检测实施例3提供的检测培养基：牛肉浸粉10g，酵母浸粉5g，麦芽糖20g，硫酸镁0.1g、乙酸钠3g、柠檬酸铵10g、硫酸锰0.05g、谷氨酸钠3g、山梨酸钾0.5g、琼脂粉15g、蒸馏水1000ml。用10％盐酸或30％氢氧化钠调ph值6.0，115℃灭菌30分钟。待培养基冷却至50℃左右，倾倒空白培养皿，20ml/皿，制成平板培养基，冷却至室温。本发明检测结果为24.7亿/g。实施例4本实施例提供的检测培养基为：牛肉浸粉5g，酵母浸粉8g，麦芽糖5g，硫酸镁0.3g、乙酸钠5g、柠檬酸铵20g、硫酸锰0.1g、谷氨酸钠5g、山梨酸钾0.8g、琼脂粉20g、蒸馏水1000ml。用30％氢氧化钠调ph值7.0，121℃灭菌20分钟。待培养基冷却至50℃左右，倾倒空白培养皿，20ml/皿，制成平板培养基，冷却至室温。实施例5本实施例提供的检测培养基为：牛肉浸粉8g，酵母浸粉6g，麦芽糖15g，硫酸镁0.2g、乙酸钠4g、柠檬酸铵15g、硫酸锰0.07g、谷氨酸钠3g、山梨酸钾0.5g、琼脂粉18g、对羟基苯甲酸乙酯4.5g以及对羟基苯甲酸丁酯1.5g，蒸馏水1000ml。用10％盐酸调ph值5.5，121℃灭菌25分钟。待培养基冷却至50℃左右，倾倒空白培养皿，20ml/皿，制成平板培养基，冷却至室温。实施例6本实施例提供的检测培养基为：牛肉浸粉8g，酵母浸粉6g，麦芽糖15g，硫酸镁0.2g、乙酸钠4g、柠檬酸铵15g、硫酸锰0.07g、谷氨酸钠3g、山梨酸钾0.5g、琼脂粉18g、对羟基苯甲酸乙酯1g以及对羟基苯甲酸丁酯5g，蒸馏水1000ml。用10％盐酸调ph值5.5，121℃灭菌25分钟。待培养基冷却至50℃左右，倾倒空白培养皿，20ml/皿，制成平板培养基，冷却至室温。其中，本实施例中谷氨酸钠通过市售购买获得。实施例7本实施例提供的检测培养基为：牛肉浸粉8g，酵母浸粉6g，麦芽糖15g，硫酸镁0.2g、乙酸钠4g、柠檬酸铵15g、硫酸锰0.07g、谷氨酸钠3g、山梨酸钾0.5g、琼脂粉18g、对羟基苯甲酸乙酯1g以及对羟基苯甲酸丁酯5g，蒸馏水1000ml。用10％盐酸调ph值5.5，121℃灭菌25分钟。待培养基冷却至50℃左右，倾倒空白培养皿，20ml/皿，制成平板培养基，冷却至室温。其中，谷氨酸钠是通过以下方法制得：将淀粉10g、尿素10g、磷酸钾10g、硫酸铁10g和硫胺10g混合后杀菌，接种嗜氨小杆菌，搅拌培养，在搅拌过程中送入20g的无菌空气，经过滤除去菌体后得到谷氨酸结晶体，利用碳酸钠中和所述谷氨酸结晶体，得到谷氨酸钠。实施例8本实施例提供的检测培养基为：牛肉浸粉8g，酵母浸粉6g，麦芽糖15g，硫酸镁0.2g、乙酸钠4g、柠檬酸铵15g、硫酸锰0.07g、谷氨酸钠3g、山梨酸钾0.5g、琼脂粉18g、苯甲酸1.5g、苯甲酸钠1.5g、苯甲酸钾1.5g、对羟基苯甲酸乙酯1.5g以及对羟基苯甲酸丁酯1.5g，蒸馏水1000ml。用10％盐酸调ph值5.5，121℃灭菌25分钟。待培养基冷却至50℃左右，倾倒空白培养皿，20ml/皿，制成平板培养基，冷却至室温。其中，山梨酸钾是通过市售购买获得。实施例9本实施例提供的检测培养基为：牛肉浸粉8g，酵母浸粉6g，麦芽糖15g，硫酸镁0.2g、乙酸钠4g、柠檬酸铵15g、硫酸锰0.07g、谷氨酸钠3g、山梨酸钾0.5g、琼脂粉18g、苯甲酸1.5g、苯甲酸钠1.5g、苯甲酸钾1.5g、对羟基苯甲酸乙酯1.5g以及对羟基苯甲酸丁酯1.5g，蒸馏水1000ml。用10％盐酸调ph值5.5，121℃灭菌25分钟。待培养基冷却至50℃左右，倾倒空白培养皿，20ml/皿，制成平板培养基，冷却至室温。其中，山梨酸钾是通过以下方法制得：山梨酸、碳酸钾以及叶酸溶于水中，于70℃下反应40min得到山梨酸钾溶液，将山梨酸钾溶液置于干燥温度为150℃下进行喷雾干燥30min，得到山梨酸钾；其中，山梨酸、碳酸钾以及叶酸的质量比为：1:0.3:0.03。实施例10本实施例提供的检测培养基为：牛肉浸粉8g，酵母浸粉6g，麦芽糖15g，硫酸镁0.2g、乙酸钠4g、柠檬酸铵15g、硫酸锰0.07g、谷氨酸钠3g、山梨酸钾0.5g、琼脂粉18g、苯甲酸1.5g，蒸馏水1000ml。用10％盐酸调ph值5.5，121℃灭菌25分钟。待培养基冷却至50℃左右，倾倒空白培养皿，20ml/皿，制成平板培养基，冷却至室温。其中，谷氨酸钠是通过以下方法制得：将淀粉10g、尿素10g、磷酸钾10g、硫酸铁10g和硫胺10g混合后杀菌，接种嗜氨小杆菌，搅拌培养，在搅拌过程中送入12.5g的无菌空气，经过滤除去菌体后得到谷氨酸结晶体，利用碳酸钠中和谷氨酸结晶体，得到谷氨酸钠。山梨酸钾是通过以下方法制得：山梨酸、碳酸钾以及叶酸溶于水中，于80℃下反应40min得到山梨酸钾溶液，将山梨酸钾溶液置于干燥温度为160℃下进行喷雾干燥25min，得到山梨酸钾；其中，山梨酸、碳酸钾以及叶酸的质量比为：1:0.4:0.06。对比实验对比例1常用乳酸菌培养基mrs：蛋白胨10g、牛肉粉5g、酵母粉4g、葡萄糖20g、吐温-801ml、磷酸氢二钾2g、乙酸钠5g、柠檬酸三铵2g、硫酸镁0.2g、硫酸锰0.05g、琼脂粉15g、蒸馏水1000ml，ph值6.2，分装后115℃灭菌30分钟。按照对比例1提供的常用乳酸菌培养基mrs对实施例1提供的同一样品(含有乳酸菌和酵母，且添加量相近)进行检测，从实施例1可以看出，其检测结果：乳酸菌为2.5×107cuf/g，酵母类未检出。而对比例1提供的常用乳酸菌培养基mrs检测结果为：2.5×107cuf/g，酵母为2.4×107cuf/g。对比例2常用乳酸菌培养基mrs：蛋白胨10g、牛肉粉5g、酵母粉4g、葡萄糖20g、吐温-801ml、磷酸氢二钾2g、乙酸钠5g、柠檬酸三铵2g、硫酸镁0.2g、硫酸锰0.05g、琼脂粉15g、蒸馏水1000ml，ph值6.2，分装后115℃灭菌30分钟。按照对比例2提供的常用乳酸菌培养基mrs对实施例2提供的同一样品(含有乳酸菌和酵母，且酵母添加量远大于乳酸菌)进行检测，从实施例2可以看出，其检测结果：乳酸菌为3.4×104cuf/g，酵母类未检出，而对比例2提供的常用乳酸菌培养基mrs检测结果为：酵母为2.4×107cuf/g，乳酸菌无法检测。对比例3常用乳酸菌培养基mrs：蛋白胨10g、牛肉粉5g、酵母粉4g、葡萄糖20g、吐温-801ml、磷酸氢二钾2g、乙酸钠5g、柠檬酸三铵2g、硫酸镁0.2g、硫酸锰0.05g、琼脂粉15g、蒸馏水1000ml，ph值6.2，分装后115℃灭菌30分钟。按照对比例3提供的常用乳酸菌培养基mrs对实施例3提供的同一样品(仅含有乳酸菌)进行检测，从实施例3可以看出，其检测结果：乳酸菌为24.7亿/g。而对比例3提供的常用乳酸菌培养基mrs检测结果为：乳酸菌25亿/g。结合实施例1-3以及对比例1-3，可以看出本发明能够有效地抑制酵母类的生长，同时对乳酸菌的总数的计数结果没有影响。对比例4添加有市售购买的谷氨酸钠的常用乳酸菌培养基mrs：蛋白胨10g、牛肉粉5g、酵母粉4g、葡萄糖20g、吐温-801ml、磷酸氢二钾2g、乙酸钠5g、柠檬酸三铵2g、硫酸镁0.2g、硫酸锰0.05g、琼脂粉15g、谷氨酸钠3g、蒸馏水1000ml，ph值6.2，分装后115℃灭菌30分钟。对比例5添加有如实施例7制备的谷氨酸钠的常用乳酸菌培养基mrs：蛋白胨10g、牛肉粉5g、酵母粉4g、葡萄糖20g、吐温-801ml、磷酸氢二钾2g、乙酸钠5g、柠檬酸三铵2g、硫酸镁0.2g、硫酸锰0.05g、琼脂粉15g、谷氨酸钠3g、蒸馏水1000ml，ph值6.2，分装后115℃灭菌30分钟。对比例6添加有市售购买的山梨酸钾的常用乳酸菌培养基mrs：蛋白胨10g、牛肉粉5g、酵母粉4g、葡萄糖20g、吐温-801ml、磷酸氢二钾2g、乙酸钠5g、柠檬酸三铵2g、硫酸镁0.2g、硫酸锰0.05g、琼脂粉15g、山梨酸钾0.5g、蒸馏水1000ml，ph值6.2，分装后115℃灭菌30分钟。对比例7添加有如实施例9制备的山梨酸钾的常用乳酸菌培养基mrs：蛋白胨10g、牛肉粉5g、酵母粉4g、葡萄糖20g、吐温-801ml、磷酸氢二钾2g、乙酸钠5g、柠檬酸三铵2g、硫酸镁0.2g、硫酸锰0.05g、琼脂粉15g、山梨酸钾0.5g、蒸馏水1000ml，ph值6.2，分装后115℃灭菌30分钟。按照对比例2的检测方式对实施例6-9以及对比例4-7进行检测，观察谷氨酸钠以及山梨酸钾对乳酸菌和酵母的影响，具体可参见表1和表2。表1.谷氨酸钠对乳酸菌和酵母的影响示例乳酸菌检出量酵母检出量实施例63.2×104cuf/g未检出实施例73.6×104cuf/g未检出对比例2无法检测2.4×107cuf/g对比例41.1×104cuf/g2.1×107cuf/g对比例51.4×104cuf/g2.1×107cuf/g通过实施例6-7、对比例2、对比例4-5以及表1可以看出，本发明实施例提供的自主制备的谷氨酸钠相较于市售的谷氨酸钠能够促进乳酸菌的生长。表2.山梨酸钾对乳酸菌和酵母的影响通过实施例8-9、对比例2、对比例6-7以及表2可以看出，本发明实施例提供的自主制备的山梨酸钾相较于市售山梨酸钾更能够增强对酵母抑制作用。以上仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。当前第1页12