一种组合物、采样装置、试剂盒及居家病毒检测方法与流程

本发明属于检测技术领域，具体涉及一种组合物、采样装置、试剂盒及居家病毒检测方法。

背景技术：

病毒是一种个体微小，结构简单，只含一种核酸(dna或rna)，必须在活细胞内寄生并以复制方式增殖的非细胞型生物。病毒是一种非细胞生命形态，它由一个核酸长链和蛋白质外壳构成，病毒没有自己的代谢机构，没有酶系统。因此病毒离开了宿主细胞，就成了没有任何生命活动、也不能独立自我繁殖的化学物质。一旦进入宿主细胞后，它就可以利用细胞中的物质和能量以及复制、转录和转译的能力，按照它自己的核酸所包含的遗传信息产生和它一样的新一代病毒。自然界中基本上都是rna病毒，如新型冠状病毒、艾滋病病毒，sars病毒，mers病毒，埃博拉病毒(ebv)，西班牙流感病毒，甲型h1n1流感病毒，禽流感病毒等。其中如新型冠状病毒、sars病毒等，能通过上呼吸道感染人体。因此可通过口腔拭子咽部或鼻部沾取物，进行相应的病毒检测即可确认是否感染了病毒。

但病毒rna在没有保护的状态下很容易降解消失；目前市场上的用于存放鼻咽拭子的保存管中的保存液无法常温保存样本。用于病毒分离和核酸检测的标本需要放置于4℃保存，并在24小时内检测；24小时内无法检测的标本则需要放置于-70℃或以下保存(如无-70℃保存条件，则于-20℃冰箱暂存)，且运送期间应避免反复冻融。而常用的病毒灭活剂如甲醛它可通过交联使蛋白质变性，同时会与核苷酸的发生氨基作用，灭活效果好，但是不能用于鼻咽拭子样本的保存，不能用于后续的核酸检测。

技术实现要素：

针对现有技术存在的病毒保存中存在的不足，本发明提供一种组合物、采样装置、试剂盒及居家病毒检测方法。

具体来说，本发明涉及如下方面：

1.一种用于样品保存的组合物，其特征在于，包括：青霉素、抗真菌素、异硫氰酸胍和氯化锂，所述青霉素、抗真菌素、异硫氰酸胍和氯化锂溶解在hanks平衡盐溶液中。

2.根据项1所述的组合物，其特征在于，所述组合物中所述青霉素的含量为80-200u/ml，优选为120-150u/ml。

3.根据项1所述的组合物，其特征在于，所述抗真菌素为水溶性的三唑类抗真菌药物，优选为氟康唑。

4.根据项3所述的组合物，其特征在于，所述组合物中所述抗真菌素的含量为0.1-10μg/ml，优选为1-5μg/ml。

5.根据项1所述的组合物，其特征在于，所述组合物中所述异硫氰酸胍的含量为1.5-3mol/l，优选为1.8-2.2mol/l。

6.根据项1所述的组合物，其特征在于，所述组合物中所述氯化锂为饱和状态。

7.根据项1-6中任一项所述的组合物，其特征在于，所述样品包括咽拭子、鼻拭子。

8.一种采样装置，其特征在于，包括项1-7中任一项所述的组合物。

9.根据项8所述的采样装置，其特征在于，还包括采样管和拭子。

10.根据项9所述的采样装置，其特征在于，所述采样管为可折叠圆形薄片。

11.根据项9所述的采样装置，其特征在于，所述拭子头部材料为聚丙烯纤维或聚酰胺纤维。

12.一种检测试剂盒，其特征在于，包括项1-7中任一项所述的组合物，或项8-11任一项所述的采样装置。

13.项1-7中任一项所述的组合物在病毒保存中的用途。

14.根据项13所述的用途，其特征在于，所述病毒为新冠病毒。

15.一种居家病毒检测方法，其特征在于，包括：受试者用拭子自行采集样品；将所述拭子头部浸入采样装置的保存液中密封保存，所述保存液包括项1-7中任一项所述的组合物；将所述采样装置送至检测部门用于检测。

16.根据项15所述的检测方法，其特征在于，所述样品包括咽拭子、鼻拭子。

本发明通过优化组合物中的液体组分，以期达到样本的保存能够常温化，同时在保证病毒灭活的前提下，既能用于后续的蛋白免疫检测又能用于核酸检测。同时其常温保存的能力使其能够便于患者居家采样。

附图说明

图1为本发明可折叠圆形薄片式采样管示意图；

附图标记：

1不干胶粘层；2样品保存组合物增厚层；3拭子放置区。

具体实施方式

下面结合实施例进一步说明本发明，应当理解，实施例仅用于进一步说明和阐释本发明，并非用于限制本发明。

除非另外定义，本说明书中有关技术的和科学的术语与本领域内的技术人员所通常理解的意思相同。虽然在实验或实际应用中可以应用与此间所述相似或相同的方法和材料，本文还是在下文中对材料和方法做了描述。在相冲突的情况下，以本说明书包括其中定义为准，另外，材料、方法和例子仅供说明，而不具限制性。以下结合具体实施例对本发明作进一步的说明，但不用来限制本发明的范围。

本发明提供一种用于样品保存的组合物，所述组合物包括：青霉素、抗真菌素、异硫氰酸胍和氯化锂，所述青霉素、所述抗真菌素、所述异硫氰酸胍和所述氯化锂溶解在hanks平衡盐溶液中。

hanks平衡盐溶液是最常用的磷酸盐缓冲溶液质疑，又称hanks′bss或hbss，主要由氯化钠、氯化钾、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾、碳酸氢钠、葡萄糖等组成，含有钙离子和镁离子，ph一般为7.2-7.4。

在一个具体的实施方式中，所述组合物中所述青霉素的含量为80-200u/ml，例如可以为80u/ml、90u/ml、100u/ml、110u/ml、120u/ml、130u/ml、140u/ml、150u/ml、150u/ml、160u/ml、170u/ml、180u/ml、190u/ml、200u/ml，优选为120-150u/ml。其中，u指的是青霉素的活性效价单位，即指毫升或每毫克中含有的有效成分的多少，1mg青霉素钠定义为1670单位。

在一个具体的实施方式中，所述抗真菌素为水溶性的三唑类抗真菌药物。三唑类抗真菌药物包括氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑、泊沙康唑、拉夫康唑等，优选为氟康唑。

其中，氟康唑于1990年在美国上市，是双三唑类抗真菌药。通过抑制真菌细胞色素依赖酶，阻止麦角甾醇的合成而使真菌死亡，用于各种真菌感染如隐球菌病、慢性黏膜皮肤念珠菌病和播散性念珠菌病。其口服生物利用度高，药物相互作用少，有较好的疗效，已广泛用于临床。氟康唑可治疗白细胞减少症和艾滋病患者的慢性黏膜皮肤念珠菌病，无明显不良反应。氟康唑治疗艾滋病患者食管念珠菌病的疗效明显优于酮康唑。此外，氟康唑对花斑癣、甲真菌病、念珠菌阴道炎、念珠菌龟头炎的疗效显著，是治疗某些浅部念珠菌病，手、足、头、股、体癣及深部真菌感染的有效药物，尤其是治疗各类念珠菌感染的深部、浅部泛发型真菌病及新生隐球菌病、脑膜炎等的首选药物，长期大量应用较安全，不良反应少。

在一个具体的实施方式中，所述抗真菌素的含量为0.1-10μg/ml，例如可以为0.1μg/ml、0.5μg/ml、1μg/ml、2μg/ml、3μg/ml、4μg/ml、5μg/ml、6μg/ml、7μg/ml、8μg/ml、9μg/ml、10μg/ml，优选为1-5μg/ml。

在一个具体的实施方式中，所述组合物中所述异硫氰酸胍的含量为1.5-3mol/l，例如可以为1.5mol/l、1.6mol/l、1.6mol/l、1.7mol/l、1.8mol/l、1.9mol/l、2mol/l、2.1mol/l、2.2mol/l、2.3mol/l、2.4mol/l、2.5mol/l、2.6mol/l、2.7mol/l、2.8mol/l、2.9mol/l、3mol/l，优选为1.8-2.0mol/l。

在一个具体的实施方式中，所述组合物中所述氯化锂为饱和状态，即0.67g/ml。

在一个具体的实施方式中，所述样品包括咽拭子、鼻拭子。

本发明还一种采样装置，所述采样装置包括上述的任意一种或多种组合物。所述采样装置还包括采样管和拭子。其中，采样管可以是现有技术中任何已有的用于病毒或样品采集的采样管，比如离心管式的采样管。拭子可以是现有技术中任何已有的用于病毒或样品采集的拭子，所述拭子头部材料为聚丙烯纤维或聚酰胺纤维。

在一个具体的实施方式中，所述采样管为可折叠圆形薄片。如图1所示，可折叠圆形薄片式采样管包括不干胶粘层1，样品保存组合物增厚层2，拭子放置区3。可折叠圆形薄片式采样管整体为滤纸材料。其中，不干胶粘层1位于可折叠圆形薄片式采样管的边缘，用于对可折叠圆形薄片式采样管折叠后，将采样管的边缘粘贴，用于封闭采样管，并方便采样管的存放。拭子放置区3用于放置拭子，样品保存组合物增厚层2围绕拭子放置区3设置，用于存放用于样品保存的组合物，材料为聚乙烯泡沫塑料。

本发明还提供一种检测试剂盒，所述试剂盒包括上述的组合物，或上述的采样装置。

本发明还提供上述的用于样品保存的组合物在病毒保存中的用途。优选的，所述病毒为新冠病毒。

本发明还提供一种居家病毒检测方法，包括：受试者用拭子自行采集样品；将所述拭子头部浸入采样装置的保存液中密封保存，所述保存液包括上述任一项所述的组合物；将所述采样装置送至检测部门用于检测。

其中，所述采集的样品包括咽拭子、鼻拭子。

具体的，用拭子自行采集样品可采用如下方法：

1.咽拭子：用2根聚丙烯纤维头的塑料杆拭子同时擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，力度以腮部明显凸起为准，左右各刮20个来回，将拭子头浸入含3ml病毒保存液(也可使用等渗盐溶液、组织培养液或磷酸盐缓冲液)的管中，尾部弃去，旋紧管盖。

2.鼻拭子：将1根聚丙烯纤维头的塑料杆拭子轻轻插入鼻道内鼻腭处，停留片刻后缓慢转动退出。取另一根聚丙烯纤维头的塑料杆拭子以同样的方法采集另一侧鼻孔。上述两根拭子浸入同一含3ml采样液的管中，尾部弃去，旋紧管盖。

采集的样本，常温48小时内寄送至检测中心。密闭后的样本应放入密封袋内密封，每袋装一份样本。

本发明的组合物通过包含特定含量的青霉素、抗真菌素、异硫氰酸胍和氯化锂，所述青霉素、抗真菌素、异硫氰酸胍和氯化锂等组分，可实现病毒样本的常温化保存，同时在保证病毒灭活的前提下，既能用于后续的蛋白免疫检测又能用于核酸检测。同时其常温保存的能力使其能够便于患者居家采样。

实施例

(1)用于样品保存的组合物的配制

配制hanks平衡盐溶液：原液a:nacl160g，mgso4·7h2o2g，kcl8gmgcl2·6h2o2gcacl22.8g溶于1000ml双蒸水；原液b：(1)na2hpo4·12h2o3.04g，kh2po41.2g，葡萄糖20.0g溶于800ml双蒸水，(2)0.4％酚红溶液：取酚红0.4g，置玻璃研钵中，逐滴加入0.1nnaoh，并研磨，直至完全溶解，约加0.1nnaoh10ml。将溶解的酚红吸入100ml量瓶中，用双蒸水洗下研钵中残留酚红液，并入量瓶中，最后补加双蒸水至100ml。(1)液与(2)液混合，补加双蒸水至1000ml，即为原液b。应用液：1份原液a，1份原液b，18份双蒸水。

配制用于样品保存的组合物：以实施例1为例，称取6mg青霉素(1000u＝6mg)完全溶入90ml配置好的hanks平衡盐溶液中；再称取0.2mg氟康唑溶于溶液，完全溶解；量取5m异硫氰酸胍4ml混匀，最后称取67g氯化锂加入溶液，完全溶解后，补加hanks平衡盐溶液至100ml，摇匀，最后调节溶液ph值至7.2-7.8，即制备得到用于样品保存的组合物。其他各实施例及对比例按照表1含量参数计算，参照以上步骤配制。

其中，对比例7-10的组合物中分别缺少青霉素、氟康唑、异硫氰酸胍和氯化锂。

表1各实施例和对比例的组分含量

(2)试验例

对照材料：病毒保存液(杭州麦伯生物技术有限公司)

样本采集：用采样拭子采集新型冠状病毒，把每个拭子分别加入到对应实施例1-5和对比例1-10制备的样品保存的组合物中，以麦伯生物病毒保存液做对照组。

(3)保存效果

检测方法：将采集好的新型冠状病毒样本在不同条件下进行保存(保存温度分别是：常温、4℃、-20℃、-70℃)，并分别在保存后的第4h、第12h、第24h、第48h、第72h后，上机做pcr核酸敏感度实验，测定ct值并计算分析结果。进一步地，测出的ct值≤37.0判定为阳性(+)，未测出ct值或ct值为0判定为阴性(-)，当ct值大于37且小于40时为灰区，.结果在灰区的样本需重复试验并检测。重复检测如果有明显的s型曲线，与第一次检测结果一致，判断基因检测阳性(+)。记录最终检测结果验证样本保存效果。

检测结果如表2-17所示：

表2实施例1组合物的检测结果

其中，+表示阳性、-表示阴性，以下各表相同

表3实施例2组合物的检测结果

表4实施例3组合物的检测结果

表5实施例4组合物的检测结果

表6实施例5组合物的检测结果

表7对比例1组合物的检测结果

表8对比例2组合物的检测结果

表9对比例3组合物的检测结果

表10对比例4组合物的检测结果

表11对比例5组合物的检测结果

表12对比例6组合物的检测结果

表13对比例7组合物的检测结果

表14对比例8组合物的检测结果

表15对比例9组合物的检测结果

表16对比例10组合物的检测结果

表17对照病毒保存液的检测结果

由此可见，本发明提供的样品保存组合能够在常温下长时间保存病毒样品，且保存效果好，在长时间常温储存后的检出阳性率比普通的病毒保存液更高，具有很好的应用价值。

需要说明的是，上述实施例不以任何形式限制本发明，凡采用等同替换或等效变换的方式所获得的技术方案，均落在本发明的保护范围内。