556(2003))。近期研究已显不PG02通过 2种不同的G蛋白偶联受体（GPCRs)发挥其作用一一在各种人组织中表达的T辅助2型细胞 (CRT肥)上表达的D-前列腺素类受体（DP)和化学吸引剂受体-同源分子。PGDs/CRT肥系统 介导嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和Th2细胞的趋化性，该设及变应性炎症的诱导（Ulven T等人，Curr.Top.Med.Chem. 6 (13):1427-1444 (2006))。PGD2的许多作用通过其对 D型前列腺素("DP")受体的作用而介导，所述DP受体是在上皮和平滑肌上表达的G蛋白偶 联受体。在哮喘中，呼吸上皮长久W来已被认为是驱动疾病发展的炎性细胞因子和趋化因 子的关键来源（化Igate，等人，Am.J.Respir.Crit.CareMed. 162:113-117 (2000))。 在哮喘的实验鼠模型中，DP受体在抗原攻击后在气道上皮上急剧上调（Matsuoka，等人， Science287:2013-20n(2000))。DP受体设及人变应性鼻炎，特征在于喷嘻、痒、rhinorea 和鼻充血症状的常见变应性疾病。DP括抗剂已显示在减轻许多物种中的变应性鼻炎症 状中有效，并且更具体而言已显示抑制抗原诱导的鼻充血，变应性鼻炎中表现最多的症状 (Jones,等人，Am.J.Resp.Grit.CareMed. 167:A218 (2003);Arimura，等人，S-5751. J.Wiarmacol.Exp.Ther. 298 (2):411-9 (2001))dDP括抗剂在变应性结膜炎和变应 性皮炎的实验模型中也是有效的（Ari皿ra等人，S-5751.J.化armacol.Exp.化er. 298 (2) :411-9 (2001) ;Torisu，等人，Bioorg. &Med.Chem. 12:5361-5378 (2004))。因此 也存在关于对于PGD2特异性的抗体的需要，并且阻断或调节其生物学功能因此可W用于预 防和治疗与PGD2过量生产相关的疾病。
[0011] 1-磯酸銷氨醇（S1P)是诱导许多细胞效应的生物学活性脂质的另一个例子，包括 导致血小板聚集、细胞增殖、细胞形态、肿瘤细胞侵袭、内皮细胞趋化性和内皮细胞体外血 管发生的那些。S1P受体因此是用于治疗应用例如伤口愈合和肿瘤生长抑制的良好祀。S1P 部分经由命名为S1P1、S1P2、S1P3、S1P4和S1P5 (W前分别被称为邸G-1、邸G-5、邸G-3、 EDG-6和邸G-8)的一组G蛋白偶联受体给细胞发信号。该些受体与关于结构相关溶血磯脂 酸（LPA)的3种其他受体（LPAULPA2和LPA3(W前为邸G-2、邸G-4和邸G-7))共享50-55% 氨基酸和簇同一性。（Ishii，I.等人，Mol.Wiarmacol. 58 (5):895-902 (2000))。当配 体与那种受体结合时，在G蛋白偶联受体（GPCR)中诱导构象转变，促使在结合的G蛋白的 a-亚单位上的GDP由GTP替换和G蛋白后续释放到细胞质内。a-亚单位随后与P丫-亚 单位解离，并且每个亚单位随后可W与效应蛋白质结合，该激活第二信使，导致细胞应答。 最后，在G蛋白上的GTP水解为GDP，并且G蛋白的亚单位彼此再次结合，并且随后与受体再 次结合。扩增在一般GPCR途径中起主要作用。一种配体与一种受体的结合导致许多G蛋 白的活化，各自能够与许多效应蛋白质结合，导致扩增的细胞应答。S1P受体成为良好的药 物祀，因为个别受体是组织和应答特异性的。S1P受体的组织特异性是重要的，因为开发对 于一种受体选择性的激动剂或括抗剂使细胞应答集中于包含那种受体的组织，限制不希望 有的副作用。S1P受体的应答特异性也是重要的，因为它允许开发起始或抑制特定细胞应答 而不影响其他应答的激动剂或括抗剂。例如，S1P受体的应答特异性可W允许起始血小板 聚集而不影响细胞形态的S1P模拟物。
[0012]S1P作为銷氨醇的代谢产物在其与銷氨醇激酶的反应中形成，并且大量贬存于血 小板聚集体中，其中存在高水平的銷氨醇激酶且不存在銷氨醇裂解酶。S1P在血小板聚集过 程中释放，在血清中累积，并且也在恶性腹水中发现。S1P生物降解最可能经由通过磯酸外 切水解酶（ectophosphohy化olases)水解而进行，特别是1-磯酸-銷氨醇磯酸水解酶。因 此存在关于对于S1P特异性的抗体的需要，用于通过阻断其与受体的相互作用或稳定S1P 且增强其生物效应来调节其生物学功能，用于在预防或治疗自身免疫疾病、炎性疾病和癌 症中使用。
[0013] 由于PGE2在各种人病症中的作用，已设计了抑制或对抗PGE2活性的治疗策略。特 别地，适合于递送给人的治疗抗体仍未得到报道，所述治疗抗体与PGE2结合且中和PGE2。 本领域存在关于能够结合且中和PGE2的改良抗体的需要。
【发明内容】
[0014] 本发明设及对脂质代谢产物例如前列腺素E2 (PGE2)特异的结合蛋白。本发明的 PGE2结合蛋白包括但不限于能够结合PGE2的抗体、抗原结合片段、和具有各种支架的抗原 结合片段。
[0015] 本发明的一个方面设及能够结合PGE,的结合蛋白。在一个实施方案中，本发明的 结合蛋白具有中和、稳定、括抗和/或激动活性。在另一个实施方案中，结合蛋白能够调节 PGE2的生物学功能。例如，结合蛋白能够至少部分中和PGE 2。
[0016] 在本发明的一个方面，结合蛋白能够结合PGE2,并且阻止PGE2与一种或更多种 PGE2受体(例如，EP1、EP2、EP3和EP4 )结合。在本发明的一个实施方案中，结合蛋白能够结 合PGE2,并且阻止PGE2与EP1、EP2、EP3和EP4受体结合。
[0017] 本发明提供了制备、表征且使用PGE,结合蛋白作为单一疗法或作为与其他治疗剂 的组合疗法的方法；W及在预防和/或治疗由PGE2介导的疾病中的方法，所述疾病例如自 身免疫和炎性疾病，例如类风湿性关节炎、化ohn氏病、骨关节炎、AMD、淋己结病、溶血性贫 血、紫藏、强直性脊柱炎、多发性硬化、糖尿病、癌症、疼痛、骨丢失/恢复、atherosclelotic 病、生殖病症和其他疾病。本发明的结合蛋白还可W用于此种疾病的诊断中。
[0018] 在本发明的一个实施方案中，结合蛋白是结合PGE2的分离的抗体或其抗原结合片 段。此种结合可W在基于生物素化PGE2的化ISA测定中加W证实，其中ECs。选自约lxl〇-e-约lxl〇-7M、约lxl〇-7 -约lxl〇-8M、约lxl〇-8 -约lxl〇-9M、约 1〇-9 -约 1〇-1°M、约 1x10-1° -约ixicr"M、和约icr"-约在另一个实施方案中，结合蛋白与PGE,的结合在基 于巧标记的PGE2的放射免疫测定中加W证实，其中Kd选自约lxl〇-6 -约lxl〇-7M、约lxl〇-7 -约 1x10-8M、约 1x10-8 -约 1x10-9M、约 10-9 -约 约 1x10-1° -约 1x10-11M和约 1〇-11 -约1〇-12。在另一个实施方案中，结合蛋白与PGE2的结合在化IPR中加W证实，其中 通过其受体邸4介导的PGE,诱导的巧流入通过结合蛋白与PGE2的结合加W抑制，其中1CW 选自约 1x10-6 -约 1x10-7M、约 1x10-7 -约 1x10-8M、约 1x10-8 -约 1x10-9M、约 10-9 -约 l〇-i°M、约 1x10-1° -约 1x10-11M和约 10-11 -约 10-12。
[0019] 在一个实施方案中，在基于FACS的受体结合测定中，抗体抑制生物素化PGE2与细 胞表面上的EP1、EP2、EP3和/或EP4受体结合，或在基于化ISA的受体结合测定中，抗体抑 制生物素化PGE2与使用受体表达细胞制备的膜制剂上的EP1、EP2、EP3和/或EP4受体结 合，其中ICs。为约lxl〇-e-约IxlO-7M、约IxlO-7 -约lxl〇-sM、约lxl〇-s-约IxlO-9M、 约 1〇-9 -约 约lxl〇-w-约lxl〇-iiM和约 1〇-11 -约 1〇-12,或在基于巧PGE2的放 射免疫测定中，抗体抑制巧-PGE2与细胞表面或膜制剂上的EP1、EP2、EP3和/或EP4受体 结合，其中ICs。为约 1x10-6 -约 1x10-7M、约 1x10-7 -约 1x10-8M、约 1x10-8 -约 1x10-9 M、约 1〇-9 -约 约lxl〇-w-约 1x10-11M和约 1〇-11 -约 1〇-12,和 / 或在EP4 介导 的FLIPR测定中，抗体抑制PGE2诱导的巧流入，其中ICw为lxl(T6 -约lxl(T7M、约lxl(T7 -约 1x10-8M、约 1x10-8 -约 1x10-9M、约 10-9 -约 约 1x10-1° -约 1x10-11M和约 10^1 -约1〇-12。在一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段结合PGE2,并且在基于细胞表面 的受体结合测定中，或在基于放射免疫测定的受体结合测定中，在100nM的浓度下使PGE2 与其受体中的至少一种的结合抑制约70-100%。
[0020] 在一个实施方案中，抗体是 19C9、4F10、15F10、K1B、K7H、K3A、L11、L2U2B5-7. 0、 2B5-8. 0或2B5-9. 0或其变体。在一个实施方案中，变体是人源化变体，例如化2B5.P1或 Hu2B5.P2。
[0021]在另一个方面，本发明提供了分离的抗体或其抗原结合片段，其结合PGE,，并且在 角叉菜胶诱导的晒齿类动物爪水肿模型中，使爪水肿抑制约10 %、20 %、30 %、40 %、50 %、 60%、70%、80%、90%或100%。在一个特定实施方案中，在角叉菜胶诱导的晒齿类动物爪 水肿模型中，抗体使爪水肿抑制超过约10%。
[0022] 在另一个方面，本发明提供了分离的抗体或其抗原结合片段，其结合PGE,，并且 在晒齿类动物胶原诱导的关节炎模型中，使爪肿胀或平均关节炎得分抑制约10 %、20 %、 30 %、40 %、50 %、60 %、70 %、80 %、90 %或100 %。在一个特定实施方案中，在晒齿类动物胶 原诱导的关节炎模型中，抗体使爪肿胀或平均关节炎得分抑制超过10%。
[0023] 在另一个方面，本发明提供了分离的抗体或其抗原结合片段，其结合PGE,，并且在 角叉菜胶诱导的晒齿类动物爪水肿模型中，使爪水肿抑制约10 %、20 %、30 %、40 %、50 %、 60%、70%、80%、90%或100%。在一个特定实施方案中，在角叉菜胶诱导的晒齿类动物爪 水肿模型中，抗体使爪水肿抑制超过约10%。
[0024] 在另一个方面，本发明提供了分离的抗体或其抗原结合片段，其结合PGE,，并且 在晒齿类动物胶原诱导的关节炎模型中，使爪肿胀或平均关节炎得分抑制约10 %、20 %、 30 %、40 %、50 %、60 %、70 %、80 %、90 %或100 %。在一个特定实施方案中，在晒齿类动物胶 原诱导的关节炎模型中，抗体使爪肿胀或平均关节炎得分抑制超过10%。
[0025] 在另一个实施方案中，如通过放射免疫测定测量的，本发明的结合蛋白对于PGE2 具有至多约1(T3s4;至多约至多约1(T5s4;或至多约1(T6s^i的解离速率（off rate) 常数（kwf)。优选地，如通过放射免疫测定测量的，本发明的结合蛋白对于PGE,具有约l