本发明各个实施方式中所设及到的技术特征只要 彼此之间未构成冲突就可W相互组合。
[002引本发明提供的球形海藻酸巧凝胶微粒的制备方法，采用微流控巧片制备，包括W下步骤：
[0029] (1)油相的制备；将可溶性巧盐的己醇溶液和含表面活性剂连续相基质均匀混 合，得到均匀混合物；将所述均匀混合物采用溶剂挥发法，制得含原位形成的巧盐纳米粒的 油相；所述每毫升油相中含有巧盐0. 04~0.Immol。所述表面活性剂为非离子型表面活性 剂，优选司班80，其含量在2~5wt%之间。
[0030] 混合时，为更加均匀，可采用超声混合；其中巧盐，优选氯化巧或硝酸巧，保证良好 的溶解性；连续相基质优选液体石蜡、色拉油、硅油等非极性高沸点的有机溶剂。
[0031] (2)微流控法制备球形海藻酸巧凝胶微粒；W海藻酸钢溶液为分散相，W步骤（1) 制备的油相为连续相，在微流控巧片中发声预交联反应，形成预交联的液滴；将所述液滴收 集于含巧离子的收集液中，进行交联反应，洗漆分离后得到所述球形海藻酸巧凝胶微粒。所 述分散相中海藻酸钢浓度在0. 5~4.Owt%之间；所述预交联反应的反应时间在1~4min。 所述收集液中巧离子浓度在0. 1~Imol/L之间。
[0032] 具体地，所述微流控巧片为T-型、Y-型、流动聚焦型或同向流动型，其微管道截面 可为长方形或圆形，微通道截面为长方形时，其内径是指其宽度或高度，优选基于聚二甲基 硅氧烷（PDM巧类微流控巧片和由聚合物管构建的微流控装置。所述微流控巧片的通道内 径为150ym~1000ym，连续相和分散相的流速比在2~500之间。调控分散相和油相两相 的流速、微流控装置类型和微通道构造，制得的球形海藻酸巧凝胶微粒的粒径在40ym~ 1000ym之间。
[0033] W下为实施例：
[0034] 实施例1
[0035] 一种球形海藻酸巧凝胶微粒的制备方法，采用微流控巧片制备，包括W下步骤：
[0036] (1)油相的制备；称取0. 〇4g无水化化溶解到约3血的己醇中，超声溶解或揽拌 溶解后加入到lOmL含2wt%的司班80的液体石蜡中，超声混匀或揽拌混匀后在60°C下磁 力揽拌过夜，使己醇挥发完全，后冷却至室温，即制得含原位形成的巧盐纳米粒的油相；所 述每毫升油相中含有巧盐0. 〇4mmol。用动态光散射法测定所制备的油相中的化C12纳米粒 粒径分布如图1中实线所示，其平均粒径为50nm，多分散指数为0. 2。己醇挥发前的油相照 片如图2左所示，为浑浊悬浮液；己醇挥发后的油相照片如图2右所示，为清澈的悬浮液。
[0037] (2)微流控法制备球形海藻酸巧凝胶微粒；W海藻酸钢溶液为分散相，W步骤（1) 制备的油相为连续相。将水相与油相分别装入2mL注射器（碧迪医疗器械有限公司）和 lOmL注射器（上海金塔医用器材有限公司）中，在微量注射累推注下，在基于聚二甲基娃氧 烧（PDM巧的流动聚焦型微流控巧片（示意图如图3a所示）中发生预交联反应，形成预交 联的液滴；将所述液滴收集于化C12溶液中，进行交联反应，洗漆分离后得到所述球形海藻 酸巧凝胶微粒，粒径为175ym，如图4(b)所示。
[003引所述分散相中海藻酸钢浓度为2.Owt% ;所述预交联反应的反应时间约为2min。 所述收集液中巧离子浓度为0. 2mol/l，连续相流速600yL/h，分散相流速100yL/h，即连 续相和分散相的流速比为6。
[0039] 所述基于聚二甲基硅氧烷（PDM巧的流动聚焦型微流控巧片，其微管道截面为长 方形，连续相通道宽度为200ym，分散相通道宽度为150ym，接口处为20ym，出口通道尺 寸为300ym;微通道高度为180ym。所述微流控巧片，其制备方法如下；
[0040] 采用软刻蚀技术制作化Wang,etal.L油Chip, 2012, 12:4781-4786 ; L.Mazutis,etal.化t.Protoc.，2013, 8:870-891.)。即将PDMS预聚物和交联剂按重量比 为10:1的比例混合后倒在已制备好的娃磨具上，真空脱气后在65°C的烘箱中固化化。用 打孔器在固化好的PDMS基片的微通道入口和出口处打孔。用等离子体处理PDMS基片和玻 璃片，迅速贴合，即得到基于PDMS的微流控装置。
[0041] 另外，保持其它制备条件不变，仅改变油相中化C12的浓度，制备海藻酸巧微粒。当 油相中无巧盐时，制备的微粒显微照片如图4(a)所示；当每毫升油相中含有巧盐0.07mmol 时，制备的微粒显微照片如图4(c)所示。由图4(a)至图4(c)可见，油相中不含化CI2时， 制得的微粒有明显的拖尾现象（图4a)。而在油相中加入少量化C12所得到的凝胶颗粒球 形规整（图4化）、图4(c))。可W看出，油相中CaCl2含量越大，球形越好。但油相中过多 的巧盐会使分散相中的海藻酸钢过度预交联，形成凝胶微粒，而堵塞微通道。
[0042] 实施例2
[0043] 一种球形海藻酸巧凝胶微粒的制备方法，采用微流控巧片制备，包括W下步骤：
[0044] (1)油相的制备；称取0.llg无水化(N03)2溶解到约4血的己醇中，超声溶解或揽 拌溶解后加入到lOmL含2. 5wt%的司班80的色拉油中，超声混匀或揽拌混匀后在60°C下 磁力揽拌过夜，使己醇挥发完全，后冷却至室温，即制得含原位形成的巧盐纳米粒的油相； 所述每毫升油相中含有巧盐0. 07mm〇l。用动态光散射法测定所制备的油相中的化(N03) 2纳 米粒粒径分布如图1中虚线所示，其平均粒径为llOnm，多分散指数为0.3。
[0045] (2)微流控法制备球形海藻酸巧凝胶微粒；W海藻酸钢溶液为分散相，W步骤（1) 制备的油相为连续相。将水相与油相分别装入2mL注射器（碧迪医疗器械有限公司）和 lOmL注射器（上海金塔医用器材有限公司）中，在微量注射累推注下，在基于微导管构建的 T-型微流控巧片（示意图如图3b所示）中发生预交联反应，形成预交联的液滴；将所述液 滴收集于化(N03) 2溶液中，进行交联反应，洗漆分离后得到所述球形海藻酸巧凝胶微粒，粒 径为500ym，如图4(e)所示。
[0046] 所述分散相中海藻酸钢浓度为3wt% ;所述预交联反应的反应时间约为3min。所 述收集液中巧离子浓度为0. 7mol/l，连续相流速3000yL/h，分散相流速100yL/h，即连续 相和分散相的流速比为30。
[0047] 所述基于微导管构建的T-型装置，其微管道截面为圆形。其制备方法如下：
[0048] W内径为0. 8mm、外径为1. 6mm的聚全氣己丙締（阳巧管（Cole-Parmer InstrumentCompany)为连续相通道，将内径0. 16mm、外径0. 31mm的注射器针头在油相管 一端约1/4处插入，使其针头出口刚好与油相管内壁相平W导入分散相，使用5分钟环氧结 构胶（ITWDevcon)黏合接口，并固定在玻璃片上。
[0049] 另外，保持其它制备条件不变，仅改变油相中Ca(N〇3)2的浓度，制备海藻酸巧微 粒。当油相中无巧盐时，制备的微粒显微照片如图4(d)所示；当每毫升油相中含有巧盐 0. 07mmol时，制备的微球显微照片如图4讯所示。由图4(d)至图4讯可见，油相中不含 Ca(N〇3)2时，制得的微球有明显的拖尾现象（图4(d));而在油相中加入少量Ca(NO3)2所得 到的凝胶微粒球形规整（图4(e)、图4(f))。油相中Ca(N〇3)2含量越大，球形越好。但油相 中过多的巧盐会使分散相中的海藻酸钢过度预交联，形成凝胶微粒，而堵塞微通道。
[0050] 实施例3
[0化1] 一种球形海藻酸巧凝胶微粒的制备方法，采用微流控巧片制备，包括W下步骤：
[00巧 （1)油相的制备；称取0. 05g无水化化溶解到约3血的己醇中，超声溶解或揽拌 溶解后加入到lOmL含2wt%的司班80的液体石蜡中，超声混匀或揽拌混匀后在60°C下磁 力揽拌过夜，使己醇挥发完全，后冷却至室温，即制得含原位形成的巧盐纳米粒的油相；所 述每毫升油相中含有巧盐0. 05mmol。
[0053] (2)微流控法制备球形海藻酸巧凝胶微粒；W海藻酸钢溶液为分散相，W步骤（1) 制备的油相为连续相。将水相与油相分别装入2mL注射器（碧迪医疗器械有限公司）和 10血注射器（上海金塔医用器材有限公司）中，在微量注射累推注下，在微流控巧片中发生 预交联反应，形成预交联的液滴；将所述液滴收集于化C12溶液中，进行交联反应，洗漆分离 后得到所述球形海藻酸巧凝胶微粒，粒径为40ym。
[0化4] 所述分散相中海藻酸钢浓度为0. 5wt% ;所述预交联反应的反应时间约为Imin。 所述收集液中巧离子浓度为0.lmol/1，连续相流速1000yL/h，分散相流速20yL/h，即连 续相和分散相的流速比为50。所述微流控