专利名称:副鸡嗜血杆菌液体培养基的制备方法
技术领域：
本发明涉及的是一种生物培养基的制备方法，具体地说，是一种副鸡嗜血杆菌液体培养基的制备方法。用于生物工程领域。
背景技术：
目前，繁殖副鸡嗜血杆菌用的培养基一般使用固体的巧克力培养基，也有使用心脑浸汤、鸡胚或细胞培养，但制备的菌体量少，一般含菌量为108CFU/ml，(CFU为菌落形成单位)需浓缩后才能制备疫苗，成本高。副鸡嗜血杆菌CVCC258和CVCC269是《中国菌种目录》在编菌种(英文版，1992年10月机械工业出版社出版，中国微生物菌种保藏管理委员会编著)，中国兽医微生物保藏中心作为中国微生物菌种保藏管理委员会下设机构保证常年为国内外教学、科研、生产单位提供《中国菌种目录》中的微生物，列入《中国菌种目录》的微生物将长期保存，一直对外供应，公众能从中国兽医微生物保藏中心买到的微生物菌种(CVCC中国兽医微生物保藏中心，该中心20多年来为生产、科研、教学提供了6万多株各类兽医微生物菌种)。副鸡嗜血杆菌CVCC258和CVCC269是禽传染性鼻炎的病源。CVCC258是1984年从发病鸡中分离，血清型C型；CVCC269是从发病鸡中分离，血清型A型。
经对现有技术的文献检索发现，中国专利公开号CN1297041Y，
公开日为2001年5月30日，发明名称为一种利用鸡胚制作鸡传染性鼻炎等细菌的培养基，该专利利用鸡胚制作鸡传染性鼻炎等细菌的培养基，利用鸡胚浸出液制作细菌培养基。取适龄鸡胚，捣碎后煮沸，去除残渣，上清液中按比例加入其他营养素即成。其不足之处是副鸡嗜血杆菌经其培养后含菌量少，成本高。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中的不足，提供一种副鸡嗜血杆菌液体培养基的制备方法，使其提高制备抗原含菌量，降低成本，能为临床制备副鸡嗜血杆菌疫苗提供高质量的抗原。
本发明是通过以下技术方案实现的，本发明具体步骤如下1)鸡胸肌肉100克，洗净，绞碎，加入800毫升蒸馏水，煮沸10分钟，过滤去除肉渣，将鸡肉汤调整容量至900毫升。
2)在无菌的条件下，取动物血(绵羊或鸡)100毫升，放入-40℃冰箱冻融3次即成裂解血。
3)在900毫升鸡肉汤中加入蛋白胨5克，酵母浸膏2克，葡萄糖5克，氯化钠10克，溶解后调pH值为7.4，在高压灭菌器中121℃灭菌20分钟，冷却后加入裂解血100毫升，即成副鸡嗜血杆菌液体培养基。
副鸡嗜血杆菌是一种酶系统不完备、需要血液中的生长因子才能生长的细菌，该菌需要V因子。V因子是烟酰胺腺嘌呤二核苷酸及烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸，在细菌呼吸过程中起递氢作用。动物血液经裂解后能释放出V因子，同时血清中含有菌体生长的各种营养素，副鸡嗜血杆菌在该培养基中能得到充分生长。
本发明采用制备鸡肉汤，在鸡肉汤中加入蛋白胨、酵母膏、葡萄糖、氯化钠等营养素，将无菌动物血裂解处理后，加入灭菌后的鸡肉汤中，即成副鸡嗜血杆菌液体培养基。制备的副鸡嗜血杆菌液体培养基适宜于副鸡嗜血杆菌的生长，在该培养基中副鸡嗜血杆菌37℃培养36小时，菌体量最高可达1011CFU/ml，为临床制备副鸡嗜血杆菌疫苗提供高质量的抗原。
具体实施方式
实施例1取鸡胸肌肉100克，洗净绞碎，加入800毫升蒸馏水，煮沸10分钟，过滤去除肉渣，将鸡肉汤调整容量至900毫升。在无菌的条件下，取绵羊血100毫升，放入-40℃冰箱冻融3次即成裂解血。在900毫升鸡肉汤中加入蛋白胨5克，酵母浸膏2克，葡萄糖5克，氯化钠10克，溶解后调pH值为7.4，在高压灭菌器中121℃灭菌20分钟，冷却后加入无菌动物裂解血100毫升，即成副鸡嗜血杆菌液体培养基。
实施例2取鸡胸肌肉100克，洗净绞碎，加入800毫升蒸馏水，煮沸10分钟，过滤去除肉渣，将鸡肉汤调整容量至900毫升。在无菌的条件下，取鸡血100毫升，放入-40℃冰箱冻融3次即成裂解血。以下制备方法同实施例1。
以上实施例1、2制备的副鸡嗜血杆菌液体培养基适宜于副鸡嗜血杆菌的生长，在该培养基中副鸡嗜血杆菌37℃培养36小时，菌体量最高达1011CFU/ml，为临床制备副鸡嗜血杆菌疫苗提供高质量的抗原。
权利要求
1.一种副鸡嗜血杆菌液体培养基的制备方法，其特征在于，具体步骤如下1)将鸡胸肌肉洗净，绞碎，加入蒸馏水，煮沸，过滤去除肉渣，调整鸡肉汤容量；2)在无菌的条件下，取动物血，放入冰箱冻融即成裂解血；3)在鸡肉汤中加入蛋白胨，酵母浸膏，葡萄糖，氯化钠，溶解后，在高压灭菌器中灭菌，冷却后加入裂解血，即成副鸡嗜血杆菌液体培养基。
2.根据权利要求
1所述的副鸡嗜血杆菌液体培养基的制备方法，其特征是，所述的步骤1)中，鸡胸肌肉100克，加入蒸馏水800毫升，煮沸10分钟，鸡肉汤容量调整至900毫升。
3.根据权利要求
1所述的副鸡嗜血杆菌液体培养基的制备方法，其特征是，所述的步骤2)中，取绵羊或鸡血100毫升，放入-40℃冰箱冻融3次。
4.根据权利要求
1所述的副鸡嗜血杆菌液体培养基的制备方法，其特征是，所述的步骤3)中，在900毫升鸡肉汤中加入蛋白胨5克，酵母浸膏2克，葡萄糖5克，氯化钠10克，溶解后调pH值为7.4，在高压灭菌器中121℃灭菌20分钟，冷却后加入裂解血100毫升，即成副鸡嗜血杆菌液体培养基。
专利摘要
一种生物工程领域的副鸡嗜血杆菌液体培养基的制备方法，本发明包括以下步骤1)将鸡胸肌肉洗净，绞碎，加入蒸馏水，煮沸，过滤去除肉渣，调整鸡肉汤容量；2)在无菌的条件下，取动物血，放入冰箱冻融即成裂解血；3)在鸡肉汤中加入蛋白胨，酵母浸膏，葡萄糖，氯化钠，溶解后，在高压灭菌器中灭菌，冷却后加入裂解血，即成副鸡嗜血杆菌液体培养基。本发明提高培养物含菌量，降低成本，能为临床制备副鸡嗜血杆菌疫苗提供高质量的抗原。
文档编号C12N1/20GKCN1724647SQ200510027329
公开日2006年1月25日 申请日期2005年6月30日
发明者刘永德, 汪毅, 叶陈梁, 吴祖立 申请人:上海交通大学导出引文BiBTeX, EndNote, RefMan