防治动物腹泻的地衣芽孢杆菌及其微生态制剂的制作方法

本发明涉及一种地衣芽孢杆菌，具体地说是防治动物腹泻的地衣芽孢杆菌及其微生态制剂，属于农业生物领域。

背景技术：

动物腹泻由多病原、多因素引起，通常病因复杂，临床诊治困难。可导致大量电解质丢失，脱水、营养不良等症状，甚至导致动物死亡。用抗菌素治疗牛、羊、兔等草食动物时，很容易造成胃肠菌群紊乱。以芽孢杆菌为主的微生态制剂可增加动物抗病能力，提高饲料利用率，促进动物生长，克服了抗生素的一些弊端。地衣芽孢杆菌bacilluslicheniformisb2.0118可产生蛋白酶、淀粉酶等酶类，以及多种氨基酸和维生素等营养物质，无毒、无副作用。

技术实现要素：

本发明的目的在于，提供了能够防治动物腹泻的地衣芽孢杆菌及其微生态制剂，防治效率高、作用条件温和，其浓缩产物不破坏饲料中的营养成分，其提取物可用于饲料的生物降解脱毒，能够有效防治动物腹泻，防治率可达90%以上。

本发明的技术方案为：

防治动物腹泻的地衣芽孢杆菌，该菌株已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏编号为cgmccno.20892。

所述地衣芽孢杆菌的液体培养基配方重量分数为：10‰氯化钠、10‰胰蛋白胨、5‰酵母粉，培养条件为：37℃，ph维持在7.4，通气发酵，得到地衣芽孢杆菌液体培养物；固体培养基配方重量分数为：90%麸皮、5%蛋白胨、5%酵母粉，水分为60%；培养条件为：37℃，通气发酵，得到地衣芽孢杆菌固体培养物。

一种防治动物腹泻的微生态制剂，所述制剂含有上述地衣芽孢杆菌培养物的提取物。

所述提取物的制备方法为：将地衣芽孢杆菌固体培养物在32℃培养5天后，用30℃温水浸提24小时，然后以载体吸附并低温晾干。

所述载体包括麦麸、玉米芯粉、酵母细胞壁、玉米淀粉、米糠、葡萄糖、沸石粉、膨润土、蒙脱石中的一种或几种。

所述微生态制剂中提取物的含量为重量分数20-60%。

所述地衣芽孢杆菌发酵提取物与载体的质量比例为：20-60：80-40。

所述地衣芽孢杆菌菌株16srdna基因序列测定：aaaatcctgtccacttcggcggctggctccaaaaggttacctcaccgacttcgggtgttacaaactctcgtggtgtgacgggcggtgtgtacaaggcccgggaacgtattcaccgcggcatgctgatccgcgattactagcgattccagcttcacgcagtcgagttgcagactgcgatccgaactgagaacagatttgtgggattggcttagcctcgcggcttcgctgccctttgttctgcccattgtagcacgtgtgtagcccaggtcataaggggcatgatgatttgacgtcatccccaccttcctccggtttgtcaccggcagtcaccttagagtgcccaactgaatgctggcaactaagatcaagggttgcgctcgttgcgggacttaacccaacatctcacgacacgagctgacgacaaccatgcaccacctgtcactctgcccccgaaggggaagccctatctctagggttgtcagaggatgtcaagacctggtaaggttcttcgcgttgcttcgaattaaaccacatgctccaccgcttgtgcgggcccccgtcaattcctttgagtttcagtcttgcgaccgtactccccaggcggagtgcttaatgcgtttgctgcagcactaaagggcggaaaccctctaacacttagcactcatcgtttacggcgtggactaccagggtatctaatcctgttcgctccccacgctttcgcgcctcagcgtcagttacagaccagagagtcgccttcgccactggtgttcctccacatctctacgcatttcaccgctacacgtggaattccactctcctcttctgcactcaagttccccagtttccaatgaccctccccggttgagccgggggctttcacatcagacttaagaaaccgcctgcgcgcgctttacgcccaataattcccggacaacgcttgccacctacgtattaccgcggctgctggcacgtagttagccgtggctttctggttaggtaccgtcaaggtaccgccctattcgaacggtacttgtttttccctaacaacagagttttacgatccgaaaaccttcatcaatcacgggggggtggtccgtcagacttttgtcccttggggaagattccctaatggtgccttccgtaggagtttgggccgtgtttcagttcccgggtggccgatcaccctttcaggttgggtacgcattgttgccttggtgagccgttacctcaccaaataggtaatgcgccgcgggtccatttgtaagtggtaggtaaaagccaccttttataattgaaccatgcggttcaatcaagcatccggtattagccccggtttcccggagttatcccagtcttacaggcaggttacccacgtgttactcacccgtccgccgctaacatcagggagcaagctcccatctgtccgctcgactgcatgtatagcacgccgcaatctccg。

本发明防治动物腹泻制剂，其作用对象包括饲料及其制作原料。

本发明的有益效果为：防治效率高、作用条件温和，其浓缩产物不破坏饲料中的营养成分，其提取物可用于饲料的生物降解脱毒，能够有效防治动物腹泻，防治率可达90%以上。

下面结合附图和实施例对本发明作进一步说明。

附图说明

图1为本发明实施例一株防治动物腹泻的地衣芽孢杆菌在1600x显微镜下的芽孢图；

图2为本发明实施例地衣芽孢杆菌对金黄色葡萄球菌、猪大肠杆菌、沙门氏菌有明显抑菌圈图。

具体实施方式

以下对本发明的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。

实施例1

防治动物腹泻的地衣芽孢杆菌，所述地衣芽孢杆菌的液体培养基配方重量分数为：10‰氯化钠、10‰胰蛋白胨、5‰酵母粉，培养条件为：37℃，ph维持在7.4，通气发酵，得到地衣芽孢杆菌液体培养物；固体培养基配方重量分数为：90%麸皮、5%蛋白胨、5%酵母粉，水分为60%；培养条件为：37℃，通气发酵，得到地衣芽孢杆菌固体培养物。

一种防治动物腹泻的微生态制剂，所述制剂含有上述地衣芽孢杆菌培养物的提取物。

所述提取物的制备方法为：将地衣芽孢杆菌固体培养物在32℃培养5天后，用30℃温水浸提24小时，然后以载体吸附并低温晾干。

所述载体包括麦麸、玉米芯粉、酵母细胞壁、玉米淀粉、米糠、葡萄糖、沸石粉、膨润土、蒙脱石中的一种或几种。

所述微生态制剂中提取物的含量为重量分数20-60%。

所述地衣芽孢杆菌发酵提取物与载体的质量比例为：20-60：80-40。

所述地衣芽孢杆菌菌株是从玉米田地土壤里分离得到的。

收集玉米田地土壤里的样品，稀释10倍后用于筛选实验。稀释液涂布于lb平板上，37℃培养36hr。对平板上的每个单菌落，转接至空白lb平板上，得到纯培养菌株。将纯化菌株在液体lb培养基中培养36hr后，检测其防治动物腹泻能力。

实施例2地衣芽孢杆菌对动物腹泻的防治能力

一、试验动物与试验日粮

将实施例1纯化的菌株进行液体lb培养基活化，活化22hr后得到本发明菌株的培养液。试验选取25日龄断奶仔猪100头，平均体重7.37±0.02kg。1组为空白对照组，饲喂基础日粮。2组为试验组，饲喂试验日粮，在基础日粮基础上按200ml/t地衣芽孢杆菌量添加，其中地衣芽孢杆菌活菌数2000亿cfu/g。试验全过程记录各组饲料腹泻情况，在试验第一天和第21天早晨空腹称重，称量剩余饲料量，计算各组平均日增重、料肉比（f/g）。

二、数据分析

采用统计学软件spss21.0软件对数据进行单因子方差分析和相关性分析。由试验结果可以看出，在试验初期空白组与地衣芽孢杆菌组平均初重无明显差异（p>0.05）。在试验末期（第21日龄）芽孢组体重明显高于空白对照组，平均总增重、平均日增重分别提高12.33%、14.89%，差异显著（p<0.05）。

表10.02%地衣芽孢杆菌对断奶仔猪增重的影响（kg/头）

由表2可看出，地衣芽孢杆菌组的耗料量高于对照组，但差异不显著（p>0.05），而地衣芽孢组的平均增重高于对照组，料肉比明显低于对照组，芽孢组降低料肉比15.49%，差异极显著（p<0.01）。试验结果显示，地衣芽孢杆菌组可以明显降低仔猪腹泻的发生，空白组共有12头腹泻，腹泻率为23.08%；地衣芽孢杆菌组共有3头腹泻，腹泻率为5.77%，与空白组相比芽孢组腹泻率降低17.31%，差异极显著（p<0.01）。

表20.02%地衣芽孢杆菌对断奶仔猪采食量及料肉比的影响

结果：地衣芽孢杆菌能够减少肠道疾病的发生。在试验过程中，空白组仔猪腹泻主要集中在试验初期，因为断奶仔猪刚转入保育舍对各种生活环境不适应，呈现出明显的断奶、换料应激。而地衣芽孢杆菌组腹泻较少，芽孢杆菌能够提高免疫力和有一定的抗应激作用有关。

实施例3：地衣芽孢杆菌对金黄色葡萄球菌、猪大肠杆菌、沙门氏菌拮抗能力

一、试验样品及处理

将实施例1纯化的菌株进行液体lb培养基活化，活化36hr后得到本发明菌株的培养液。猪大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌在液体lb培养基中扩培。液体lb培养基配方为胰蛋白胨1%，nacl1%，酵母浸粉0.5%，琼脂1.5%，ph值7.4。

二、拮抗实验

毒株金黄色葡萄球菌、猪大肠杆菌、沙门氏菌菌液用移液枪各吸1000ul，分别加入温度降至40℃的无菌lb培养基中，摇晃混匀分装到平板里，静置冷却凝固。每个毒株两个平行。无菌打孔器在凝固平板上打孔，地衣芽孢杆菌移液枪取20ul加入孔中。放置40℃培养箱中培养20h，观察打孔周围是否出现抑菌圈。

三、结果

地衣芽孢杆菌对金黄色葡萄球菌、猪大肠杆菌、沙门氏菌有明显抑菌圈。抑菌圈直径为6mm-13mm。

序列表

<110>科润生科技发展有限公司

<120>防治动物腹泻的地衣芽孢杆菌及其微生态制剂

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