枯草芽孢杆菌保鲜剂及其制备方法与流程

本发明涉及枯草芽孢杆菌的应用技术领域，尤其涉及一种枯草芽孢杆菌保鲜剂及其制备方法。

背景技术：

枯草芽孢杆菌(bacillussubtilis)是一类好氧内生芽孢的革兰氏阳性细菌，是对人畜无毒无害的益生菌，该菌不仅对人与动物无毒害作用，且对环境友好，具有显著的抗菌活性和抗逆性，已应用于农业。枯草芽孢杆菌生长快、营养简单，能产生耐热、抗逆的芽孢，其芽孢具有抗逆性强、利于保藏的特点，又能忍受极端的外部环境而长期存活，国内外学者在枯草芽孢杆菌防治植物病害方面进行了大量研究，一些枯草芽孢可对于采收前大田玉米，小麦，辣椒，黄瓜等，表现出明显的防治病害的作用。然而，目前针对枯草芽孢杆菌作为果蔬的保鲜剂鲜有报道。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种枯草芽孢杆菌保鲜剂及其制备方法，以克服现有技术中存在的不足。

为实现上述发明目的，本发明提供一种枯草芽孢杆菌保鲜剂的制备方法，其包括如下步骤：

s1、配制枯草芽孢杆菌的固态培养基和液态培养基，将备好的枯草芽孢杆菌株接种于固态培养基中；

s2、过夜后，提取固态培养基上的枯草芽孢杆菌的，将其接种于液态培养基中；

s3、保持接种有枯草芽孢杆菌的液态培养基处于振荡状态；

s4、过夜后，将液态培养基及其中的枯草芽孢杆菌进行过滤，在通过细菌滤器去除菌体，并收集滤液；

s5、通过分级沉淀法提取滤液中的沉淀蛋白；

s6、在离心条件下进一步收集沉淀物，并溶于缓冲液中，将缓冲液进行透析处理脱去盐分，得到抗菌蛋白。

作为本发明的制备方法的改进，所述固态培养基包括：牛肉膏1.0-5.0g、蛋白胨5-10g、nacl4-7g、琼脂10-15g、水450-800ml。

作为本发明的制备方法的改进，所述液态培养基包括：蛋白胨10-15g、磷酸氢钾5-8g、硫酸镁10-20g、甘油8-15g、水1000-1200ml。

作为本发明的制备方法的改进，振荡过夜的条件为：25-30℃、165-170r/min状态下培养12-16h。

作为本发明的制备方法的改进，通过梯度浓度的硫酸铵提取滤液中的沉淀蛋白。

作为本发明的制备方法的改进，各梯度的硫酸铵的浓度差为10%。

作为本发明的制备方法的改进，所述离心条件为7500-8000r/min，5-6℃的条件下离心15-20min，所述缓冲液为磷酸钠的盐溶液。

为实现上述发明目的，本发明提供一种枯草芽孢杆菌保鲜剂，其由如上所述的制备方法得到。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明的枯草芽孢杆菌保鲜剂能够实现果蔬病菌的抑菌，进而实现果蔬的保鲜，延长了果蔬的存放周期，有利于果蔬的运输和存放，降低了运输和存放过程中霉变的风险。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明中记载的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为本发明的枯草芽孢杆菌保鲜剂的制备方法的方法流程示意图。

具体实施方式

下面结合附图所示的各实施方式对本发明进行详细说明，但应当说明的是，这些实施方式并非对本发明的限制，本领域普通技术人员根据这些实施方式所作的功能、方法、或者结构上的等效变换或替代，均属于本发明的保护范围之内。

本发明提供一种枯草芽孢杆菌保鲜剂，其通过如下方法制备：

s1、配制枯草芽孢杆菌的固态培养基和液态培养基，将备好的枯草芽孢杆菌株接种于固态培养基中；

s2、过夜后，提取固态培养基上的枯草芽孢杆菌的，将其接种于液态培养基中；

s3、保持接种有枯草芽孢杆菌的液态培养基处于振荡状态；

s4、过夜后，将液态培养基及其中的枯草芽孢杆菌进行过滤，在通过细菌滤器去除菌体，并收集滤液；

s5、通过分级沉淀法提取滤液中的沉淀蛋白；

s6、在离心条件下进一步收集沉淀物，并溶于缓冲液中，将缓冲液进行透析处理脱去盐分，得到抗菌蛋白。

下面结合几个具体的实施例，对本发明的枯草芽孢杆菌保鲜剂的制备方法的技术方案进行举例说明。

实施例1

配制枯草芽孢杆菌的固态培养基：牛肉膏1.0-5.0g、蛋白胨5g、nacl4g、琼脂10g、水450ml，液态培养基：蛋白胨10g、磷酸氢钾5g、硫酸镁10g、甘油8g、水1000ml，将备好的枯草芽孢杆菌株接种于固态培养基中。过夜后，提取固态培养基上的枯草芽孢杆菌的，将其接种于液态培养基中。25℃、165r/min状态下，保持接种有枯草芽孢杆菌的液态培养基处于振荡状态12h。将液态培养基及其中的枯草芽孢杆菌进行过滤，在通过细菌滤器去除菌体，并收集滤液。通过梯度浓度的硫酸铵提取滤液中的沉淀蛋白，各梯度的硫酸铵的浓度差为10%。在7500r/min，5℃的条件下离心15min进一步收集沉淀物，并溶于磷酸钠的盐溶液中，将磷酸钠的盐溶液进行透析处理脱去盐分，得到抗菌蛋白。所述离心条件为，所述缓冲液为磷酸钠的盐溶液。

实施例2

配制枯草芽孢杆菌的固态培养基：牛肉膏1.0-5.0g、蛋白胨10g、nacl7g、琼脂15g、水800ml，液态培养基：蛋白胨15g、磷酸氢钾8g、硫酸镁20g、甘油5g、水1200ml，将备好的枯草芽孢杆菌株接种于固态培养基中。过夜后，提取固态培养基上的枯草芽孢杆菌的，将其接种于液态培养基中。30℃、170r/min状态下，保持接种有枯草芽孢杆菌的液态培养基处于振荡状态16h。将液态培养基及其中的枯草芽孢杆菌进行过滤，在通过细菌滤器去除菌体，并收集滤液。通过梯度浓度的硫酸铵提取滤液中的沉淀蛋白，各梯度的硫酸铵的浓度差为10%。在8000r/min，6℃的条件下离心20min进一步收集沉淀物，并溶于磷酸钠的盐溶液中，将磷酸钠的盐溶液进行透析处理脱去盐分，得到抗菌蛋白。所述离心条件为，所述缓冲液为磷酸钠的盐溶液。

综上所述，本发明的枯草芽孢杆菌保鲜剂能够实现果蔬病菌的抑菌，进而实现果蔬的保鲜，延长了果蔬的存放周期，有利于果蔬的运输和存放，降低了运输和存放过程中霉变的风险。

对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。不应将权利要求中的任何附图标记视为限制所涉及的权利要求。

此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。