，在化工废水的生物净化中具有良好的应用前景。
【附图说明】
[0033] 以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中：
[0034] 图1为热带假丝酵母NYZJ6-14菌落形态。
[0035] 图2为热带假丝酵母NYZJ6-14的系统发育树。
【具体实施方式】
[0036] 以下参照具体的实施例来说明本发明。本领域技术人员能够理解，这些实施例仅 用于说明本发明，其不以任何方式限制本发明的范围。
[0037] 下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的药 材原料、试剂材料等，如无特殊说明，均为市售购买产品。其中，实施例中使用的有机化工废 水采自江苏省盐城沿海化工园区，盐度为68%。，0?&为2. 5 X 10 4mg/L，氨氮含量为I. 42mg/ L，亚硝酸盐氮含量为0. 190mg/L，硝酸盐氮含量为6. 72mg/L，固体悬浮物含量为8. 6mg/L， pH 为 2. 4。
[0038] 实施例1热带假丝酵母NYZJ6-14的分离、纯化及鉴定
[0039] 1.分离及纯化
[0040]富集培养：取未受高盐度有机废水污染的江苏省盐城市城东污水自来水厂回流池 中的活性污泥（含水量为16. 94%，pH为5. 09, 土壤有机质为304. SSgkg-1，全氮为41. 90g kg'全磷为24. 95g kg，，封装于无菌袋中置于4°C冰箱保存。量取活性污泥约IOL接种于 IOOmL的富集培养基（即未经稀释、稀释1倍、4倍、9倍、14倍和19倍的高盐度有机化工废 水）中，于28°C下分别进行好氧培养和液体石蜡液封厌氧培养（150r/min的恒温摇床中培 养7天），得富集培养液。
[0041] 初筛：取Iml富集培养液涂布于孟加拉红琼脂培养基上，于28 °C的生化培养箱中 培养2天，将长出的菌落逐一挑出，并按照菌株分离纯化的常规方法，获得多株纯菌株。将 这些纯菌株逐一挑入事先装有约130 μ L选择性培养基（未经稀释的高盐度有机化工废水） 的96孔平板上，培养1天后，用6mm无菌滤纸片吸收培养液后贴于孟加拉红琼脂培养基上， 每皿均匀地贴6个，分别于28?30°C的生化培养箱中培养1-2天，根据滤纸片周围生长圈 大小，判断菌株的降解能力，挑取出生长圈较大的多个优势菌株。
[0042] 复筛：将初筛得到的菌株活化后用无菌水稀释成适当浓度的菌悬液（含菌量为 3. 21 X IO8个/ml)，以10 % (V/V)接种量接入IOOmL培养液（未经稀释的高盐度有机化工 废水）中，分别于28?30°C水浴恒温振荡器培养4天，测定培养液中COD &含量和微生物 数量，选对高盐度有机废水单位细胞COD&降解率较高的菌株作为优势降解耐盐菌株，命名 为"NYZJ6-14"。
[0043] 2.鉴定
[0044] 对筛选出的优势降解嗜盐真菌进行形态学观察（菌落形态和菌丝形态），同时委 托生工生物工程（上海）股份有限公司进行ITS区序列分析，测序结果见序列表中的SEQ ID NO:1〇
[0045] 形态学观察发现，菌株的菌落为圆形，不透明，边缘光滑，表面光滑，在培养基正面 颜色纯白，反面颜色粉红。进一步的鉴定试验和结果包括，菌株的革兰氏阳性，V. P试验阴 性，甲基红试验阳性，不能水解淀粉。菌落形态见图1。
[0046] 获得NYZJ6-14的ITS区序列，将其与Genbank中的基因序列进行同源性比较，发 现其属于假丝酵母（Candida)属，然后通过系统发育树的建立（图2)，判断NYZJ6-14可能 为热带假丝酵母（Candida tropicalis)。结合形态学观察结果（图1)，最终确定NYZJ6-14 为热带假丝酵母（Candida tropicalis)。
[0047] 3.兼氧性
[0048] 将热带假丝酵母NYZJ6-14涂布于孟加拉红琼脂培养基上，分别于28?30°C的生 化好氧培养箱中和厌氧培养箱中培养2?7天，每天观察菌苔生长情况。结果表明，热带假 丝酵母NYZJ6-14在好氧和厌氧条件下均能正常生长，因此，确定热带假丝酵母NYZJ6-14为 兼氧菌。
[0049] 实施例2热带假丝酵母NYZJ6-14在有氧和无氧条件下的耐盐性和有机化工废水 处理作用
[0050] 取高盐度有机化工废水，将该废水稀释1倍、4倍、9倍、14倍和19倍，得到1/2倍 原水、1/5倍原水、1/10倍原水、1/15倍原水和1/20倍原水，与未经稀释的废水（1倍原水） 作为培养液。
[0051] 将实施例1获得的热带假丝酵母NYZJ6-14用无菌水稀释成适当浓度的菌悬液， 分别接种于IOOmL得到的不同稀释液以及未经稀释的废水中，使NYZJ6-14的接种量为 3. 48X IO7个菌株/ml培养液，然后分别于28°C水浴恒温振荡器培养4天。所做培养分成 有氧组和无氧组，其中有氧组为150r/min振荡培养，培养液的瓶装量为35% (V/V)，无氧组 为在培养液表面加约Icm的液体石蜡，其它条件与有氧组相同。
[0052] 上述实验平行进行2组，分别为试1和试2,同时将不接种热带假丝酵母NYZJ6-14 的培养液作为空白，培养4天后测定培养液中COD &、pH、盐度、含菌量、COD&降解率（％ )， 结果如表1所示。
[0053] 表 I Candida Tropicalis NYZJ6-14 培养 4 天的试验结果
[0054]
【主权项】
1. 一株能够处理高盐度有机化工废水的热带假丝酵母（Candida tropicalis) NYZJ6-14,其保藏编号为 CGMCC No. 9682。
2. 权利要求1所述的热带假丝酵母NYZJ6-14在处理有机化工废水中的用途。
3. 根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述处理有机化工废水包括，将所述热带 假丝酵母NYZJ6-14接种于有机化工废水中进行培养。
4. 根据权利要求2或3所述的用途，其特征在于，所述有机化工废水的盐度为0? 68%。，优选为0?34%。，更优选为3?34%。，进一步优选14?34%〇 ; 优选地，所述有机化工废水的〇?&为I. 0 X 10 3?2. 5 X 10 4mg/L，优选为I. 5 X IO3? L 3 X 104mg/L，更优选为 2. 5 X IO3?L 3 X 10 4mg/L，进一步优选 5 X IO3?L 3 X 10 4mg/L ; 优选地，所述有机化工废水的pH为2. 0?7. 6,优选为2. 0?7. 0,进一步优选2. 7? 4. 0〇
5. 根据权利要求2至4中任一项所述的用途，其特征在于，所述热带假丝酵母 NYZJ6-14的接种量为I. 0 X IO7?6. 0 X 10 7个菌株/ml所述有机化工废水，优选为 2. 0 X IO7?5. 0 X 10 7个菌株/ml所述有机化工废水，更优选为3. 0 X 10 7?4. 0 X 10 7个菌 株/ml所述有机化工废水； 优选地，培养条件为25?30°C，40?160r/min ;作为培养液的有机化工废水的瓶装量 为 30 ?40% (V/V)。
6. -种处理有机化工废水的方法，其特征在于，所述方法包括，将权利要求1所述的热 带假丝酵母NYZJ6-14接种于有机化工废水中进行培养。
7. 根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述有机化工废水的盐度为0?68%。，优 选为0?34%。，更优选为3?34%。，进一步优选14?34%〇 ; 优选地，所述有机化工废水的〇?&为I. 0 X 10 3?2. 5 X 10 4mg/L，优选为I. 5 X IO3? L 3 X 104mg/L，更优选为 2. 5 X IO3?L 3 X 10 4mg/L，进一步优选 5 X IO3?L 3 X 10 4mg/L ; 优选地，所述有机化工废水的pH为2. 0?7. 6,优选为2. 0?7. 0,进一步优选2. 7? 4. 0〇
8. 根据权利要求6或7所述的方法，其特征在于，所述热带假丝酵母NYZJ6-14的接种 量为I. 0 X IO7?6. 0 X 10 7个菌株/ml所述有机化工废水，优选为2. 0 X 10 7?5. 0 X 10 7个 菌株/ml所述有机化工废水，更优选为3. 0 X IO7?4. 0 X 10 7个菌株/ml所述有机化工废 水； 优选地，培养条件为25?30°C，40?160r/min ;作为培养液的有机化工废水的瓶装量 为 30 ?40% (V/V)。
9. 权利要求1所述的热带假丝酵母NYZJ6-14在制备用于处理有机化工废水的生物降 解剂中的用途。
10. 权利要求1所述的热带假丝酵母NYZJ6-14在构建处理有机化工废水的工程菌中的 用途。
【专利摘要】本发明提供了一株优势处理高盐度有机化工废水的兼氧嗜盐真菌——热带假丝酵母NYZJ6-14及其应用。所述热带假丝酵母(Candida？Tropicalis？NYZJ6-14)保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏日期2014年9月19日，保藏编号为CGMCC？No.9682。本发明提供的菌株能耐受从低盐度到高盐度的变化过程，并能表现出优良的CODCr降解活性和生长活性，在高盐度有机化工废水的生物净化中具有良好的应用前景。CGMCC No.968220140919
【IPC分类】C12R1-74, C12N1-16, C02F3-34
【公开号】CN104560746
【申请号】CN201410829927
【发明人】丁成, 李朝霞, 韩香云, 陈天明, 单学凯, 吴晓薇
【申请人】盐城工学院, 江苏科易达环保科技有限公司
【公开日】2015年4月29日
【申请日】2014年12月26日