肌酐衍生物、肌酐免疫原及其特异性抗体与肌酐检测试剂盒的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及免疫检测领域，具体涉及一种肌酐衍生物、肌酐免疫原及其特异性抗 体与肌酐检测试剂盒。
【背景技术】
[0002] 肌酐（Creatinine)，其结构式如式（III)所示：
[0003]
【主权项】
1. 一种肌酐衍生物，其特征在于，具有式（I)所示的结构式：
其中，R为连接基团-(CH2)n-C00-，n为1至20之间的整数。
2. -种肌酐免疫原，其特征在于，具有式（II)所示的结构式：
其中，R为连接基团_(CH2)n-C00-，n是1至20之间的整数，载体为具有免疫原性的蛋 白质或多肽；优选所述R为-CH2-C00-，所述载体为血清蛋白、血蓝蛋白或甲状腺球蛋白。
3. -种抗肌酐特异性抗体，由免疫原免疫动物后生产得到，其特征在于，所述抗肌酐特 异性抗体由权利要求2所述的肌酐免疫原免疫动物后得到。
4. 根据权利要求3所述的抗体，其特征在于，所述抗体为完整的蛋白分子或具有与肌 酐特异性结合的能力的多肽片段。
5. 根据权利要求3所述的抗体，其特征在于，所述抗体为多克隆抗体或单克隆抗体。
6. 根据权利要求3所述的抗体，其特征在于，所述抗体由所述肌酐免疫原免疫兔、山 羊、小鼠、绵羊、豚鼠或马后得到。
7. -种肌酐免疫原的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括： 制备权利要求1所述的肌酐衍生物；以及 将所述肌酐衍生物与载体连接，得到所述肌酐免疫原； 其中，所述载体为具有免疫原性的蛋白质或多肽；制备所述的肌酐衍生物的步骤包 括： 步骤S1，将肌酐与卤代-(ch2)n-coo-叔丁酯在二甲基甲酰胺环境下进行取代反应，得 到2-(CH2)n-C00-叔丁酯肌酐；以及 步骤S2,将所述2- (CH2)n-COO_叔丁酯肌酐溶于强酸溶液中得到反应液，对所述反应液 在45?55°C下搅拌1. 5?2. 5h，得到所述肌酐衍生物。
8. 根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S1包括以下步骤： 步骤S11，将肌酐与卤代-(CH2)n-COO_叔丁酯溶于二甲基甲酰胺中，得到混合溶液；其 中，所述肌酐与卤代_(CH2)n-C00-叔丁酯的摩尔比为1?1.2:1 ;优选在得到所述混合溶 液之后，还包括对所述混合溶液进行加热至恒温的步骤，更优选所述加热至恒温的温度为 80?90°C，所述恒温的时间大于等于24h; 步骤S12,向所述混合溶液中加入丙烯酸乙酯，得到反应混合物，并对所述反应混合物 在0?4°C的低温下进行搅拌，得到固液混合物；以及 步骤S13,对所述固液混合物依次进行过滤、洗涤纯化和真空干燥处理，得到所述 2-(CH2)n-COO_ 叔丁酯肌酐。
9. 根据权利要求7或8所述的制备方法，其特征在于，当n= 1时，所述肌酐衍生物的 制备步骤如下：
10. 根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述载体与所述肌酐衍生物的连接 步骤包括： 步骤S21，制备载体溶液和肌酐衍生物溶液；优选所述载体为血清蛋白、血蓝蛋白或甲 状腺球蛋白； 步骤S22,将所述肌酐衍生物溶液滴加至所述载体溶液中，得到滴加混合液； 步骤S23,对所述滴加混合液在2?8°C下搅拌过夜，得到所述肌酐免疫原粗品；以及 步骤S24,对所述肌酐免疫原粗品进行纯化，得到所述肌酐免疫原；优选采用透析的方 式进行纯化。
11. 根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，在所述步骤S21中， 所述制备载体溶液的步骤包括将载体溶解于〇. 18?0. 25M，pH在8. 3?8. 8的磷酸缓 冲液中，得到所述载体溶液；以及 所述制备肌酐衍生物溶液的步骤包括将所述肌酐衍生物与1-乙基-3-(_3-二甲氨丙 基）碳二亚胺和N-羟基硫代琥珀酰亚胺置于二甲基甲酰胺、乙醇以及8?12mM，pH4. 8? 5. 2的磷酸钾缓冲液中进行室温搅拌，得到所述肌酐衍生物溶液； 其中，所述载体与所述肌酐衍生物的质量比为1?1. 2:1。
12. -种肌酐检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中含有权利要求1所述的肌酐衍生 物和/或权利要求3至6中任一项所述的抗体。
【专利摘要】本发明提供了一种肌酐衍生物、肌酐免疫原及其抗体与肌酐检测试剂盒。本发明的肌酐衍生物具有式(Ⅰ)所示的结构：其中，R为-(CH2)n- COO-，n为1至20之间的整数。将特定位点上的H取代为R的具有上述结构式的肌酐衍生物与特定载体连接而得到的肌酐免疫原，具有高免疫原性，且免疫诱 导动物所产生的抗体特异性高，与肌酐的特异结合能力强，通过使用均相酶免疫检测技术能够实现在全自动生化分析仪上对肌酐的高通量、快速化检测，且具有操作 简便、灵敏度高、特异性强、结果准确等优点，还能有效降低肌酐检测成本，有利于临床推广使用。
【IPC分类】C07D233-88, C07K16-44, C07K14-765, C07K14-47, G01N33-70, C07K14-795
【公开号】CN104557722
【申请号】CN201410799524
【发明人】虞留明, 张华 , 伍勇, 封飒飒, 成志鹏
【申请人】苏州博源医疗科技有限公司
【公开日】2015年4月29日
【申请日】2014年12月20日