伤风类毒素灯T)。
[0092] 毒素可例如藉由用甲醒、戊二醒、UDP-二醒、过氧化物、氧处理或藉由突变（例 如使用重组方法）而失去活性。Relyveld等人，MethodsinEnzymology,93:24,1983。 Woo化ow及Levine编，"新一代疫苗"（NewGenerationVaccines),马塞尔?德 克尔公司，纽约（MarcelDekker,Inc. ,NewYork), 1989。Genth等人，Inf.and Immun.，68(3) : 1094-1101，2000。具有降低的毒性的突变型白喉毒素亦可使用重组方法产 生。美国专利第5, 085, 862号；第5, 221，618号；第5, 244, 657号；第5, 332, 583号；第 5, 358,868号；及第 5, 433, 945 号。
[0093] DT为白喉毒素交叉反应性物质值T-CRM)或白喉类毒素。DT-CRM是指突变型白 喉毒素，例如藉由突变或藉由化学改变，使得其不再具有足够的ADP-核糖基。DT-CRM的非 限制性实例包括DT-CRM30、DT-CRM45、DT-CRM176、DT-CRM197 及DT-CRM228。白喉类 毒素为经甲醒失活的白喉毒素。DT可市售或可藉由此项技术中已知的方法制备，诸如重组 DNA技术，如美国专利第5, 614, 382号中所描述，其内容W全文引用的方式并入本文中。
[0094] 本文所述的疫苗的碳水化合物抗原可藉由美国专利第8, 268, 969号中所描述的 合成方法经由对硝基苯基连接子与载体蛋白共价键结，该美国专利的内容W全文引用的方 式并入本文中。
[0095] 本发明的疫苗可诱发W下一或多个活性：相比于IgM效价更高的IgG效价、更高的 补体依赖性细胞毒性（CDC)活性及/或更高的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性（ADCC)活 性。在另一实施例中，疫苗诱发W下一或多个细胞：自然杀手细胞、CD4叮淋己细胞或CD8+T 淋己细胞。其他可量测的免疫参数，包括（但不限于）T辅助细胞活化。
[0096] 本发明亦提供包含本文所述的疫苗及医药学上可接受的媒剂、赋形剂或载剂的医 药组合物。合适的媒剂为例如水、生理食盐水、右旋糖、甘油、乙醇或其类似物及其组合。另 夕F，媒剂可含有其他赋形剂，诸如湿润剂或乳化剂、抑缓冲剂或佐剂。医药学上可接受的载 剂可含有用于例如稳定化或提高或降低本发明的医药组合物的吸收或清除速率的生理学 上可接受的化合物。生理学上可接受的化合物可包括例如碳水化合物（诸如葡萄糖、薦糖 或聚葡萄糖）、抗氧化剂（诸如抗坏血酸或教脫甘肤）、馨合剂、低分子量蛋白质、清洁剂、月旨 质体载剂或其他稳定剂及/或缓冲剂。赋形剂可为非离子界面活性剂、聚乙締化咯晚酬、人 类血清白蛋白、氨氧化侣、具有麻醉作用的药剂及各种未经修饰及衍生化的环糊精。更佳 地，非离子界面活性剂可包括聚山梨醇醋20、聚山梨醇醋40、聚山梨醇醋60及聚山梨醇醋 80。较佳的聚乙締化咯晚酬可为PlasdoneC15(医药级的聚乙締化咯晚酬）。具有麻醉作用 的药剂较佳为节醇。其他生理学上可接受的化合物包括湿润剂、乳化剂、分散剂或防腐剂。 参见例如《雷明顿的药学科学KRemington's化armaceuticalScience)第21版，Mack出 版公司，伊斯顿，宾夕法尼亚州巧aston,化.）（"Remington's")。本发明的医药组合物亦 可包括辅助物质，诸如药理学药剂、细胞激素或其他生物反应调节剂。包含该赋形剂或载剂 的医药组合物藉由熟知的习知方法调配。
[0097] 疫苗可调配用于W下投与途径：肌肉内、皮内、口服、经皮、经鼻、经颊、经直肠、经 阴道、藉由吸入或藉由皮下投与。其他投与模式可为适用的，只要可诱发令人满意的免疫原 性即可。
[0098] 本发明的医药组合物可经制备成可注射剂，呈液体溶液或悬浮液形式，或呈适合 于在注射之前溶解或悬浮于液体媒剂中的固体形式。医药组合物亦可W固体形式制备，乳 化或将活性成分囊封于用于持续递送的脂质体媒剂或其他微粒载剂中。举例而言，医药组 合物可呈W下形式：油乳液、油包水乳液、水包油包水乳液、位点特异性乳液、长期滞留乳 液、乳化胶、微乳液、奈米乳液、脂质体、微粒、微球体、奈米球、奈米粒子及各种天然或合成 聚合物，诸如不可再吸收的不透性聚合物（诸如乙締乙酸乙締醋共聚物及Hytrel彩共聚 物）、可膨胀聚合物（诸如水凝胶）或可再吸收性聚合物（诸如胶原蛋白）及某些聚合酸或 聚醋（诸如用于制造可再吸收性缝合线者），其允许疫苗持续释放。
[0099] 本发明化合物的医药学上可接受的盐及其生理学功能衍生物包括源自适当碱 (诸如碱金属（例如钢、钟）、碱±金属（例如巧、儀）、锭及NX4+(其中X为C1-C4烷基））的 盐。胺基的医药学上可接受的盐包括W下各酸的盐：有机簇酸，诸如酒石酸、脂族、环脂族、 芳族、杂环、簇酸及横酸类别的有机酸，诸如甲酸、葡糖醒酸、苹果酸、顺下締二酸、反下締二 酸、丙酬酸、天冬胺酸、教胺酸、苯甲酸、邻胺基苯甲酸、甲横酸、水杨酸、径基苯甲酸、苯乙 酸、杏仁酸、恩波酸（双径糞酸）、
[0100] 甲烧横酸、乙烧横酸、苯横酸、泛酸、甲苯横酸、2-径基乙烧横酸、对胺基苯横酸、硬 脂酸、褐藻酸、径基下酸、环己基胺基横酸、半乳糖二酸及半乳糖醒酸及其类似物、乳糖酸、 反下締二酸及下二酸；有机横酸，诸如甲烧横酸、乙烧横酸、径乙横酸、次苄基横酸及对甲苯 横酸；及无机酸，诸如盐酸、氨漠酸、氨舰酸、硝酸、碳酸、硫酸、胺横酸及憐酸及其类似物。具 有径基的化合物的医药学上可接受的盐由该化合物的阴离子组合合适的阳离子（诸如化\ 畑/或NX/ (其中X为例如C1-C4烷基）、化"、Li\Mg"或IT及锋）或由伯胺、仲胺、叔胺、 环胺、N,N' -二苯甲基乙二胺、氯普鲁卡因（chloroprocaine)、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、葡 甲胺（N-甲基还原葡糖胺）及普鲁卡因（procaine)及其类似物制成的有机盐组成。所有 此等盐均可藉由习知方法自对应的化合物制备，例如藉由使适当酸或碱与呈游离形式的化 合物反应。
[0101] 诱发免巧巧麻/抑制痛细胸的方法 阳102]本发明的另一态样是关于诱发免疫反应的方法，其包含向有需要的个体投与有效 量的本文所述的疫苗。免疫反应包括（但不限于）NK细胞反应、ADCC及CDC活性及IgM及 IgG产生。
[0103] 在又一态样中，本发明提供抑制癌细胞的方法，其包含向有需要的个体投与有效 量的本文所述的疫苗。在一个实施例中，癌症是选自乳癌、肺癌、食道癌、直肠癌、胆管癌、肝 癌、颊癌、胃癌、结肠癌、鼻咽癌、肾脏/肾癌、脑肿瘤、前列腺癌、卵巢癌、子宫颈癌、子宫内 膜癌、膜脏癌、睾丸癌、膀脫癌、头颈癌、口腔癌、神经内分泌癌、肾上腺癌、甲状腺癌、骨癌、 皮肤癌（例如基底细胞癌、鱗状细胞癌或黑素瘤）。在另一实施例中，癌症为表现GloboH 的癌症。表现GloboH的癌症的非限制性实例包括乳癌、肺癌、胃癌、结肠癌、膜脏癌、前列 腺癌、卵巢癌及子宫内膜癌。由疫苗所产生的抗体（诸如抗GloboH抗体）固有地抑制表 现GloboH的癌症。
[0104] 在某些实施例中，有效量的疫苗用于诱发所需的免疫效应，诸如在个体中针对特 异性碳水化合物抗原（例如GloboH)刺激IgG产生。疫苗或医药组合物的有效量或剂量 可视碳水化合物抗原的量、所用佐剂的类型、投与模式及待治疗个体的年龄、体格及病状而 变化。诱发免疫原性所需要的疫苗或医药组合物的确切量将由医师确定。 阳105] 疫苗可W具有或不具有一或多个按特定时间间隔投与加强剂量的单独剂量（stat dose)，W达成在数月至数年间长期免疫保护性效应。投与频率可视多种因素中的任一者而 变化，例如症状严重程度、所需的免疫保护程度、医药组合物是否用于预防或治愈目的等。 举例而言，在一个实施例中，根据本发明的医药组合物每月一次、每月两次、每月=次、每隔 一周（qow)、每周一次（qw)、每周两次化iw)、每周S次（tiw)、每周四次、每周五次、每周六 次、每隔一天（qod)、每天（qd)、一天两次（qid)或一天S次（tid)投与。疫苗亦可与其他 习知疗法同时或依序投与，诸如化学疗法、祀把疗法或用于癌症治疗的祀把肿瘤相关的碳 水化合物抗原的抗体。
[0106] 本发明进一步藉由W下实例说明，该等实例出于论证而非限制的目的提供。根据 本发明，熟习此项技术者应了解，在不背离本发明的精神及范畴的情况下可对所掲示的特 定实施例作出许多改变且仍获得相同或类似结果。 阳107] 实例1 :制备具有较高碳水化合物/毒素蛋白比率的疫苗及提取0PT-821
[0108] GloboH与KLH或DT结合，此结合根据此项技术中已知的方法，例如如美国专利第 6, 544, 952号或第8, 268, 969号中所描述，该等专利的内容W全文引用的方式并入本文中。 所得疫苗包含GloboH:DT(GloboH与DT的分子比率=2-4:1)。
[0109] 产生糖结合物的一般程序
[0110] 糖结合物如下制造： 阳 111]
[0112] 将BSA、DT-CRM197及破伤风类毒素（国光生物科技股份有限公司（Adimmune)，台 湾）溶解于lOOmM憐酸盐缓冲液抑7. 2中（约5mg/ml)，且向溶液中添加30至40当量的 GloboH半醋35。在室溫下轻轻揽拌混合物2地。随后用去离子水稀释该混合物且针对去 离子水的5次改变进行透析。随后将溶液冻干成白色粉末。所获得的GloboH-蛋白质结合 物可藉由MLDI-T0F分析表征W测定碳水化合物结合率。41 (GH-BSA)的MLDI-T0F实验值 为 76029,42 (GH-DT-CRM197)实验值为 62138,43 (細-TT)实验值为 162902,44 (細-BaMV)未 测定。MLDI-T0FMS分析糖结合物。糖结合物及主要载体蛋白可用d地2〇复原（约lyg/ yl)。基质（芥子酸）用1:1乙腊及去离子水新鲜制备，使最终基质浓度为lOmg/ml，包括 0.1%TFA。轻轻装载及混合基质溶液与糖结合物，随后空气干燥板。在量测之前使用牛血 清白蛋白进行必不可少的校准。各糖结合物及主要蛋白质样品在线性正模式下侦测。平均 分子量允许计算结合在载体蛋白上的碳水化合物分子的平均数