ca2-8) 2 聚唾液酸、NeuAca2-6Galb、 化114诚2-66日1日（5化）、0日1日1-36日化1-461日臟诚（化114〇日2-8)3、0日1魁〇〇日-3(尸11〇〇1-2) Gale(血型A)、Gal口l-3(Fuc口l-2)Gale(血型B)、6Gal-HS03-SiaLex、 6GluNAc-服03-SiaLex及a2-6唾液酸化双触角N-聚糖。在一个实施例中，碳水化合物 抗原为GloboH。"GloboH"为己醋（Fuca1 一 2Gal0 1 一 3GalNAc0 1 一 3Gala1 一 4GalP1 一 4GlcP1)，其最初自人类乳癌细胞株MCF-7分离（MenardS、Tagli油ueE、Canevari S、化ssatiG、Colna曲iMI(1983)"与人类乳房的正常及癌症细胞反应的单株抗原的产 生"（Generationofmonoclonalantibodiesreactingwithnormalandcancercells ofhumanbreast).癌症研究期刊（CancerRes), 43, 1295-300 ;及化emerEG、Leve;rySB、 SonninoS、化idoniRXanevariS、KannagiR、化komoriS. (1984)"透过表现于人类乳腺 的正常和肿瘤上皮细胞的单株抗体MBrl界定的銷糖脂抗原的描述"烟laracterizationof aglycosphingolipidantigendefinedbythemonoclonalantibodyMBrlexpressed innormalandneoplasticepithelialcellsofhumanmammarygland).生物化学期 刊（JBiolChem)，259，14773-7)。GloboH在各种上皮细胞肿瘤（诸如结肠、卵巢、胃、膜 脏、子宫内膜、肺、前列腺及乳房癌）中表现（MenardS等人，前述；BremerEG等人，前述； CanevariS、FossatiG'BalsariA、SonninoS、Colna曲iMI(1983))。Glob細为可市售的 (例如卡波西斯公司，英国（Carbosynth，UK))且可藉由使用此项技术中熟知的方法连接醋 巧至神经酷胺而合成。
[0048] 在碱性条件下，亦即在超过或等于8、超过或等于9、超过或等于10、超过或等于 11或超过或等于12的抑下，制造碳水化合物抗原与类毒素蛋白的比率大于或等于5:1 的疫苗。可藉由此项技术中已知的方法，例如MLDI-T0F质谱分析来测定碳水化合物抗 原与类毒素蛋白的比率。美国专利第8,268,969号；亦参见齡'6116￥，尸曰1(1￥，化^曰* F,MichalskiJC.MethodsMolBiol. 2009 ；534:5-21.doi:10. 1007/978-1-59745-022-5_ 1."使用MLDI-TOF质谱仪分析来自糖蛋白的N-及0-连接的聚醋"（AnalysisofN-and 0-1inkedglycansfromglycoproteinsusingMALDI-TOFmassspectrometry)。
[0049] 疫苗可进一步包含佐剂，其中该佐剂为诸如OPT-821的皂素，其在本文中描述或 为a-半乳糖基-神经酷胺的合成类似物（a -GalCer或C1)。
[0050] 术语"a-半乳糖基-神经酷胺"及"a-GalCer"是指刺激自然杀手T细胞来产生 T辅助（TH) 1及TH2细胞激素的醋脂，如美国专利第8, 268, 969号中所述，该美国专利的内 容W全文引用的方式并入本文中。在一个实施例中，a-GalCer佐剂具有W下结构：
[0051]
[0052]其中R为（邸2)24邸3、（邸2)yPhF、（邸2)1。化OPhF或（C肥）10化F。
[0053] 在一个实施例中，R为（邸2)1。化OPhF，称为C34佐剂，具有W下结构：
[0054]
阳化引 新颖皂素化剂
[0056] 本发明提供可实质上纯的0PT-821皂素。本发明包涵实质上纯的0PT-821皂素W 及生物活性片段。本发明亦可包涵不纯形式的0PT-821皂素。经纯化的0PT-821皂素当与 本文所述的疫苗一起投与或与其他实质上纯的皂素或非皂素佐剂混合时，展现增强的佐剂 效应。 阳057] 0PT-821皂素为天然存在的醋巧，藉由如例如美国专利第5, 057, 540号及美 国专利第6, 524, 584号（其内容W全文引用的方式并入本文中）中所描述的高压液 相层析（HPLC)、低压液体二氧化娃层析及亲水性交互层析化ILIC)自奎拉雅属皂树 (如illajasaponariaMolinatree)的树皮W高纯度提取。高压液相层析分析显示0PT-821 为结构相关的异构化合物的混合物。0PT-821皂素不同的纯化异构化合物在本文中掲示。
[0058] 0PT-821皂素包含至少一种如下经分离的式I化合物：
[0059]
W60] 其中
[0061] Ri为P-D-芹菜糖或P-D-木糖；及
[0062] R2及R3独立地为H、烷基、
[00化]0PT-821皂素亦可包含经分离的式I化合物，其中（i)Ri为P-D-芹菜糖，R2为上 文所描绘的1989化合物的脂肪酷基部分，及R3为H(1989化合物VIA) ; (ii)R1为P-D-芹 菜糖，R2为H，及R3为上文所描绘的1989化合物的脂肪酷基部分（1989化合物V1B) Ri为P-D-木糖，R2为上文所描绘的1989化合物的脂肪酷基部分，及R3为H(1989化合物V2A);或（iv)Ri为P-D-木糖，R2为H，及R3为上文所描绘的1989化合物的脂肪酷基部分 (1989化合物V2B)。总之，1989化合物VIA、1989化合物V1B、1989化合物V2A及1989化合 物V2B称为"1989化合物混合物"。
[0066] 表1概述1989化合物的官能基及1989化合物混合物中的各1989化合物的摩 尔％。
[0067]表1
[0068]
[0069]
[0070] OPT-821皂素可包含经分离的式I化合物，其中：（i)Ri为P-D-芹菜糖，R2为上文 所描绘的1857化合物的脂肪酷基部分，及R3为H(1857化合物VIA) ; (ii)R1为P-D-芹菜 糖，R2为H，及R3为上文所描绘的1857化合物的脂肪酷基部分（1857化合物V1B) ; (iii) Ri为P-D-木糖，R2为上文所描绘的1857化合物的脂肪酷基部分，及R3为H(1857化合物 V2A);或（iv)Rl为P-D-木糖，R2为H，及R3为上文所描绘的1857化合物的脂肪酷基部分 (1857化合物V2B)。总之，1857化合物VIA、1857化合物V1B、1857化合物V2A及1857化合 物V2B称为"1857化合物混合物"。 阳071]表2概述1857化合物的官能基及1857化合物混合物中的各1857化合物的摩 尔％。 柳巧表2
[0073]
[0074]
阳0巧]0PT-821皂素包含W下化合物中的一种或多种：（i) 1857化合物VIA; (ii) 1857化 合物V1B; (iii) 1857 化合物V2A; (iii) 1857 化合物V2B; (iv) 1989 化合物VIA; (V) 1989 化 合物V1B; (vi) 1989化合物V2A;或（vii) 1989化合物V2B。0PT-821皂素中的1857化合物 混合物与1989化合物混合物的百分比在如下范围内：
[0076] (i)约1摩尔％至约15摩尔％的1857化合物混合物；及
[0077] (ii)约85摩尔％至约99摩尔％的1989化合物混合物。
[0078] 所有摩尔％均可W0. 1 %增量变化（例如约87%至约90%、约90. 5%至约97%、 约3. 5%至约11 %、约10%至约14% )。
[0079] 1989化合物混合物可包含约60-70摩尔％的1989化合物VIA;约1-5摩尔％的 1989化合物V1B;约30-40摩尔％的1989化合物V2A;及约0. 1-3摩尔％的1989化合物 ￥28。所有摩尔％均可^〇.1增量变化（例如65%、2.5%、35.6%)。
[0080] 1857化合物混合物可包含约60-70摩尔％的1857化合物VIA;约1-5摩尔％的 1857化合物V1B;约30-40摩尔％的1857化合物V2A;及约0. 1-3摩尔％的1857化合物 ￥28。所有摩尔％均可^〇.1增量变化（例如67%、1.5%、33.9%)。
[0081] 在另一实施例中，实质上纯的0PT-821是自奎拉雅属皂树粗提取物纯化，其中该 0PT-821的特征为当在具有5ym粒度、1贫〇A孔隙、4.6mmIDX25cmL的对称性C18管柱 的逆相HPLC上使用包含A:B为95% :5%至75% :25%的移动相的溶离程式分析11分钟 时，单个主峰占层析图中除溶剂峰外所有峰的总面积的90%或更多，其中移动相A为含有 0.1%S氣乙酸的蒸馈水且移动相B为含有0.1%S氣乙酸的乙腊，流动速率为Iml/min。
[0082] 在一个实施例中，医药组合物包含式（I)化合物
[0083]
[0084]其中， 阳0财 Ri为0 -D-芹菜糖或0 -D-木糖；及
[0086] R2及R3独立地为H、烷基、或
[0087]
(1857化合物的脂肪酷基部分），
[0088] 及医药学上可接受的载剂。
[0089] 疫苗可包含碳水化合物抗原或其免疫原性片段及0PT-821皂素。在另一实施例 中，疫苗包含选自GloboH、SSEA-3、SSEA-4、抓-4或其混合物的碳水化合物抗原、DT及 0PT-821皂素。在又一实施例中，疫苗包含碳水化合物抗原或其免疫原性片段；载体蛋白及 0PT-821皂素。载体蛋白的非限制性实例包括类毒素蛋白及非类毒素蛋白（诸如KLH)。
[0090] 类毒素蛋白
[0091] 与碳水化合物抗原结合的类毒素蛋白可为白喉毒素值T)或破