奥洛他定α甲基化合物及制备方法与用途与流程

本发明属医药
技术领域：
，尤其涉及奥洛他定α甲基化合物及制备方法与用途。
背景技术：
：盐酸奥洛他定(olopatadinehydrochloride)是由日本协和发酵公司开发并上市的抗过敏药，先后在欧、美、日等多国上市。具有抑制组胺释放及选择性拮抗hi受体的双重作用，且无hi受体拮抗剂类抗过敏药常见的中枢神经系统抑制及心脏毒副作用，口服用于过敏性鼻炎、皮肤刺激、多形性渗出性红斑和荨麻疹等的治疗。其滴眼液用于治疗过敏性结膜炎。该药既能够抑制肥大细胞释放组胺，又可较高选择性地拮抗h1受体，对α肾上腺素受体、多巴胺受体及m1、m2受体无作用，其中枢神经系统方面的副作用少，是新一代的抗过敏首选药。另目前已上市的盐酸奥洛他定的剂型为滴眼剂、片剂、喷雾剂。滴眼剂用于治疗过敏性结膜炎；喷鼻剂用于缓解季节性过敏性鼻炎症状；片剂能够治疗过敏性鼻炎、荨麻疹、皮肤刺激、多形性渗出性红斑等。片剂可经口服后经血液循环到达皮肤，虽然能够起到一定的治疗效果，但口服途径对皮肤疾病而言可能存在严重的全身不良反应的危险，如嗜睡、alt(gpt)上升、倦怠感、ast(got)上升、口渴等；严重不良反应有肝功能损害、黄疸等。因此，口服给药是一种非常不理想的给药方式。盐酸奥洛他定的化学名为：(z)-11-(3-二甲基氨基亚丙基)-6,11-二氢二苯并[b,e]恶庚英-2-乙酸盐酸盐。其结构式为：ohshimae等(journalofmedicinalchemistry,1992,35(11):2074-84)采用正丁基锂做碱进行wittig反应制备奥洛他定。在0℃、氮气保护下，缓慢向氢溴酸-3-二甲氨基丙基溴化三苯基鏻的四氢呋喃溶液中滴加正丁基锂溶液，制备wittig试剂，然后向其中加入伊索克酸，反应24小时得到奥洛他定。正丁基锂是一个非常不稳定的碱，遇水和空气极易分解，甚至产生爆炸，保存于非极性溶剂中，储存运输不方便。反应过程中对反应体系的水分控制非常严格，产业化生产操作危险性较高。thomasbader.zurich等在us20070232814中，采用氢化钠做为碱进行wittig反应制备奥洛他定。氮气保护下，向无水四氢呋喃中加入氢溴酸-3-二甲氨基丙基溴化三苯基鏻和氢化钠，加热55～60℃反应3小时制备wittig试剂，然后向其中加入伊索克酸，室温反应30小时得到奥洛他定。然而氢化钠的使用要求反应环境无水，因此必须使用无水四氢呋喃。为了促使反应完全，反应中氢化钠大过量，其用量是伊索克酸的8.2倍。反应完过量的氢化钠处理非常危险，其遇水燃烧并可能产生爆炸，有极大的安全隐患。而且反应时间很长，生产奥洛他定成本高。常规的制备方法均需要强碱制备wittig试剂，采用该方法进行制备，比如在cn104211676中，涉及到碱选自氢化钠、氢化锂、氢化钾、氢化钙、乙醇钠、乙醇钾、叔丁醇钠、叔丁醇钾、双(三甲基甲硅烷基)酰胺钠、双(三甲基甲硅烷基)酰胺钾及其混合物。同时，因氢化钠等物料遇水放出可燃性气体，在生产过程中安全风险性较大，不利于安全生产，目前一些厂家已经将其更换为更加安全的双(三甲基甲硅烷基)酰胺钠(别名：六甲基二硅基氨基钠)或双(三甲基甲硅烷基)酰胺钾，更加有利于安全的生产。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种奥洛他定α甲基化合物及其药学上可接受的盐，其结构如式(ⅰ)、(ⅱ)或(ⅲ)所示：式(ⅰ)中r为离子，所述离子为钠离子、钾离子、镁离子、锌离子、锂离子中的任意一种；式(ⅲ)中y为盐酸或者草酸中。本发明的目的在于提供一种盐酸奥洛他定α甲基化合物，具有式(ⅲ-1)结构：本发明的另一目的在于提供一种包含奥洛他定α甲基化合物，在治疗皮肤瘙痒的膏剂应用。本发明的再一目的在于提供一种奥洛他定α甲基化合物，可用作标准品或对照品。本发明还提供制备权利要求1所述的奥洛他定α-甲基化合物及其药学上可接受的盐的方法，利用伊索克酸、伊索克酸α甲基化合物或者奥洛他定作为原料，制备奥洛他定α甲基化合物。进一步所述的制备方法使用伊索克酸(化合物1)与异丙醇、氯化亚砜反应后得到化合物2，化合物2与碘甲烷反应生成化合物3，化合物3与化合物4进行wittig反应得到式(ⅱ)化合物，化合物成盐后得式(iii)化合物。本发明还提供一种分离鉴定奥洛他定药物中杂质化合物的方法，所述杂质化合物为上述的奥洛他定α-甲基化合物及其药学上可接受的盐。在本发明的一种实施方式中，所述方法是利用流动相为乙腈-水-三氟乙酸的混合体系作为展开剂，分离得到奥洛他定α-甲基化合物及其药学上可接受的盐。在本发明的一种实施方式中，其特征在于，所述乙腈-水-三氟乙酸的体积比为350:280:1。本发明所述的奥洛他定α甲基化合物组合物或乳膏剂对治疗瘙痒性皮肤病具有显著的效果。本发明提供一种新的乳膏剂组合物，所述的组合物中含有有效量的奥洛他定α甲基化合物。进一步所述的，所述乳膏剂组合物包含下述重量份的成分：奥洛他定α甲基化合物0.01～0.5、促进剂：水溶性氮酮1～8、乳化剂：吐温-800.5～2、外用组合物：羟苯乙酯0.01～0.02、白凡士林5～8、甘油6～10、三乙醇胺0.3～0.8、单硬脂酸甘油酯1.0～3.0。本发明的有益效果：本发明基于特定的分离环境，在多批次原研药品盐酸奥洛他定(商品名：阿洛刻)中检测出微量的该杂质(0.015～0.019％)，该杂质虽然在药品中含量较小，符合药典质量标准，但伴随着药物申报审评要求的日益提高，国家药品监督管理局药品审评中心现在已不仅仅满足于符合药典标准的原料药，而是药品质量等同或优于已上市的原研药品，分离出该未知杂质，有利于提高奥洛他定类药物的用药安全及行业标准，我们对该杂质尝试进行制备分离。本发明首次提出上述化合物，其标准品可用于奥洛他定药物中的杂质分析、检测，解决了目前尚无该化合物的标准品作为分析对照的技术性难题，从而提高并保证了奥洛他定的用药安全。此外奥洛他定α甲基化合物进行研究惊奇的发现其乳膏剂对治疗瘙痒、蚊虫叮咬等皮肤病具有显著的效果。本发明提供了该杂质的分离、制备、结构确认、及其性能用途。该杂质存在于奥洛他定成品中，因此对其在奥洛他定中研究该杂质具有极强的必要性，可用于奥洛他定生产过程中的杂质定性与定量分析，有利于推动奥洛他定药品质量标准的提高，进一步保障奥洛他定的用药安全。附图说明图1是实施例1所得奥洛他定α甲基化合物的hplc图；图2是盐酸奥洛他定片(商品名：阿洛刻)的hplc图；图3是奥洛他定α甲基化合物的ms图；图4是奥洛他定α甲基化合物的1h-nmr图。具体实施方式伊索克酸(化合物1)购自内蒙古京东药业有限公司，[3-(二甲基氨基)丙基]三苯基溴化磷(化合物4)购自上海阿拉丁生化科技股份有限公司实施例1制备奥洛他定α甲基化合物的方法：取伊索克酸(化合物1)20g加入到反应瓶中，加入异丙醇50ml，搅拌降温至0～10℃，滴加10g氯化亚砜，滴加毕搅拌升温至回流，tlc检测反应完全后降温，减压浓缩除去氯化亚砜及异丙醇，而后加入40ml异丙醇进行重结晶，既得22g化合物2。取20g化合物2加入200mln,n-二甲基甲酰胺搅拌溶解完全，控制温度在10℃以下加入8.47g叔丁醇钾，搅拌并控温不超过10℃滴加10.26g碘甲烷，室温反应完全，滴加150ml纯化水淬灭反应，而后使用二氯甲烷萃取完全，有机相使用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩至干，使用硅胶进行柱层析纯化，流动相ea:正己烷＝15:1，洗脱，接受主斑点，合并减压浓缩至干既得7.10g化合物3。氮气保护下取化合物4样品4.84g，加入26ml四氢呋喃搅拌下滴加6ml的nahmds，滴加毕搅拌4h，另取化合物3样品2.58g溶于10mlthf中，再次滴加入反应液中，滴毕后反应20h，加入纯化水淬灭反应，加入1.56g氢氧化钠后，将反应溶液减压浓缩除去四氢呋喃，浓缩毕后加入20ml异丙醇搅拌升温至50～60℃，进行反应脱去异丙酯，反应8h后减压浓缩除去异丙醇，加入5ml丙酮，滴加10ml纯化水，固体析出，过滤取滤液减压浓缩除去丙酮，剩余溶液使用20ml甲苯洗涤2次，水相加入7.9g冰乙酸后，使用二氯甲烷20ml进行萃取，有机相减压浓缩至干得类白色固体，加入20ml丙酮打浆1h过滤干燥既得1.50g式(ⅱ)化合物。化合物的结构表征见图1、3、4，hplc峰面积归一法测得纯度为100％；ms(hplc-ms)＝352.2(m+h+)；1h-nmr(400mhz，氘代dmso)δ(ppm)：1.0～2.0(3h)，2.5～4.0(11h)，5.0～8.0(10h)，10.0～11.0(1h)。其中，液相条件为：流动相a为磷酸二氢钾溶液-乙腈(75:25)，流动相b为磷酸二氢钾溶液-乙腈(40:60)，agelavenusilmpc8(4.6*250mm)色谱柱，检测波长为299nm。将式(ⅱ)化合物1.3g，加入10ml丙酮、5ml纯化水搅拌溶解完全，过滤除去机械杂质，滤液加入0.45g盐酸，搅拌降温至0～5℃析晶10h过滤，60℃鼓风干燥既得1.02g盐酸奥洛他定α甲基化合物。实施例2杂质确认利用如下方法对多批次原研药品盐酸奥洛他定(商品名：阿洛刻)进行检测：流动相a为磷酸二氢钾溶液-乙腈(75:25)，流动相b为磷酸二氢钾溶液-乙腈(40:60)，agelavenusilmpc8(4.6*250mm)色谱柱，检测波长为299nm。结果图2所示，检测分离发现出微量的0.019％左右的杂质化合物(见图2中36.682min处)，相同分离环境，与实施例1所得化合物完全匹配。可见，该杂质即为实施例1中制得的奥洛他定α甲基化合物。实施例3制备体系：参照cn1042211676中的方法进行制备：在母液分离制备过程中极难分离，在母液中有少量存在，且与其他杂质极性类似，在hplc(高效液相色谱仪)中出峰时间较为接近，但不易制备分离。在使用了较多的方法进行纯化分离(硅胶柱层析、sephadex、ods反相、hptlc、hplc等)，尝试使用hplc进行分离，更换不同色谱柱(agelavenusilmpc8(4.6*250mm)、phenomenexultracarb(4.6*150mm)等)、改变流动相比例、缓冲盐种类及比例等较多条件，最终发现添加少量三氟乙酸可有效分离，而后通过使用制备型液相通过多次制备分离得到微量该杂质，进行结构确证。具体过程：将制备得到的粗品母液中通过制备型液相进行分离，流动相为乙腈-水-三氟乙酸(350:280:1)，采用sinochromods-bp(20*300mm)色谱柱检测波长为210nm，分离发现了奥洛他定α甲基化合物。实施例4利用盐酸奥洛他定α甲基化合物制备治疗蚊虫叮咬乳膏剂一种盐酸奥洛他定α甲基化合物乳膏剂，其包含下述重量份的组分：盐酸奥洛他定α甲基化合物0.2、白凡士林7.0、羟苯乙酯0.01、水溶性氮酮4.0、吐温-801.5、三乙醇胺0.4、纯化水50.0、单硬脂酸甘油酯2.0、甘油6。上述盐酸奥洛他定α甲基化合物乳膏剂的制备方法：(1)将配方量的白凡士林、单硬脂酸甘油酯在60～80℃熔化混匀，作为油相；(2)将配方量的盐酸奥洛他定α甲基化合物在配方量的水中混匀，用配方量的三乙醇胺调节ph值至中性，而后依次加入配方量的吐温-80、水溶性氮酮、羟苯乙酯、甘油，加入至60～80℃使其溶解混匀，作为水相。(3)在60～80℃下将水相倒入搅拌状态下的油相中，混匀，冷却既得盐酸奥洛他定α甲基化合物乳膏剂。对比例1利用盐酸奥洛他定制备治疗蚊虫叮咬乳膏剂参照实施例4，将盐酸奥洛他定α甲基化合物等量替换为盐酸奥洛他定，其他不变，制得相应的乳膏剂产品。实施例5蚊虫叮咬实验(1)准备：经过常规的检查，在排除了过敏性体质者、合并心血管肝肾等系统疾病者、有精神病者、两周内服用过糖皮质激素者，选择被蚊虫叮咬症状明显的身体健康的公司员工及其家属80例，随机分组。其中盐酸奥洛他定α甲基化合物膏剂组(a组)20人，男性9人，女性11人，年龄18～46，平均年龄26；盐酸奥洛他定α甲基化合物膏剂组+止痒润肤软膏组(b组)20人，男性10人，女性10人，年龄18～45，平均年龄26；止痒润肤软膏组(c组)20人，男性10人，女性10人，年龄18～48，平均年龄25；盐酸奥洛他定乳膏剂组(d组)20人，男鞋10人，女性10人，年龄18～46，平均年龄26；四组患者年龄、性别等无显著差异(p＞0.05)，具有可对比性。(2)实验方法：a组患者选用盐酸奥洛他定α甲基化合物乳膏剂进行涂擦，在蚊虫叮咬后立即涂擦患处，在提前培训好受试者如何进行痒痛和红肿疗效判断的基础上，请受试者分别于10min、30min、24h后观察并在统一发放的表格上记录蚊虫叮咬患处痒痛、红肿症状缓解的时间。b组患者采用盐酸奥洛他定α甲基化合物乳膏剂+止痒润肤软膏涂擦患处，与a组同样的时段观察并记录蚊虫叮咬患处痒痛、红肿症状缓解的时间。c组患者采用止痒润肤软膏涂擦患处，与a组同样的时段观察并记录蚊虫叮咬患处痒痛、红肿症状缓解的时间。d组患者采用盐酸奥洛他定乳膏剂涂擦患处，与a组同样的时段观察并记录蚊虫叮咬患处痒痛红肿症状的缓解时间。对所有的记录进行统计，对比a组、b组、c组、d组红肿、痛痒症状缓解的时间，分析两者治疗蚊虫叮咬的效果。(3)疗效评价标准：疗效分为4级级别症状痊愈皮损完全消失，症状消失显效皮损消退面积≥60％，瘙痒感、肿胀基本消失有效皮损消退面积≥30％，轻度瘙痒和肿胀无效皮损消退面积小于30％，瘙痒及局部肿胀无改善甚至加重选取统计学软件spss20.0进行数据处理并分析，计量资料使用(x±s)表示，采用t检验。计数资料用百分率表示，采用x2检验，疗效为等级资料，采用秩和检验。以p＜0.05为差异具有统计学意义。(4)结果：四组止痒效果比较，治疗后，a、b组止痒疗效显著优于c组、d组，差异具有统计学意义，见表1。表1四组置于疗效比较，治疗后，b组治疗疗效显著优于a/c/d组，差异有统计学意义，见表2。表2不良反应发生情况：接受治疗的患者中皮损搔抓明显者，在使用a、b治疗时，无任何刺痛，也未发生任何接触性皮炎，d组显效例数较多，痊愈例数相对较少，说明盐酸奥洛他定可减轻瘙痒，但对蚊虫叮咬后的皮损及相关症状效果较差，盐酸奥洛他定通过外用组合物直接作用于患处达到抗组胺和稳定肥大细胞的作用，但盐酸奥洛他定α甲基化合物再即可减轻瘙痒的同时对蚊虫叮咬产生的皮损有较好的愈合效果，说明因与盐酸奥洛他定结构类似，可以达到相同的治疗瘙痒的效果，但在化合物经修饰后形成盐酸奥洛他定α甲基化合物后，还可加快皮损的愈合，具有愈创的效果，产生了预料不到的技术效果。根据以上实验结果证明盐酸奥洛他定α甲基化合物具有缓解和治疗皮肤瘙痒和蚊虫叮咬及造成的皮损等症的效果，可将其作为用于制备皮肤瘙痒、蚊虫叮咬等症的药物中作为主要功效成分。当前第1页12