is subsp. lactis。
[0027] 本发明的乳酸乳球菌乳酸亚种BD2263,已于2015年4月27保藏在中国微生物 菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC)，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3 号，邮编：100101，保藏编号为：CGMCC No. 10749,培养物名称是BD2263,分类命名是乳酸乳 球菌乳酸亚种 Lactococcuslactis subsp. lactis。
[0028] 本发明的乳酸乳球菌乳酸亚种BD3170,已于2015年4月27保藏在中国微生物 菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC)，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3 号，邮编：100101，保藏编号为：CGMCC No. 10748,培养物名称是BD3170,分类命名是乳酸乳 球菌乳酸亚种 Lactococcuslactis subsp. lactis。
[0029] 本发明的肠膜明串珠菌LM79,已于2015年4月27日保藏在中国微生物菌种保 藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC)，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号， 邮编：100101，保藏编号为：CGMCC No. 10750,培养物名称是肠膜明串珠菌，分类命名是 Leuconostocmesenteroides〇
【具体实施方式】
[0030] 下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实 施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商 品说明书选择。
[0031] 实施例1酸乳球菌乳酸亚种CGMCC No. 10748的获得
[0032] (1)、活化：将取自西藏的儿童粪便从冻存管中取出，以2% (v/v)的接种量接种于 经过了 121°C、15分钟灭菌的M17肉汤培养基中（M17肉汤培养基为不含有琼脂的M17Agar 培养基，购自英国OXOID公司）30°C培养36小时，连续培养3代，获得活化的菌种。
[0033] (2)、模拟干酪成熟环境选择：将步骤⑴所得的活化的菌种以2% (v/v)的接种 量接种于氯化钠含量4 %、pH5的10 %脱脂乳培养基（脱脂乳粉购自新西兰Westland合 作乳业有限公司，将脱脂乳粉溶解于水中混合即得脱脂乳培养基，所述百分比为所述脱脂 乳粉占所述脱脂乳粉和所述水总质量的质量百分比）中，30°C培养16小时得培养液。将 培养液按照GB4789. 2-2010所述的菌落总数测定方法进行平板计数。测得活菌总数达到 ^ 106cfu/mL。
[0034] 设对照组：将步骤⑴所得的生长良好的菌种以2% (v/v)的接种量接种于未添 加氯化钠、未调节pH的10%脱脂乳培养基中，30°C培养16小时，得培养液。将培养液按照 GB4789. 2-2010所述的步骤方法处理后，37°C培养48小时。
[0035] 48小时后，通过平板计数法测定，活菌总数达到多107cfu/mL。
[0036] (3)、按温度选择：
[0037] b)将步骤⑵所得的生长良好的菌株以2% (v/v)的接种量接种于未添加氯化 钠、未调节pH的10%脱脂乳培养基的三角瓶中，15°C培养16小时，得培养液b ;
[0038] c)将步骤（2)所得的生长良好的菌株以2% (v/v)的接种量接种于未添加氯化 钠、未调节pH的10%脱脂乳培养基的三角瓶中，30°C培养16小时，得培养液c ;
[0039] d)将步骤⑵所得的生长良好的菌株以2% (v/v)的接种量接种于未添加氯化 钠、未调节pH的10%脱脂乳培养基的三角瓶中，30°C培养14小时后，于40°C水浴2小时， 得培养液d。
[0040] 将培养液b、培养液C和培养液d按照GB4789. 2-2010所述的菌落总数测定方法进 行平板计数。
[0041] 选择满足b)中活菌总数达到彡105cfu/mL、c)中活菌总数达到彡10 7cfu/mL且 106cfu/mL彡d)中活菌总数达到彡104cfu/mL条件的菌株，命名为BD3170。
[0042] 将乳酸乳球菌乳酸亚种BD3170于2015年4月27日在中国微生物菌种保藏管理 委员会普通微生物中心（CGMCC)保藏，获得保藏编号为：CGMCC No. 10748,培养物名称是 BD3170,分类命名是乳酸乳球菌乳酸亚种Lactococcus lactis subsp.lactis。
[0043] 实施例2乳酸乳球菌乳酸亚种CGMCC No. 10748的形态学和培养学特征
[0044] 培养特征：采用M17 agar培养基30°C培养乳酸乳球菌乳酸亚种CGMCC No. 10748 2天后，观察培养特征。
[0045] 表1乳酸乳球菌乳酸亚种CGMCC No. 10748在培养基上的培养特征
[0046]
【主权项】
1. 一种乳酸乳球菌乳酸亚种（Lactococcus lactis subsp. lactis)，其特征在于，其保 藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为：CGMCC No. 10748。
2. -种制备乳酸乳球菌乳酸亚种CGMCC No. 10748的方法，其特征在于，其包括以下的 步骤，在培养基中培养乳酸乳球菌乳酸亚种CGMCC No. 10748即可。
3. 如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的培养基为MRS培养基、M17agar培 养基或脱脂乳培养基；所述的MRS培养基包括如下的组成成分：蛋白胨8~12g/L、牛肉膏 9~12g/L、葡萄糖15~20g/L、酵母膏4~6g/L、梓檬酸按1. 8~2g/L、磷酸氢二钾1. 8~ 2. Og/L、乙酸钠4. 8~5. 2g/L、硫酸镁0? 5~0? 6g/L、硫酸锰0? 5~0? 55g/L和吐温80~ 85g/L ;所述脱脂乳培养基为10%脱脂乳培养基，所述百分比为质量百分比；和/或，所述的 M17agar培养基包括如下的组成成分：植物蛋白胨4. 5~5. 5g/L、酵母提取物4~5g/L、聚 蛋白胨4~5g/L、0 -甘油磷酸二钠18~20g/L、抗坏血酸0. 4~0. 5g/L、牛肉浸膏2. 2~ 2. 8g/L、七水合硫酸镁1~I. 5g/L和琼脂粉2. 5~3g/L。
4. 如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的MRS培养基包括如下的组成成分：蛋 白胨10g/L、牛肉膏10g/L、葡萄糖20g/L、酵母膏5g/L、柠檬酸铵2g/L、磷酸氢二钾2g/L、乙 酸钠5g/L、硫酸镁0. 5g/L、硫酸锰0. 5g/L和吐温80g/L ;和/或，所述的M17agar培养基包 括如下的组成成分：植物蛋白胨5g/L、酵母提取物5g/L、聚蛋白胨5g/L、0 -甘油磷酸二钠 19g/L、抗坏血酸0. 5g/L、牛肉浸膏2. 5g/L、七水合硫酸镁I. 2g/L和琼脂粉2. 5g/L。
5. 如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述培养的温度为25~35°C ;所述培养的 时间为24~72小时；和/或，所述培养的pH为4~6。
6. 如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述培养的温度为28~30°C ;所述培养的 时间为24~48小时；和/或，所述培养的pH为4~5。
7. 如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的培养前还包括使用种子培养基进行 种子培养的步骤，所述的种子培养基为脱脂乳培养基；所述的脱脂乳培养菌经过115°C、 15~20min灭菌；所述种子培养的时间为16~32小时；所述种子培养的温度为28~32°C; 所述种子培养的接种量为1~2%，所述百分比为体积百分比；和/或，所述种子培养的活 化的代数为2~4代。
8. 如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述的种子培养基为10~12 %脱脂乳培养 基，所述的百分比为质量百分比；述种子培养的时间为16~24小时；和/或，所述种子培养 的活化的代数为2~3代。
9. 如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述种子培养包括升温的步骤；和/或，所 述升温的温度为10~34°C，较佳地为20~28°C。
10. 如权利要求1所述的乳酸乳球菌乳酸亚种CGMCC No. 10748在干酪制造中的应用。
【专利摘要】本发明公开了一种乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)、制备方法及其在干酪制造中的应用。该乳酸乳球菌乳酸亚种保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为：CGMCC No.10748。其在乳中生长性能良好，噬菌体抗性佳，产酸速度适中，用于生产干酪风味良好，得率高。可用于制备干酪的发酵剂，并应用于干酪或者其他的发酵食品加工工艺中。CGMCC No.1075220150427CGMCC No.1074920150427CGMCC No.1074820150427CGMCC No.1075020150427
【IPC分类】C12R1-01, A23C19-032, C12N1-20
【公开号】CN104877952
【申请号】CN201510378623
【发明人】莫蓓红, 刘振民, 焦晶凯, 黄宜, 石春权
【申请人】光明乳业股份有限公司
【公开日】2015年9月2日
【申请日】2015年7月1日