从低醇皂刺中提取新环烯醚萜化合物和其他化合物的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于天然产物提取分离技术领域，主要涉及一种从低醇皂刺中提取新环烯 醚萜化合物和其他化合物的方法。
【背景技术】
[0002] 皂刺，又名皂角刺（分Wet/iteiae)是双子叶豆科皂角属植物皂荚 s/neasisLam.)的干燥棘刺。多年生灌木，为我国民间传统的中药材，药书《本 草纲目》记载皂角刺具有消肿解毒、化脓杀虫的功效，广泛分布在我国江苏、湖北、河南、河 北、四川及东北等地区，一直以来皂角刺在中国、日本和韩国等东南亚地区，广泛用于治疗 中风、头疼、哮喘和疥疮等各种疾病。现代药理研究发现皂角刺还具有一定的抗菌、抗癌的 功效。据文献报道皂角刺中主要化学成分为黄酮、皂苷、酚类、三萜、氨基酸、木质素及糖类 等。尽管如此，皂角刺药用物质基础的研究仍然有待深入的研究，尤其随着现代分离手段和 分析测试技术的快速发展，一些微量的活性物质和成份仍在不断地被探索和揭示。
【发明内容】
[0003] 为解决上述技术问题，本发明提供一种从低醇皂刺中提取新环烯醚萜化合物和其 他化合物的方法，该方法能够保证皂角刺中的醚和内酯等化学不稳定活性成分被有效的提 取分离出来，不会发生化学键断裂或结构的变化。
[0004] 本发明所采用的技术方案是：一种从低醇皂刺中提取新环烯醚萜化合物和其他化 合物的方法，包括以下步骤： 步骤一、取皂刺原材料，在室温下阴干后粉碎，得到皂刺粉末，备用； 步骤二、将步骤一得到的皂刺粉末加入到体积百分比为50-65%的乙醇溶液中，室温下 浸泡3-5d，浸泡结束后分离得到提取液，再重复浸泡和分离操作2-3次，合并提取液，备用； 然后将提取液在0-4°C条件下静置18-26h，静置结束后过滤，并将滤液减压浓缩，得到低醇 浸膏，备用； 步骤三、向步骤二得到的低醇浸膏中加入其重量7-10倍的水，搅拌使低醇浸膏溶解完 全，得到混合溶液，备用；然后依次用石油醚、乙酸乙酯进行萃取，得到剩余水相，再将剩余 水相减压浓缩，得到上料样品，备用；将上料样品采用大孔树脂柱色谱法进行分离，上样后 采用不同浓度的乙醇溶液进行梯度洗脱，收集洗脱剂为体积百分比为50-60%乙醇溶液的 馏分，并将该馏分浓缩，得到浓缩浸膏，备用； 步骤四、将步骤三得到的浓缩浸膏采用硅胶柱色谱法进行分离纯化，上样、梯度洗脱， 洗脱得到的馏分经TLC检测、合并，得到馏分段1-30,备用； 步骤五、将步骤四得到的馏分段2采用硅胶柱色谱法进行分离纯化，上样后依次用体 积比为30:1、20:1、10:1、5:1和1 :1的乙酸乙酯-甲醇溶液进行洗脱，收集洗脱剂的体积比 为10:1的馏分段，浓缩得到黄色胶状透明物，即为化合物I; 步骤六、步骤四得到的馏分段13-15,均有固体析出，合并、过滤，得到的固体进一步采 用凝胶色谱法进行等度洗脱纯化，纯化的流动相为体积比为1:1的三氯甲烷-甲醇溶液，流 速为6-7滴/min，得到的馏分经减压浓缩，得到淡黄色粉末，即化合物II; 步骤七、步骤四得到的馏分段9有固体析出，过滤后进行重结晶，得到浅黄色固体，即 化合物III ; 所述化合I、II和III的结构式依次为：
[0005] 进一步优化，步骤三所述的大孔树脂柱色谱法依次采用体积百分比为10%、20%、 30%、40%、50%和60%的乙醇溶液进行梯度洗脱。
[0006] 进一步优化，步骤四所述的硅胶柱色谱法上样后依次用体积比为1:0、10:1、9:1、 5:1、2:1、1:1、1:2、1:5和0:1的乙酸乙酯-甲醇溶液以及体积比为7:3的甲醇水溶液进行 洗脱。
[0007] 进一步优化，步骤五的硅胶柱色谱法中，拌样硅胶粒径为100-200目，装柱硅胶粒 径为200-300目。
[0008] 进一步优化，步骤七过滤得到的固体采用氯仿和甲醇溶剂进行重结晶。
[0009] 与现有技术相比，本发明至少具有下述优点及有益效果： 本发明提供的方法首次从皂角刺中提取出新的环烯醚萜化合物即化合物I，并首次发 现并提取了化合物II和III，基于化学结构，这三种成分属于醚类、内酯类和氧苷类，都具有 相对的化学不稳定性，尤其是在空气中就可能分解。本发明采用50-65%的低醇在室温提取 的方法，能够保证皂角刺中含氧化合物如醚类、酮类和内酯类化合物不发生分解。本发明用 低醇冷浸提取，结合色谱法以及其中特定比例的溶剂和参数，使所分离得到的皂角刺中的 环烯醚萜类和香豆素内酯结构等不稳定活性成分被有效的提取分离出来，不会因提取方法 的影响发生化学键断裂或结构的变化。本发明研究聚焦在皂角刺低醇提取物的有效成分的 分离与纯化，为将来系统筛选并深入研究皂角刺中化学成分的生物活性提供极具科学理论 的研究基础和重要开发前景。
【具体实施方式】
[0010] -种从低醇皂刺中提取新环烯醚萜化合物和其他化合物的方法，包括以下步骤： 步骤一、取皂刺原材料，在室温下阴干后粉碎，得到皂刺粉末，备用； 步骤二、将步骤一得到的皂刺粉末加入到体积百分比为50-65%的乙醇溶液中，室温下 浸泡3-5d，浸泡结束后分离得到提取液，再重复浸泡和分离操作2-3次，合并提取液，备用； 然后将提取液在0-4°C条件下静置18-26h，静置结束后过滤，并将滤液减压浓缩，得到低醇 浸膏，备用； 步骤三、向步骤二得到的低醇浸膏中加入其重量7-10倍的水，搅拌使低醇浸膏溶解完 全，得到混合溶液，备用；然后依次用石油醚、乙酸乙酯进行萃取，得到剩余水相，再将剩余 水相减压浓缩，得到上料样品，备用；将上料样品采用大孔树脂柱色谱法进行分离，上样后 依次采用体积百分比为10%、20%、30%、40%、50%和60%的乙醇溶液进行梯度洗脱，收集洗脱 剂为体积百分比为50-60%乙醇溶液的馏分，并将该馏分浓缩，得到浓缩浸膏，备用； 步骤四、将步骤三得到的浓缩浸膏采用硅胶柱色谱法进行分离纯化，上样后依次用体 积比为1:0、10:1、9:1、5:1、2:1、1:1、1 :2、1:5和0:1的乙酸乙酯-甲醇溶液以及体积比为 7:3的甲醇水溶液进行洗脱，洗脱得到的馏分经TLC检测、合并，得到馏分段1-30，备用； 步骤五、将步骤四得到的馏分段2采用硅胶柱色谱法进行分离纯化，其中拌样硅胶粒 径为100-200目，装柱硅胶粒径为200-300目，上样后依次用体积比为30:1、20:1、10:1、5:1 和1 :1的乙酸乙酯-甲醇溶液进行洗脱，收集洗脱剂的体积比为10:1的馏分段，浓缩得到 黄色胶状透明物，即为化合物I; 步骤六、步骤四得到的馏分段13-15,均有固体析出，合并、过滤，得到的固体进一步采 用凝胶色谱法进行等度洗脱纯化，纯化的流动相为体积比为1:1的三氯甲烷-甲醇溶液，流 速为6-7滴/min，得到的馏分经减压浓缩，得到淡黄色粉末，即化合物II; 步骤七、步骤四得到的馏分段9有固体析出，过滤后采用氯仿和甲醇溶剂进行重结晶， 得到浅黄色固体，即化合物III; 所述化合I、II和III的结构式依次为：
[0011]本发明分离得到的化合I、II和III的结构鉴定 本发明分离的3个化合物经过2DNMR分析和化学分析鉴定，并对比相关参考文献进行 结构鉴定和表征，上述3个化合物的NMR数据详细归属分别如下： 化合物I:黄色胶状透明物。1H-NMR(400MHz，DMS0)数据显示：羅：0.83(d，6H)， 0.87(d, 6H), 1.03-1.05(m,mH), 2.02 (s, 3H), 2.04(s, 1H,H-5 ), 2.52 (m, 1H,H-6 ), 2. 14 (m, 1H,H-9) ?其中 13C-NMR(DEPT) (100MHz，DMS0)数据归属如表 1所示，该化合物被推断为7, 8-[双二环单贴]-4-羧-1，6-二羟环烯醚单萜，是首次从 阜角刺中分离得到的新的环稀醚砲类化合物(数据归属参考文献QuangDN,Hashimoto T,TanakaM.etal.Phytochmistry, 2002, 60, 505. )〇
[0012] 表1.化合物I的1HNMR和13CNMR数据归属
化合物II:淡黄色粉末（DMSO)。其 1H-NMR(400MHz,DMS0)和 13C-NMR(100MHz，DMS0)数据归属如表2所示，以下数据与文献（ZhouLG,LiD,GouJ，etal. AntibacterialphenoliccompoundsfromthespinesofGleditsiasinensisLam. [J].Naturalproductresearch, 2007，21 : 283-291)报道基本一致，故鉴定化合物为 8-0-葡萄糖基-5, 4、7-三羟基黄酮，该化合物为活性黄酮苷化合物，也是首次从皂角刺植 物中提取的化合物。
[0013] 表2.化合物II的1HNMR和13CNMR数据鉴定归属*
化合物III:浅黄色固体（MeOHXiH-NMR(400MHz,MeOD):導：7.86 (1H,d,J=9.44, H-3), 6.20 (1H,d,J=9.44,H-4), 7.11 (1H,s,H-5), 6.77 (1H,s,H-3'），3.89 (3H,s, -0CH3), 3.85 (1H,s, -OH); 13C-NMR(100MHz,MeOD) 161.1 (C-2), 112.9 (C-3), 147.8 (C-4), 116.6 (C-5), 110.1 (C-6) , 151.2 (C-7), 145.9 (C-8), 152.1 (C-9), 105.2 (C-10), 148.0 (C-2'），112.0 (C-3'），56.4 (-0CH3)。以上数据 与文南犬（HarkerS,RazdanTK,ffaightE.Setal.Steroids,chromoneandcoumarins fromangelicaofficinalis,Phytochemistry,1984,23(2): 419-426.)中报道的基本 一致，故鉴定化合物III为2'-羟基-8-甲氧基呋喃香豆素，也是首次从皂角刺植物中提取的 化合物。
[0014] 为使本发明的内容更明显易懂，以下结合具体实施例，对本发明进行详细描述。
[0015] 实施例1: 一种从低醇皂刺中提取新环烯醚萜化合物和其他化合物的方法，包括以下步骤：