含砜基团的5-氟-n-(吡啶-2-基)吡啶-2-胺衍生物的制作方法
【专利说明】含砜基团的5-氟-N-(吡啶-2-基）吡啶-2-胺衍生物
[0001] 本发明涉及如本文所描述和定义的通式（I)的含砜基团的5-氟-N-(吡啶-2-基） P比啶-2-胺衍生物，及其制备方法，其在治疗和/或预防疾病--特别是过度增殖性疾病和 /或病毒引起的感染性疾病和/或心血管疾病一一中的用途。本发明还涉及用于制备所述 通式（I)的化合物的中间体化合物。
[0002] 细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK)蛋白家族由细胞分裂周期的关键调节物（细胞周 期CDK)(其参与基因转录调节（转录CDK))的成员和具有其他功能的成员组成。CDK需要 激活与调节性细胞周期蛋白亚基的联系。细胞周期CDK的CDK1/细胞周期蛋白B、CDK2/细 胞周期蛋白A、CDK2/细胞周期蛋白E、CDK4/细胞周期蛋白D和CDK6/细胞周期蛋白D被相 继激活，以驱动细胞进入并穿过细胞分裂周期。转录CDK的CDK9/细胞周期蛋白T和CDK7/ 细胞周期蛋白H通过羧基末端结构域（CTD)的磷酸化调节RNA聚合酶II的活性。正转录 因子b(P-TEFb)为CDK9和四种细胞周期蛋白配偶子（partner)(细胞周期蛋白T1、细胞周 期蛋白K、细胞周期蛋白T2a或T2b)之一的异二聚体。
[0003] 而⑶K9 (NCBI基因库基因ID1025)排他性地参与转录调节，此外⑶K7作为⑶K激 活激酶（CAK)参与细胞周期调节。
[0004] 基因通过RNA聚合酶II的转录由预引发复合物在启动子区的组装及CTD的Ser5 和Ser7通过⑶K7/细胞周期蛋白H的磷酸化而启动。对于大部分基因，RNA聚合酶II在 其沿DNA模板移动20-40个核苷酸后停止mRNA转录。RNA聚合酶II的这种启动子近侧暂 停由负性延伸因子介导，并且被认为是响应各种刺激以控制快速诱导的基因的表达的主要 控制机制（Cho等人，CellCycle9, 1697, 2010)。P-TEFb关键性地参与克服RNA聚合酶II 的启动子近侧暂停和通过CTD的Ser2的磷酸化及负向延伸因子的磷酸化和失活转为多产 的延伸状态。
[0005]P-TEFb自身的活性由若干机制调节。约一半细胞的P-TEFb存在于与7SK的 小核RNA(7SKsnRNA)、La相关蛋白7 (LARP7/PIP7S)和六亚甲基双乙酰胺诱导蛋白 l/2(HEXMl/2,He等人，MolCell29,588,2008)的失活复合物中。其余一半P-TEFb存 在于含布罗莫结构域（bromodomain)蛋白Brd4的活性复合物中（Yang等人，MolCell 19, 535, 2005)。Brd4通过与乙酰化组蛋白相互作用将P-TEFb募集到预备用于基因转录 的染色质区域。通过交替与其正调节物和负调节物相互作用，P-TEFb保持功能平衡：与 7SKsnRNA复合物结合的P-TEFb表示能够根据细胞转录和细胞增殖需要释放活性P-TEFb 的储库（Zhou&Yik,MicrobiolMolBiolRev70,646,2006)。此外，P-TEFb活性由翻译 后修饰来调节，其包括磷酸化/去磷酸化、泛素化和乙酰化（参见Cho等人，CellCycle 9, 1697, 2010)〇
[0006]P-TEFb异二聚体的⑶K9激酶活性的活性下调与多种人类病理学环境有关，例如 过度增殖性疾病（例如癌症）、病毒引起的感染性疾病或心血管疾病：
[0007] 癌症被认为是由增殖和细胞死亡（细胞凋亡）的失衡介导的过度增殖性疾病。在 多种人类肿瘤中发现高水平的抗凋亡Bcl-2-家族蛋白，它们是肿瘤细胞存活延长和治疗 抵抗的原因。已显示，P-TEFb激酶活性的抑制会降低RNA聚合酶II的转录活性，导致短寿 的抗凋亡蛋白（特别是Mcl-1和XIAP)减少，恢复肿瘤细胞经历细胞凋亡的能力。许多与转 化的肿瘤表型有关的其他蛋白（例如Myc、NF-kB应答基因转录物、有丝分裂激酶）是短寿 蛋白或由短寿转录物编码，其对由P-TEFb抑制介导的RNA聚合酶II的活性降低敏感（参 见Wang&Fischer, Trends Pharmacol Sci29, 302, 2008)〇
[0008] 许多病毒依靠宿主细胞的转录机制来转录它们自己的基因组。在HIV-1的情况 中，RNA聚合酶II被募集至病毒LTR的启动子区域。病毒转录激活剂（Tat)蛋白与初生的病 毒转录物结合，并克服通过P-TEFb的募集引起的启动子近侧RNA聚合酶II暂停，这反过来 促进转录延伸。此外，Tat蛋白通过替换7SKsnRNA复合物中的P-TEFb抑制蛋白HEXM1/2 来增加活性P-TEFb部分。最新数据已显示，P-TEFb的激酶活性的抑制足以在对宿主细胞 无细胞毒性的激酶抑制剂浓度下阻断HIV-1复制（参见Wang&Fischer,TrendsPharmacol Sci29, 302, 2008)。相似地，对于其他病毒，如B-细胞癌症相关Epstein-Barr病毒，已报 道了通过病毒蛋白的P-TEFb募集，其中核抗原EBNA2蛋白与P-TEFb相互作用（Bark-Jones 等人，Oncogene，25, 1775, 2006)，及人类T-嗜淋巴细胞病毒1型（HTLV-1)，其中转录激活 剂Tax募集P-TEFb(Zhou等人，JVirol. 80, 4781，2006) 〇
[0009] 心脏肥大（心脏对于机械超负荷和压力（血流动力压力，例如高血压、心肌梗死） 的适应性反应）长期会导致心力衰竭和死亡。已显示，心脏肥大与心肌细胞中增加的转录 活性和RNA聚合酶II CTD磷酸化相关。已发现，P-TEFb通过来自失活的7SK snRNA/HEXM 1/2复合物的解离来激活。这些发现表明P-TEFb激酶活性的药理学抑制作为治疗心脏肥大 的治疗方法（参见Dey等人，Cell Cycle 6, 1856, 2007)。
[0010] 总之，多种证据表明，P-TEFb异二聚体（=⑶K9和四种细胞周期蛋白配偶子（细 胞周期蛋白T1、细胞周期蛋白K、细胞周期蛋白T2a或T2b)之一）的CDK9激酶活性的选择 性抑制代表治疗疾病（例如癌症、病毒性疾病和/或心脏疾病）的新方法。CDK9属于至少 13种密切相关的激酶家族，其中细胞周期CDK亚群在调节细胞增殖中履行多种角色。因此， 期望细胞周期CDK(例如CDK1/细胞周期蛋白B、CDK2/细胞周期蛋白A、CDK2/细胞周期蛋 白E、CDK4/细胞周期蛋白D、CDK6/细胞周期蛋白D)和CDK9的共同抑制影响正常增殖组 织，例如肠粘膜、淋巴和造血器官以及生殖器官。为了使CDK9激酶抑制剂的治疗范围最大 化，需要对CDK9具有高选择性的分子。
[0011] 许多不同出版物中描述了一般性的CDK抑制剂以及CDK9抑制剂：
[0012] W02008129070和W02008129071均描述了 2, 4-二取代的氨基嘧啶通常作为CDK 抑制剂。还宣称这些化合物中的一些可以分别作为选择性⑶K9抑制剂（W02008129070)和 CDK5 抑制剂（W02008129071)起作用，但没有给出具体的CDK9IC5(I(W02008129070)或CDK5 IC5Q(W02008129071)数据。这些化合物的嘧啶核的5-位不含氟原子。
[0013]W02008129080公开了 4, 6-二取代的氨基嘧啶，并且证明这些化合物对多种蛋白 激酶（例如⑶K1、⑶K2、⑶K4、⑶K5、⑶K6和⑶K9)的蛋白激酶活性显示抑制作用，优选对 CDK9的抑制作用（实施例80)。
[0014] 102005026129公开了4,6-二取代的氨基嘧啶，并且证明这些化合物对多种蛋白 激酶（特别是⑶K2、⑶K4和⑶K9)的蛋白激酶活性显示抑制作用。
[0015]W02011116951公开了取代的三嗪衍生物作为选择性⑶K9抑制剂。
[0016]W02012117048公开了二取代的三嗪衍生物作为选择性⑶K9抑制剂。
[0017]W02012117059公开了二取代的吡啶衍生物作为选择性CDK9抑制剂。EP1218360 B1 (对应于US2004116388A1、US7074789B2 和W02001025220A1)描述了三嗪衍生物作为激 酶抑制剂，但没有公开有效的或选择性的CDK9抑制剂。
[0018]W02008079933公开了氨基吡啶和氨基嘧啶衍生物及它们作为CDK1、CDK2、CDK3、 ⑶K4、⑶K5、⑶K6、⑶K7、⑶K8或⑶K9抑制剂的用途。
[0019]W02011012661描述了氨基吡啶衍生物用作⑶K抑制剂。
[0020]W02011026917公开了衍生自取代的4-苯基吡啶-2-胺的甲酰胺作为CDK9抑制 剂。
[0021]W02012066065公开了苯基-杂芳基胺作为⑶K9抑制剂。相比其他⑶K亚型，优选 CDK9选择性，然而公开的CDK抑制数据限于CDK9。未公开连接到嘧啶核的C4位置的双环体 系。在连接至嘧啶核C4的基团中，可视为其包含烷氧基苯基，但未建议通过连接于嘧啶环 C5的氟原子以及嘧啶C2的苯胺来表征的特定取代模式，其特征是间位取代的磺酰基-