Oscpy及其编码蛋白在提高稻米品质中的应用的制作方法

本发明属于生物基因工程领域，具体涉及水稻中一个新的孤儿基因oscpy及其编码蛋白在提高稻米品质中的应用。

背景技术：

垩白度为稻米外观品质的重要指标之一，其中，垩白是稻米胚乳中白色不透明的部分，为胚乳淀粉粒之间存在空隙引起透光性改变所致。垩白度是稻米中垩白部位的面积占米粒投影面积的百分比。

垩白粒率是指米粒中有垩白米粒的比率，为稻米重要品质指标。它不仅关系到外观好看与否，而且对加工品质、蒸煮品质有很大影响。国家制定标准：一级优质米垩白粒率在10％以下，二级11％～20％，三级21％～30％，垩白粒率在30％以上为劣质米。

陈建国等研究显示，对于f2代稻米，垩白表达主要受母本遗传因子的调控。林建荣等研究表明，种子直接加性和母本加性调控垩白性状的表达具有较大影响。此外，心白、腹白受隐性单基因遗传的影响。水稻垩白性状遗传机理复杂，并且与环境因素相互作用。

整精米指的是净稻谷经实验砻谷机脱壳成糙米，糙米经实验碾米机碾磨成加工精度为国家标准三级(gb1354)大米时，长度达到完整米粒平均长度四分之三及以上的米粒。整精米率是指整精米占净稻谷试样质量的百分率。

在我国，除了提高水稻产量外，改善稻米品质，也是水稻育种的一个重要的目标。推进水稻生产和稻米产品的高档化和特优质化，提升水稻生产的经济附加值，是现阶段稻米品质改良和优质水稻品种选育工作的一个主要方向。稻米垩白比例和整精米率是两个决定稻米市场价格的关键因子，而垩白间接影响着整精米率的高低。降低垩白是水稻品质育种的主要目标之一。进行品质基因功能研究，有助于推动水稻优质米新品种选育和稻米产业化，进一步提高粮食生产效益。

“孤儿基因”是指根据已有的知识，还未了解其功能和生物学意义的基因。“孤儿基因”在gene中没有同源蛋白，不属于任何基因家族和基因超家族。在酵母、人类、小鼠中发现部分孤儿基因是物种必需基因，在调节物种的生命活动中起到了重要的作用，并且很多孤儿基因行使特殊的生理功能。我们在水稻根的cdna文库中发现了一个新基因(loc_os09g30350)，该基因cdna全长1722bp,编码573个氨基酸。在interpro和prosite数据库中对其蛋白序列进行分析，鉴定不到已知的功能结构域，也不属于任何一个基因家族或超基因家族，为一典型的孤儿基因，我们将其命名为oscpy，并对其进行了逆境胁迫(低温)下的表达分析。

鉴于基因遗传的复杂性，目前，水稻孤儿基因oscpy编码蛋白及其基因的作用还有待进一步开发。

技术实现要素：

基于此，本发明的目的之一是提供水稻孤儿基因oscpy及其蛋白的新应用。

实现上述目的技术方案如下。

水稻孤儿基因oscpy和/或其编码蛋白在调控农作物的垩白度和/或垩白粒率中的应用。

水稻孤儿基因oscpy和/或其编码蛋白在提高农作物品质育种中的应用，所述提高农作物品质是通过调控农作物的垩白度和/或垩白粒率。

在其中一个实施例中，所述农作物是粮食作物，更优选的是，所述粮食作物是谷类作物，最优选地，所述谷类作物是水稻。

在其中一个实施例中，所述oscpy基因的cdna阅读框为如seqidno.2所示，或为与seqidno.2互补配对的核苷酸序列，或为编码氨基酸序列如seqidno.1所示的序列；或为上述序列且具有一个多个核苷酸突变，但生物活性不变的核苷酸序列。进一步地，所述生物活性为oscpy表达量表达下调时，稻米的垩白度和/或垩白粒率降低。

一种提高稻米品质的方法，包括调控oscpy基因表达下调。

在其中一个实施例中，包括构建oscpy基因rnai干扰载体；将oscpy基因rnai干扰载体转化至水稻内后，可调控oscpy基因的表达下调。

在其中一个实施例中，oscpy基因rnai干扰载体构建包括：以水稻的幼苗为材料，提取rna，并将rna逆转录成cdna，利用引物序列(优选为seqidno.3和seqidno.4cpy-sif22：5’-cgcggatcctccatcgtggagccggagaa-3’；cpy-sir22：5’–gcctaagcttccctgtagaaacctcctgctccag-3’)，扩增出oscpy的正向干涉片段(seqidno.5)，通过酶切与干涉载体pyl进行连接，构建中间载体pyl-oscpy，利用引物序列(优选为seqno.6和seqno.7)对pyl-oscpy进行pcr扩增，获得反向干涉片段(seqno.8)，通过酶切，连接将反向干涉片段与pyl-oscpy连接后，转化dh5a感受态细胞，挑选阳性菌落，提取质粒后，利用测序引物(优选为seqno.9和seqno.10)进行pcr扩增，扩增产物经测序验证后获得干扰载体pyl-rnnaioscpy。

在其中一个实施例中，将干涉载体pyl-rnaioscpy,利用农杆菌介导的方法转化水稻愈伤组织，再培育成转基因植株，优选为利用荧光定量pcr方法检测oscpy基因表达下调，获得oscpy基因表达量下了rnai干扰植株和t-dna插入植株。

本发明的另一目的是公开oscpy基因rnai干扰载体，将上述载体转化至水稻内后，可调控oscpy基因的表达。

一种oscpy基因rnai干扰载体，将包含如seqidno.5所示的oscpy的正向干涉片段和包含如seqidno.8所示的反向干涉片段连接到载体上制备而成。

本发明还提供了oscpy表达量表达下调的转基因水稻植株(包括rnai干扰植株和t-dna插入植株)，与野生型对照相比，oscpy表达量表达下调的转基因植株的稻米的垩白度降低。

本发明的有益效果如下：

在本发明中，发明人构建到干扰效果很好的oscpy基因rnai干扰载体，并对水稻孤儿基因oscpy及其编码蛋白在水稻应用上进行了探索，发现该基因表达下调可以降低稻米的垩白度和垩白粒率，提高稻米品质。因此，将水稻孤儿基因oscpy及其蛋白可应用在提高稻米品质，可推广至水稻育种技术领域，改善水稻的品质。

附图说明

图1干涉载体pyl质粒图谱。

图2干涉载体pyl-rnnaioscpy构建成功，m，maker；1，质粒抽提结果；2，质粒bamhi单酶切结果。

图3oscpy在rnai干扰植株中表达量检测。

图4直链淀粉合成酶基因(gbssi)在不同转基因株系中的表达量。

图5利用扫描电镜对各株系稻米横切面淀粉颗粒的观察。

具体实施方式

为了便于理解本发明，下面将参照实施例对本发明进行更全面的描述，以下给出了本发明的较佳实施例。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。应理解，下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。实施例中所用到的各种常用试剂，均为市售产品。

除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。

本发明提供了水稻孤儿基因oscpy及其编码蛋白及其应用。我们在水稻根的cdna文库中克隆了一个水稻新的孤儿基因，oscpy。对该基因的功能研究表明，该基因表达下调可以降低稻米的垩白度和垩白粒率，提高稻米品质。该基因在水稻育种上有巨大的应用潜力。

rnai干扰载体构建：以水稻中花11的幼苗为材料，提取rna，并将rna逆转录成cdna，利用引物序列(seqidno.3和seqidno.4cpy-sif22：5’-cgcggatcctccatcgtggagccggagaa-3’；cpy-sir22：5’–gcctaagcttccctgtagaaacctcctgctccag-3’)，扩增出oscpy的正向干涉片段(seqidno.5)，通过酶切与干涉载体pyl(图1)进行连接，构建中间载体pyl-oscpy，利用引物序列(seqno.6和seqno.7)对pyl-oscpy进行pcr扩增，获得反向干涉片段(seqno.8)，通过酶切，连接将反向干涉片段与pyl-oscpy连接后，转化top10f’感受态细胞，挑选阳性菌落，提取质粒后，利用测序引物(seqno.9和seqno.10)进行pcr扩增，扩增产物经测序验证后获得干扰载体pyl-rnnaioscpy。

将干涉载体pyl-rnaioscpy,利用农杆菌介导的方法转化水稻愈伤组织，再培育成转基因植株，利用荧光定量pcr方法检测oscpy基因表达下调，获得oscpy基因表达量下了rnai干扰植株和t-dna插入植株。

利用米质分析仪对oscpy表达量下调的转基因植株的垩白粒率，直链淀粉含量等米质指标进行了检测，获得了垩白粒率降低，直链淀粉含量增高的水稻植株。

利用扫描电镜对oscpy表达量下调的转基因稻米横切面的淀粉颗粒进行了观察，发现相对于野生型，转基因稻米横切面中淀粉颗粒更大，排列更加不规则。

以下用到的培养基包括：

yeb液体培养基：10.0g/l胰蛋白胨；1.0g/l酵母提取物；5.0g/l蔗糖，1.03g/lmgso4·7h2o；8.0g/l琼脂(固体培养基)ph7.0-7.4

农杆菌悬浮培养基:1/2n6大量元素和微量元素，n6铁盐和复合维生素，3.0mg/l2,4-d；0.6g/l水解酪蛋白；20g/l蔗糖；10g/l葡萄糖；100μmol/l乙酰丁酰酮(as)，ph5.2。

共培养基：1/2n6大量元素和微量元素、铁盐及复合维生素；3.0mg/l2,4-d；0.8g/l水解酪蛋白；2％的蔗糖；0.8％琼脂；ph5.6，另外，灭菌后冷却至50℃左右，按照每升培养基加入20ml50％的葡萄糖(预先115摄氏度灭菌30min)和乙酰丁酰酮as(100mmol/l)1ml。

筛选培养基：n6大量元素和微量元素、铁盐及维生素；2.0mg/l2,4-d；0.6g/l水解酪蛋白；3％的蔗糖；0.8％琼脂；ph5.9，灭菌后冷却至50℃左右，每升培养基加潮霉素(50mg/ml)；头孢噻肟钠(250mg/ml)和羧苄青霉素(250mg/ml)各1ml。

分化培养基：ms大量元素和微量元素；ms铁盐和复合维生素；3.5mg/l6-ba；1mg/lkt；0.4mg/lnaa；0.60g/l水解酪蛋白；15.0g/l山梨醇；30.0g/l蔗糖；3.0g/lphytagel，ph6.0。灭菌后冷却至50℃左右，每升培养基加潮霉素(50mg/ml)；头孢噻肟钠(250mg/ml)和羧苄青霉素(250mg/ml)各1ml。7-生根培养基:1/2ms大量元素和微量元素；ms铁盐和复合维生素；20g/l蔗糖；3.0g/lphytagel；ph5.9，灭菌后冷却至50℃左右，每升培养基加潮霉素(50mg/ml)1ml。

seqidno.1

>loc_os09g30350.1

mdsggnsvnsavesvaespapaspasnptapaavtkgrglrrwrriprehheegspgsggggggggsvaaaaadedlaqlhkrrhplgadapkgkeeaaaaaaaaaveevgsespvasvessfapqeappsppvqtkldpdlgfliasagfsvgaggadsdnsddrasksstnaaaprhdfsfgggfgrerdrprsrapgaaahakgirtartrgahgaraatptpsivepensrssvesnlrssaaaharqssagissngvhkvlydddddddddaeqsdgeppseeaarsgaggfyrengsvvgrlvkgssdsdaddhgydersigkgengeihsgldpyvqsiamlrsaeeaieneiqkfiemrnetcensannhsetewssschfdesteelseklkllesrlneastlindkdseileldvlnhkqpkqhvlcntellslqsdmdqlflekmeaetqcfiltrasqawnpltedqaaifdiqkslpedhkqleaklrhtenralmleemvekleaqckdlartseilklqarasraslfcsvqfvllfiavgtflvrlwpsssefvpt*

seqidno.2

>loc_os09g30350.1

atggattccggcggcaacagcgtgaattctgcggtggagtcggtggcggagtcgccggcgccggcttcaccggcgagcaatcccaccgcacccgccgcggtcaccaaggggcgtgggctacggcggtggcggcgtatcccccgggaacaccacgaggagggctcacctggctccggcggcggcggcggcggcggcggcagcgttgcggccgctgccgcggatgaggacttggcgcagcttcacaagcgccggcaccctctcggcgccgacgcgcctaaggggaaggaggaggccgccgccgccgccgccgccgctgccgtggaggaggtggggagcgagagccccgtcgcctccgtggagtccagcttcgcgccgcaggaggcgccaccgtcgccgccggtccagaccaagctggacccggatctcggcttcctgatcgcctcggcggggttctcggtgggcgccggcggcgccgactcggacaacagcgacgaccgggccagcaagtcctccaccaacgccgccgcgccgcgccacgacttctcgttcggcggcggcttcggccgcgagcgcgacaggccgcgatcccgcgccccaggcgccgccgcgcacgccaagggcatccgcacggcgcgcacgcgcggagcccacggcgcgcgcgccgccacaccgaccccctccatcgtggagccggagaactcgcgctccagcgttgaatccaacctccggagctctgccgctgctcatgcgcgccaatccagtgctggcataagcagcaatggcgttcacaaggttctctatgatgatgatgacgatgatgatgatgatgccgagcagagtgacggcgagcctccgagcgaggaggcggcgcgctctggagcaggaggtttctacagggagaatggaagtgtagtagggagattggtaaagggcagcagtgattccgatgccgatgatcatggatacgatgagaggagtataggcaagggtgagaatggggaaattcattcgggtctcgatccgtatgtgcagtcgatcgcgatgctccggtcagccgaagaagcaattgagaatgagatccagaagtttattgaaatgagaaatgaaacgtgtgaaaattctgcaaacaaccacagtgaaactgaatggagtagttcatgccattttgacgaatccacagaagaactgagtgagaagttgaagcttctcgagtctaggctaaacgaagcttctaccctcatcaatgataaggattcagaaatacttgaactcgatgtgctcaaccacaaacaaccaaagcagcatgttctatgcaataccgagctgctgtctctgcaatctgatatggatcaactgttcctggagaagatggaagcagagactcaatgcttcatcctgacaagagcatcgcaagcttggaatcccctgactgaggatcaagctgctatttttgacattcagaaatctctacctgaggatcacaaacagcttgaagctaagctacggcacaccgagaacagggcactgatgctagaggagatggtggagaagctagaggcacagtgcaaagatcttgctaggacttcagaaatcctgaagctgcaggcaagagcaagcagagcttcgctgttttgctccgtccagtttgttctgctgttcatcgccgtcggaaccttcctcgtccggctatggccctcttcctctgaatttgtacctacctga

seqidno.3oscpy的正向干涉片段上游引物序列

cpy-sif22：5’-cgcggatcctccatcgtggagccggagaa-3’；

seqidno.4oscpy的正向干涉片段下游引物序列

cpy-sir22:5’–gcctaagcttccctgtagaaacctcctgctccag-3’

seqidno.5oscpy的正向干涉片段序列

cctccatcgtggagccggagaactcgcgctccagcgttgaatccaacctccggagctctgccgctgctcatgcgcgccaatccagtgctggcataagcagcaatggcgttcacaaggttctctatgatgatgatgacgatgatgatgatgatgccgagcagagtgacggcgagcctccgagcgaggaggcggcgcgctctggagcaggaggtttctacaggga

seqidno.6:oscpy的反向干涉片段上游引物序列

rnai-m：5’—caccctgacgcgtggtgttacttctgaagagg—3’

seqidno.7oscpy的反向干涉片段下游引物序列

rnai-p：5’—actagaactgcagcctcagatctacatggtgg—3

seqidno.8oscpy的反向干涉片段序列

tccctgtagaaacctcctgctccagagcgcgccgcctcctcgctcggaggctcgccgtcactctgctcggcatcatcatcatcatcgtcatcatcatcatagagaaccttgtgaacgccattgctgcttatgccagcactggattggcgcgcatgagcagcggcagagctccggaggttggattcaacgctggagcgcgagttctccggctccacgatggagg

seqidno.9测序引物上游序列

5’-ctgaactcaccgcgacgtctgtc-3’；

seqidno.10:测序引物下游序列

5’-tagcgcgtctgctgctccataca-3’

seqidno.11:oscpy基因定量特异引物上游序列

5’-agggcactgatgctagagga-3’；

seqidno.12:oscpy基因定量特异引物下游序列

5’-ctcattggcgccggattttc-3’，

seqidno.13:内参基因osactin上游序列

5’-accttcaacacccctgctat-3’

seqidno.14：内参基因osactin下游序列

5’-caccatcaccagagtccaac-3’。

以下通过具体实施例对本发明做进一步的阐述，但不用于限制本发明的保护范围。

实施例1:rna干涉载体的构建和遗传转化

(1)正向干涉片段的获得：提取中花11幼穗总rna，反转成cdna，根据oscpy基因序列，利用设计引物对3：seqidno.3cpy-sif22：5’-cgcggatcctccatcgtggagccggagaa-3’(下划线为bamhi酶切位点)和seqidno.4cpy-sir22：5’–gcctaagcttccctgtagaaacctcctgctccag-3’(下划线为hindiii酶切位点)。采用rt-pcr扩增出oscpy的正向干涉片段(seqidno.5)，经测序验证后用于干涉载体构建。

(2)rna干涉载体构建:正向干涉片段(seqidno.5)和pyl载体(见图1)均经过bamhi和hindiii两种酶进行双酶切、纯化、回收后，再用t4dna酶进行连接反应，连接产物转化大肠杆菌dh5a感受态细胞，挑选阳性单菌落，经摇菌后提取质粒获得中间干涉载体pyl-oscpy，采用引物对二:seqidno.6:rnai-m：5’—caccctgacgcgtggtgttacttctgaagagg—3’seqidno.7rnai-p：5’—actagaactgcagcctcagatctacatggtgg—3；对pyl-oscpy进行pcr扩增，pcr扩增体系和条件为：10xbufferi2.5ul,10mmdntp0.5ul,rnai-m0.5ul,rnai-p0.5ul,cdna1ul,hifitaq0.5ul,ddh2o19.5ul。94℃，5min,94℃,30sec,60℃30sec,72℃,30sec,30cycles；72℃,7min。获得反向干涉片段，随后再用mlui和psti酶对反向干涉片段和pyl-oscpy进行双酶切，经纯化回收后，再用t4dna连接酶进行连接后，转化dh5a感受态细胞，挑选阳性单菌落，摇菌提取质粒获得干涉载体pyl-rnnaioscpy，对pyl-rnnaioscpyp载体分别用bamhi进行单酶切和bamhi和hindiii进行双酶切验证成功后(见图2)。

(3)将构建成功的rnai干涉载体pyl-rnnaioscpy转化根癌农杆菌eha105中，通过农杆菌介导法转化水稻愈伤组织。

a.愈伤组织诱导和继代。

将水稻中花11，种子剥去颖壳后，放入灭菌100ml三角瓶中，先用30ml75％的酒精消毒1min，然后用0.1％升汞消毒6min，无菌水冲洗5次，灭菌处理的种子接于愈伤组织诱导培养基中，放入人工气候室中在26℃下暗培养一个月左右进行愈伤组织诱导。将从胚长出的淡黄色愈伤组织接种到继代培养基中进行扩大培养，培养条件为26℃，暗培养15-20天。

愈伤组织诱导培养基:n6大量元素和微量元素、铁盐及维生素；3.0mg/l2,4-d；0.3g/ll-proline；0.6g/l水解酪蛋白；3％的蔗糖；0.3％phytagel；ph5.9。

愈伤组织继代培养基:n6大量元素和微量元素、铁盐及维生素；2.0mg/l2,4-d；0.5g/ll-proline；0.6g/l水解酪蛋白；3％的蔗糖；0.8％琼脂；ph5.9。

b.预培养

将继代培养一次后大小为1-3mm的愈伤组织(淡黄色，致密，颗粒状)接种预培26℃暗培养4天。

预培养培养基:1/2n6大量元素和微量元素、铁盐及维生素3.0mg/l2,4-d；1.2g/ll-proline；0.6g/l水解酪蛋白；2％的蔗糖；0.8％琼脂；ph5.6，另外，灭菌后按照每升培养基加入20ml50％的葡萄糖(预先115度灭菌30min)和乙酰丁酰酮as(100mmol/l)1ml。

c.遗传转化

将携带oscpy基因干涉载体pyl-rnnaioscpy的农杆菌eha105接种到yeb液体培养基中(添加100mg/l卡那霉素霉素和25mg/l利福平)，28℃下摇床振荡培养48后，离心收集菌种，用含有100μmol/l乙酰丁香酮(as)的农杆菌悬浮培养基重新悬浮农杆菌，使菌液的od600为0.1，并用上述浓度的农杆菌菌液浸染经过预培养的愈伤组织，浸染时间30min，随后愈伤组织放在灭菌滤纸上吸去多余菌液，接入到共培养基(含100μmol/l的as)中，在19℃暗环境下共培养3天，随后用无菌水快速清洗愈伤组织10次，最后用含有400mg/l的头孢霉素和250mg/l羧苄青霉素的无菌水浸泡愈伤10min，然后将愈伤放置于灭菌滤纸上晾干，再接种到筛选培养基中进行筛选培养，在26℃暗环境下培养一个月后，新长出的愈伤接种到分化培养基中进行分化，将分化出幼苗接种到生根培养基中进行培养，幼苗株高长至10cm左右时移栽到大田进行种植。

实施例2转基因阳性水稻植株检测和oscpy表达下调植株获得

采用ctab法提取转基因水稻叶片的dna后，采用潮霉素磷酸转移酶基因特异性引物(seqidno.9:5’-ctgaactcaccgcgacgtctgtc-3’；seqidno.10:5’-tagcgcgtctgctgctccataca-3’)经pcr扩增为阳性的水稻，确定为t0代转基因阳性植株；采用荧光定量pcr方法，以oscpy基因特异引物seqidno.11:5’-agggcactgatgctagagga-3’；seqidno.12:5’-ctcattggcgccggattttc-3’，以水稻的osactin作为内参基因，其引物序列为seqidno.13:5’-accttcaacacccctgctat-3’和seqidno.14:5’-caccatcaccagagtccaac-3’检测oscpy下调表达，而获得oscpy基因下调表达的rnai水稻植株和t-dna插入突变体植株，如图3所示，与野生型中花11相比，我们分别获得了oscpy表达量显著下调的rnai转基因株系12，14，36，48，74。

实施例3oscpy下调表达水稻的垩白粒率和垩白度显著降低

收获oscpy基因表达下调水稻(rnai干扰及t-dna插入突变体)和野生型水稻，于45℃鼓风干燥箱中干燥一周，在室温下放置至少两个月，脱掉颖壳。利用农业部ny/t83-2017测定垩白粒率，垩白度，结果表明，t-dna突变体(cpy)的垩白粒率为32％±0.04，rnai干扰植株为35.67％±0.12而野生型中花11的垩白粒率为51.33％±0.05，cpy和rnai干扰植株的垩白度分别为3.7％和4％，而野生型中花11的垩白度为5.5％，这些数据表明与野生型对照相比，oscpy基因表达下调水稻垩白粒率及垩白度显著降低。我们利用ny/t2639的规定，对各转基因株系的稻米的直链淀粉含量进行了检测，结果发现，cpy和rnai植株的直链淀粉含量分别为14.6％和15.3％，而中花11的直链淀粉含量为15.8％(表1)，与中花11相比，oscpy基因表达下调水稻稻米直链淀粉含量显著下调。

各转基因水稻中直链淀粉合成酶基因(gbssi)的表达量检测：同时我们也发现，在胚乳发育的第10天，与野生型相比，oscpy基因表达下调水稻(rnai12和rnai14)中直链淀粉合成酶基因(gbssi)的表达量显著下调(图4)。

表1各株系白粒率及稻米直链淀粉含量检测

实施例4利用扫描电镜对各株系稻米横切面淀粉颗粒的观察

用锋利刀片快速划过野生型中花11和oscpy基因表达下调水稻(cpy,rnai)rnai12和rnai14成熟种子糙米边缘，轻轻掰开使其能够从中间部位断裂开来。另一面用刀片切开，用双面导电胶将样品的非自然横断面轻轻粘在载物台上，进行喷金处理，使用扫描电子显微镜(日立s-3400n型)进行观察并拍照(加速电压设定为10-20kv)。结果发现，与野生型中花11相比，oscpy基因表达下调水稻稻米淀粉颗粒变大，排列更不规则，间隙也变大，这可能是导致其垩白粒率和垩白度降低的原因(图5)。

以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

序列表

<110>南昌大学

<120>oscpy及其编码蛋白在提高稻米品质中的应用

<160>14

<170>siposequencelisting1.0

<210>1

<211>573

<212>prt

<213>oscpy蛋白(oscpy)

<400>1

metaspserglyglyasnservalasnseralavalgluservalala

151015

gluserproalaproalaserproalaserasnprothralaproala

202530

alavalthrlysglyargglyleuargargtrpargargileproarg

354045

gluhishisglugluglyserproglyserglyglyglyglyglygly

505560

glyglyservalalaalaalaalaalaaspgluaspleualaglnleu

65707580

hislysargarghisproleuglyalaaspalaprolysglylysglu

859095

glualaalaalaalaalaalaalaalaalavalglugluvalglyser

100105110

gluserprovalalaservalgluserserphealaproglngluala

115120125

proproserproprovalglnthrlysleuaspproaspleuglyphe

130135140

leuilealaseralaglypheservalglyalaglyglyalaaspser

145150155160

aspasnseraspaspargalaserlysserserthrasnalaalaala

165170175

proarghisasppheserpheglyglyglypheglyarggluargasp

180185190

argproargserargalaproglyalaalaalahisalalysglyile

195200205

argthralaargthrargglyalahisglyalaargalaalathrpro

210215220

thrproserilevalgluprogluasnserargserservalgluser

225230235240

asnleuargserseralaalaalahisalaargglnserseralagly

245250255

ileserserasnglyvalhislysvalleutyraspaspaspaspasp

260265270

aspaspaspaspalagluglnseraspglygluproprosergluglu

275280285

alaalaargserglyalaglyglyphetyrarggluasnglyserval

290295300

valglyargleuvallysglyserseraspseraspalaaspasphis

305310315320

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