二萜内酯化合物,含其的药物组合物及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物技术领域，具体涉及从小豆蔻中分离得到的一种新的二萜内酯化 合物（I )，含其的药物组合物及其制备方法和应用。
【背景技术】
[0002] 植物小豆蔻为多年生草本。根茎粗壮，棕红色。叶两列，叶片狭长披针状，叶鞘具 棕黄色柔毛。穗状花序由茎基部抽出。花序显著伸长，花排列稀疏，花冠白色。果实长卵圆 形，果皮质韧，不易开裂。种子团分3瓣，每瓣种子5~9枚，种子气味芳香而峻烈。主产越 南、斯里兰卡和印度南部的马拉巴（Malabar)海岸。实成熟时收采，除去残留的果柄，晒干。 使用部分为姜科植物小豆蔻的干燥果实。
[0003] 药材小豆蔻为姜科植物小豆蔻Elettaria cardamomum(L. ) Maton的干燥近成熟果 实，是藏医与维吾尔医用药，以"加素"之名始载于《四部医典》，现被多国药典收载。小豆蔻 是世界著名的植物药与香料，被称为"香料之后"，原产于印度南部、斯里兰卡及瓜地马拉等 地，在印度传统医学中使用历史超过两千年，具有祛风、健胃的功效。目前中医很少使用，小 豆蔻曾以"豆蔻"之名收载于1953年版中国药典。
[0004] 小豆蔻已报道的成分主要为挥发油，以及多糖与蛋白质，推测还含有黄酮类化合 物，但目前尚未见黄酮类成分单体的分离与鉴定。挥发油是小豆蔻中重要的活性成分，含量 高达7%，超声提取得到的挥发油以α-乙酸松油脂、桉油精、芳樟醇、α-松油醇、乙酸芳 樟酯为主，与超临界CO2提取所得成分类似；如以正己烷提取，挥发油组分有所不同，为柠檬 烯、桉油精、萜品油烯、月桂烯。此外，还含有麝香草醇、橙花基醋酸酯、蒎烯、橙花叔醇、香桧 烯等。
[0005] 小豆蔻药理活性多样，尤以抗肿瘤活性报道最多，涉及皮肤、肺、结肠等多个部位 的肿瘤，对胃肠道也有较好的保护作用，此外，还具有抗菌、抗氧化、抗炎、镇痛等作用。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是提供一种从小豆蔻中分离得到的一种新的二萜内酯化合物 (I )，含其的药物组合物及其制备方法和应用。
[0007] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
[0008] 具有下述结构式的化合物（I ):
[0009]
[0010] 所述的药物组合物，其中含有治疗有效量的化合物（I )和药学上可接受的载体。
[0011] 所述的化合物（I )的制备方法，具体操作步骤如下：(a)将小豆蔻粉碎，用85% 乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇 萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)将步骤（a)所得乙酸 乙酯萃取物用正相硅胶分离，依次用体积比为40:1、20:1、10:1、5:1和1:1的二氯甲烷-甲 醇梯度洗脱得到5个组分；（c)将.步骤（b)所得组分2用正相硅胶进一步分离，依次用 体积比为30:1、25:1、20:1和10:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；（d)将步骤 (c)所得组分3用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，依次用体积百分浓度为40%、50%和 60 %的甲醇水溶液梯度洗脱，每个梯度洗脱5个柱体积，60 %甲醇水洗脱部位浓缩即得到 纯的化合物（I )。
[0012] 所述的化合物（I )在制备治疗胃癌的药物中的应用。
[0013] 所述的组合物在制备治疗胃癌的药物中的应用。
[0014] 本发明化合物用作药物时，可以直接使用，或者以药物组合物的形式使用。该药物 组合物含有治疗有效量的本发明化合物I，其余为药物学上可接受的、对人和动物无毒和 惰性的可药用载体和/或赋形剂。
[0015] 所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料 以及药物制品辅剂。将本发明的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。本发明药物可 通过口服或注射的形式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、缓释片、控 释片、胶囊、滴丸、微丸、混悬剂、乳剂、散剂或颗粒剂、口服液等；用于注射时，可制成灭菌的 水性或油性溶液、无菌粉针、脂质体或乳剂等。
[0016] 说明书附图
[0017] 图1为化合物（I )结构式。
【具体实施方式】
[0018] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0019] 1、化学试剂：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷和甲醇，均为分析纯，购自 南京化学试剂有限公司。
[0020] 2、材料和仪器：
[0021] 人胃癌细胞株SGC-7901，购于赛尔试剂公司；化合物I自制，归一化纯度大于 98% ;CTX(环磷酰胺，阳性药）、胰蛋白酶、MTT、二甲基亚砜（DMSO)、琼脂糖、冰醋酸购于 美国Sigma公司；RPMI-1640培养基、PBS磷酸盐缓冲溶液购于美国GIBCO公司；胎牛血清 购于山东银香伟业公司；台盼蓝购自北京中杉金桥生物技术有限公司；TUNEL试剂盒购自 凯基生物科技发展有限公司；DAB显色试剂盒购自北京中杉金桥生物公司；甲醛购自美国 Fisher公司；过氧化氢酶购自天津市天新精细化工开发中心。
[0022] WD-9403C紫外分析仪购自德国Biometra公司；RKI-1002型二氧化碳培养箱购自 日本Ikemoto公司；超净工作台购自苏州净化实验设备有限公司；超速离心机购自北京医 疗器械厂；低速离心机购自北京医疗器械厂；Wilovert S型倒置显微镜购自日本Olympus 公司；压力蒸汽灭菌器购自上海博讯实业有限公司；恒温金属水浴箱购自杭州奥盛仪器有 限公司；恒温磁力搅拌器购自天津劳尔科技有限公司；细胞计数板购自上海精密仪器公 司；超纯水器购自英国PURELAB ulTRAGENETIC。
[0023] 实施例1 :
[0024] (a)小豆蔻粉碎（8. 5Kg)，用85%乙醇热回流提取，提取三次，每次25L溶剂，每次 提取2小时，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚（2LX3)、乙酸乙酯（2LX3)和水 饱和的正丁醇（2LX3)萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物（232g)和正丁醇萃 取物；(b)将步骤（a)所得乙酸乙酯萃取物用正相硅胶分离，依次用体积比为40:1、20:1、 10:1、5:1和1:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到5个组分；（c)将步骤（b)所得组分2 (46g) 用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为30:1、25:1、20:1和10:1的二氯甲烷-甲醇梯度 洗脱得到4个组分；（d)将步骤（c)所得组分3(17g)用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离， 依次用体积百分浓度为40%、50%和60%的甲醇水溶液梯度洗脱，每个梯度洗脱5个柱体 积，60%甲醇水洗脱部位浓缩得到纯的化合物I (19mg)。
[0025] 结构确证：白色针状的结晶，易溶于氯仿、丙酮和甲醇，难溶于水；HR-ESMS 显示[M+Na] +为m/z 353. 1716,结合核磁特征可得分子式为C 2(IH2604。核磁共振氢谱 数据 δ H(ppm, CDCl3, 600MHz) :1. 64(1H，dd，1-Ha)，I. 39(1H，dd，1-Hb)，3. 24(1H，m， 2-H)，3. 04(1H，d，3-H)，I. 20(1H，dd，5-H)，2. 35(1H，dd，6-Ha)，2. 10(1H，dd，6-Hb)， 2. 00 (2H，t，n-H)，2. 00 (2H，t，12-H)，7. 41 (1H，t，14-H)，4. 91 (2H，d，15-H)，2. 13 (3H， s，17-H)，(λ 89 (3H，s，18-H)，(λ 89 (3H，s，19-H)，L 24 (3H，s，20-H);核磁共振碳谱数据 δ c(ppm，CDCl3, 150MHz) :35. I (CH2a_C)，52· 7(CH，2-C)，69· 6(CH，3-C)，37· 0(C，4-C)， 45. I (CH，5-C)，30. 2 (CH2,6-C)，123. O (C，7-C)，197. O (C，8-C)，181. 6 (C，9-C)，41. 7 (C， 10-C)，25. 5(CH2,11-C)，24. 9(CH2,12-C)，133. 8(C，13-C)，144. 7(CH，14-C)，70. 2(CH2， 15-C)，174. I (C，16-C)，29. 8 (CH3, 17-C)，25. 3 (CH3, 18-C)，25. 3 (CH3, 19-C)，19. 0 (CH3， 20-C);碳原子标记参见附图1。
[0026] 实施例2 :
[0027] 1、胃癌细胞SGC-7901的培养
[0028] I. 1细胞复苏
[0029] (1)从液氮罐中取出细胞冻存管，迅速置于37°C -42°C，75%酒精中，然后移至同 温水浴锅中；（2)轻轻晃动l-3min冻存管，使冻存液融化，迅速移至超净台中；（3)将含有 细胞的冻存液吸入无菌离心管，加入适量RP頂-1640培养基；（4)吹打混匀后放入低速离心 机，800rpm/min离心3分钟，去除上清液；(5)加入适量培养基吹匀，将细胞悬液依据浓度接 种到IOmL培养皿中；（6)置于含5%二氧化碳、37°C饱和湿度的培养箱中培养。
[0030] 1. 2细胞传代
[0031] (1)待培养皿中的细胞贴壁约80%时，在超净台中用移液管吸取旧的培养基吹打 数次培养皿中细胞，以吹掉死亡细胞；（2)用移液管吸去旧培养基，加入适量0. 25%胰酶消 化细胞，置于30°C培养箱中消化；（3)约3min后将培养皿置于倒置显微镜下观察，待细胞周 边发亮、回缩变圆后则说明细胞已经从壁上脱离；⑷迅速于超净台中吸去胰酶。加入适量 培养基反复吹打细胞，使细胞完全脱离培养皿；（5)将细胞悬液按浓度分别接种至不同的 培养皿中，补足培养基；(6)重新置于含5% C02、37°C饱和湿度的培养箱中培养。
[0032] 2、细胞计数
[0033] (1)准备好细胞计数板及盖玻片，二者均用酒精擦拭干净，将盖玻片盖在计数板 上；（2)待酒精挥发后，吸出适量细胞悬液，滴加在盖玻片边缘，使悬液充满盖玻片和计数 板之间，注意不要溢出盖玻片及两侧的玻璃槽，静置后计数；(3)在显微镜下找到4个大格， 每个大格又分为16个小格，分别计数4个大格中的细胞数，取平均值。压线细胞计左侧和 上方的，不计右侧和下方的；(4)细胞浓度（个/mL)=每个方格的平均细胞数X 10000 ; (5) 将细胞悬液稀释成实验所需浓度。
[0034] 3、细胞活力测定
[0035] (1)取待测定的SGC