具有较高碳水化合物抗原密度的疫苗及新颖皂素佐剂的制作方法
【专利说明】具有较高碳水化合物抗原密度的疫苗及新颖皂素佐剂
[0001] 相关申请案的交叉引用
[0002] 本申请案主张2013年1月4日申请的美国申请案第61/748, 880号的权益，该美 国申请案的全部掲示内容W引用的方式并入本文中。 阳00引先前技术
[0004] 癌症疫苗经设计藉由免疫系统强化身体天然保护自身的能力来治疗癌症。其始终 代表一种极具吸引力的治疗方法，尤其鉴于在癌症治疗中习知的手术、福射及化学疗法存 在许多缺点。然而，由于癌症碳水化合物抗原的低免疫原性及许多合成疫苗主要诱发IgM 及较低程度的IgG抗体，该癌症疫苗的有效性仍为低的。已探索不同的方法（诸如使用佐 剂）W促进免疫识别及活化。 阳〇化]目前仍存在一种未满足的需要，即开发一种具有改良免疫反应（尤其为IgG反应） 的癌症疫苗及有效佐剂。本发明提供针对碳水化合物抗原的疫苗及佐剂W满足此等及其他 需要。
【发明内容】
[0006] 在一个实施例中，本发明掲示一种包含碳水化合物抗原或其免疫原性片段及类毒 素蛋白的疫苗，其中碳水化合物抗原与类毒素蛋白的比率在5:1至39:1范围内，其中该比 率表示碳水化合物抗原与类毒素蛋白的分子数比。已发现碳水化合物抗原与类毒素蛋白的 比率在5:1至39:1范围内的疫苗的IgG产量相比于碳水化合物抗原与类毒素蛋白的比率 等于或小于4:1的疫苗的IgG产量较高。
[0007] 本发明一个实施例提供经分离的式（I)化合物
[0008]
[0009] 或其医药学上可接受的盐；
[0010] 其中
[0011] Ri选自0 -D-芹菜糖或0 -D-木糖； 阳01引 R2及R3选自H、烷基或
[0013] 本发明另一实施例提供医药组合物，其包含式（I)化合物
[0014]
[0015] 或其医药学上可接受的盐，
[0016] 其中
[0017] R堪选自P-D-芹菜糖或P-D-木糖； 阳0化]R2及R3是选自H、烷基或
[0019] 及医药学上可接受的载剂。
[0020] 本发明第S实施例提供新颖皂素佐剂0PT-821，其包含1857化合物VIA、1857化合 物V1B、1857化合物V2A及1857化合物V2B。
[0021] 本发明第四实施例提供包含碳水化合物抗原或其免疫原性片段及OPT-821皂素 佐剂的疫苗。在一个实施例中，疫苗进一步包含载体蛋白。已发现含有0PT-821皂素佐剂 的疫苗的IgG产量、抗体依赖性细胞介导的细胞毒性（ADCC)及/或补体依赖性细胞毒性 (CDC)活性相比于不含0PT-821皂素佐剂的疫苗较高。
[0022] 本发明亦是关于用于W下的方法：（i)抑制癌细胞，其包含向有需要的个体投与 有效量的本文所述的疫苗，其中癌细胞受到抑制；及（ii)诱发免疫反应，其包含向有需要 的个体投与有效量的本文所述的疫苗。
[0023] 本发明亦掲示包含本文所述的疫苗及医药学上可接受的赋形剂或载剂的医药组 合物。
[0024] 含有此等术语的陈述应理解为不限制本文所述的主题或不限制W下专利申请专 利范围的涵义或范畴。此专利涵盖的本发明的实施例藉由W下申请专利范围而非此发明内 容限定。此
【发明内容】
为本发明的各种态样的高层次综述且引入一些进一步描述于W下具体 实施方式部分中的概念。此
【发明内容】
并不意欲确定所主张的主题的关键或基本特征，亦不 意欲孤立使用W确定所主张的主题的范畴。主题应参照整个说明书的适当部分、任一或所 有图式及各申请专利范围来理解。
[0025] 当阅读W下附图及【具体实施方式】时，本发明将变得更加清楚。
【附图说明】
[00%] W下图式详细描述本发明的说明性实施例：
[0027] 图1A说明W下组合物第24天的抗GloboHIgG效价的柱状图：GloboH/KLH/ OPT-821 皂素、GloboH/DT/0PT-821 皂素、GloboH/DT/C：M及GloboH/KLH/C34。
[0028] 图IB为说明图lA中的组合物历经24天时期的抗GloboHIgG效价的线绘图。
[0029] 图2为显示历经24天时期在小鼠中G2疫苗（GloboH/DT(8:1))、G3疫苗（Globo H/DT(8:1)/OPT-821)及G4 疫苗（GloboH/DT(24:1)/OPT-821)的活体内ADCC及CDC活性 的柱状图组合。图2A说明ADCD原始资料，图2B说明ADCD标准化资料，图2C说明CDC原 始资料且图2D说明CDC标准化资料。
[0030] 图3A及图3B为说明W下组合物历经24天时期的总体IgM及IgG效价的线绘图： G1(GloboH/KLH/0PT-821)、G2(GloboH/DT(3:1) /OPT-821)、G3 及G4(GloboH/DT(8:1) / OPT-821)、G5(GloboH/DT(8:1)/C34)、G6(GloboH/KLH/C34)、G7(GloboH/DT(16:1)/ OPT-821)及G8(PBS)。
[0031] 图4为显示列于图3中的组合物在第10天、第17天及第24天的IgM及IgG反应 的柱状图组合：图（A)至似说明列于图3中的组合物分别在第10天、第17天及第24天 的IgM反应。图做至（巧说明列于图3中的组合物分别在第10天、第17天及第24天的 IgG反应。 阳03引图5A至图5C为OPT-821 (包含化合物1989及1857)的质谱影像。
[0033] 图6为0PT-821的层析图LC-UV影像。
[0034] 图7为0PT-821的层析图LC-MS影像组合。
【具体实施方式】
[0035] 为了清晰及迅速理解本发明，本文定义某些术语。除非另外定义，否则本文所用的 所有技术及科学术语均具有熟习本发明所属技术者通常所理解之相同含义。
[0036] 如本文所用有效量"是指疫苗或医药组合物的剂量足W减轻癌症的症状及征 候，该等症状及征候包括（但不限于）体重减轻、疼痛及肿瘤块，其可在临床上由可触知的 块状物或在放射学上经由不同的成像方法来侦测。
[0037] 术语"个体"可指患有癌症的脊椎动物或被认为需要癌症治疗的脊椎动物。个体包 括溫血动物，诸如哺乳动物，诸如灵长类动物且更佳为人类。非人类灵长类动物亦为个体。 术语个体包括经驯养动物（诸如猫、狗等）、家畜（例如牛、马、猪、绵羊、山羊等）及实验动 物（例如小鼠、兔、大鼠、沙鼠、天竺鼠等）。由此，本文中涵盖兽医用途及医学调配物。
[003引如本文所用，术语"烷基"是指直链或分支链单价控，除非另外说明，否则其含有1至20个碳原子（例如C1至C8或C1至C4)，可经取代或未经取代（本发明可包涵其他链长 度，例如21至30个）。烷基的实例包括（但不限于）甲基、乙基、正丙基、异丙基、正下基、 异下基及第=下基。
[0039] 术语"实质上纯的"意谓实质上不含通常与呈自然状态皂素缔合的化合物且展现 恒定且可重现的层析反应、溶离特征及生物活性。术语"实质上纯的"不意谓排除皂素与其 他化合物的人造或合成混合物。 W40] 本文中的所有数字均可理解为由"约"修饰。
[0041] 具有巧高碳水化合物比率的巧巧
[0042] 肿瘤相关的碳水化合物抗原通常展现不佳的免疫原性。已采用与载体蛋白结合的 碳水化合物抗原W提高该碳水化合物抗原的免疫原性。举例而言，约700个GloboH分子 与一个无毒匙孔螺血氯蛋白化LH)蛋白质结合，平均约2至4个GloboH分子与白喉毒素 值T)结合，约8个GloboH分子与牛血清白蛋白（BSA)结合，且约6个GloboH分子与破伤 风类毒素结合（美国专利第8, 268, 969号的表1)。
[0043] 本发明提供一种包含碳水化合物抗原或其免疫原性片段及类毒素蛋白的疫苗，其 中碳水化合物抗原与类毒素蛋白的比率在5:1至39:1范围内，且该比率反映碳水化合物抗 原或其免疫原性片段的分子数与类毒素蛋白分子数的比率。该疫苗比碳水化合物抗原分子 数与类毒素蛋白分子数的比率等于或小于4:1的疫苗具有更佳的免疫原性。本发明亦包 涵其他范围，包括碳水化合物抗原或其免疫原性片段的分子数与类毒素蛋白分子数的比率 为 4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1、11:1、12:1、13:1、14:1、15:1、16:1、17:1、18:1、19:1、 20:1、21:1、22:1、23:1、24:1、25:1、26:1、27:1、28:1、29:1、30:1、31:1、32:1、33:1、34:1、 35:1、36:1、37:1、38:1 或 39:1。
[0044] 在一个实施例中，类毒素蛋白为破伤风类毒素（TT)且碳水化合物-TT疫苗中碳水 化合物抗原与TT的比率在7:1至12:1范围内。
[0045] 本发明提供一种包含碳水化合物抗原或其免疫原性片段及白喉毒素值T)的疫 苗，其中碳水化合物抗原与DT的比率在5:1至39:1范围内，其中该比率反映碳水化合物抗 原或其免疫原性片段的分子数与DT分子数的比率。在另一实施例中，碳水化合物-DT疫苗 中碳水化合物抗原与DT的比率在8:1至24:1范围内。
[0046] 碳水化合物抗原的实例包括（但不限于）GloboH、阶段特异性胚胎抗原3(SSEA3) (亦称为Gb5)、阶段特异性胚胎抗原4(SSEA-4)、Gb-4、Gb-3、路易斯抗原（诸如sLe\Le\ sLe。、Le。、Le〇、多醋抗原（诸如聚唾液酸（PSA)、sTn(c)、Tn(c)、Thomsen-Friedenreich抗 原〇^似））、神经节巧脂（诸如601、602、603、海藻糖、611、611、612、613、601〇及612)。 其他碳水化合物抗原包括（但不限于）：a-半乳糖、a-甘露糖-6-憐酸盐、aA-鼠李糖、 a-GalNAc灯n)、a-NeuAc-OC肥C6H4-对畑C00C肥、化Cal-2GalPl-4GalNAcP化类型 3)、 W47]NeuAca2-8NeuAca、（NeuA