含类胡萝卜素的组合物的制造方法及含类胡萝卜素的组合物的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种源自微生物的含有邮青素的含类胡萝h素的组合物的制造方法。 另外，本发明设及一种源自微生物的针状或大致针状结晶的含有邮青素的含类胡萝h素的 组合物。
【背景技术】
[0002] 类胡萝h素为广泛存在于自然界的天然色素，为从黄色到红色或紫色的多締色 素。邮青素为发现的天然类胡萝h素的1种，除W游离的状态或醋的形式存在之外，与蛋白 质结合而W各种色素蛋白质的形式存在。
[0003] 邮青素被广泛用作鱼类、鸡蛋的着色剂。另外，也被确认为食品添加物，在油脂加 工食品、蛋白质性食品、水溶液食品等中广泛使用。并且，由于对由自由基诱发的脂质的过 氧化的抗氧化活性、高达a-生育酪的数百倍的单线态氧消除作用等，期待邮青素作为有 效利用了其强力抗氧化活性的功能性食品、化妆品、或医药品的用途。
[0004] 邮青素广泛分布在娃鱼、縛鱼、觸等鱼类、蟹、邮、憐邮等甲壳类等自然界，同 时也可通过属于±壤杆菌（Agrobacterium)属、短杆菌度revibacterium)属、副球菌 (Paracoccus)属、短波单胞菌度revundimonas)属、红色细菌巧;ryt虹obacter)属的细菌 类、红球藻化aematococcus)属绿藻类、红法夫（Phaffia)属酵母类等微生物生产。邮青素 或玉米黄质等类胡萝h素利用化学合成法工业性生产，但从安全性的观点出发，要求天然 物来源的邮青素。
[0005] 从运样的背景出发，多有如下报道：特别是含有适于大量生产的来源于绿藻类或 酵母类等微生物的含有邮青素的类胡萝h素类的制造方法。但是，绿藻类或酵母类不仅类 胡萝h素的生产率低，而且具有坚固的细胞壁，因此，难W对源自培养物的类胡萝h素进行 萃取。
[0006] 另一方面，属于副球菌属的细菌具有不仅类胡萝h素的生产率高、增殖速度大，且 类胡萝h素的萃取容易等优点。
[0007] 作为属于副球菌属的邮青素生产菌株的例子，已知有E-396株（阳RMBP-4283 : 1993年4月27日（原保藏日）、独立行政法人产业技术综合研究所专利生物保藏中屯、（日 本茨城县筑波市东1下目1番地1中央第6))(专利文献1)。作为由该菌株提纯而得到的 含类胡萝h素的组合物的方法如下：除使菌体与在食品等制造中从安全性的方面考虑不优 选使用的环状亲水性有机化合物接触而进行萃取处理的方法（专利文献2);使用超临界流 体萃取的方法（专利文献3);使菌体与水溶性有机溶剂、非极性溶剂及水接触而进行液液 萃取的方法（专利文献4);除此之外，还报道有使菌体与低级醇类接触进行萃取、用含水的 低级醇类对浓缩萃取液而得到的沉淀物进行清洗方法（专利文献5、6)等。
[0008] 现有技术文献 [000引专利文献
[0010] 专利文献I:日本特开平8-9964号公报
[0011] 专利文献2 :日本特开平7-242621号公报 [001引专利文献3 :日本特开平8-89280号公报
[0013] 专利文献4 :日本特开平8-253695号公报
[0014] 专利文献5 :日本特开2007-319015号公报
[0015] 专利文献6 :日本特开2009-50237号公报
【发明内容】
[0016] 发明要解决的问题
[0017] 在上述的现有技术中，分别存在如下问题：在萃取、提纯工序中使用从安全性的观 点出发不优选的溶剂；萃取、提纯的工序繁杂；需要使得到的结晶在含有水的醇等溶剂中 悬浮来进行清洗的工序；产生含有大量水的有机溶剂的废液并需要对其进行处理；难WW 高收量得到邮青素含量及类胡萝h素纯度足够高的含类胡萝h素的组合物；并且由于得到 的含类胡萝h素的组合物的结晶性状不良好而引起其操作变得繁杂等。
[0018] 本发明是鉴于上述的现有技术的问题点而完成的，其目的在于：提供一种含类胡 萝h素的组合物的制造方法及上述含类胡萝h素的组合物，所述制造方法通过使用有廉价 且安全的溶剂的简单的工序，可WW高收量得到源自微生物、含有高含量的邮青素及高纯 度的类胡萝h素、且具有良好的结晶性状的含类胡萝h素的组合物。
[0019] 用于解决问题的技术方案
[0020] 本发明人等开发了一种得到含类胡萝h素的组合物方法，尽管从生产含有邮青素 的类胡萝h素的微生物的培养物中，通过使用了低级醇运样现有已知溶剂的简单工序进行 萃取及提纯，也会得到抑制类胡萝h素的分解、且含有高含量的邮青素及高纯度的类胡萝 h素并具有良好结晶性状的含类胡萝h素的组合物。并且，通过追加促进邮青素异构化的 简单工序，成功地提高了类胡萝h素的收量。
[0021] 更具体而言，本发明具有W下的构成。
[0022] [1] -种含类胡萝h素的组合物的制造方法，其包括：
[0023] 萃取工序，使用碳原子数1~3的醇，对培养微生物而得到的培养物进行萃取处 理，所述微生物产生含有邮青素的类胡萝h素；
[0024] 分离萃取液的工序，对所述微生物和萃取液进行分离而得到萃取液；
[00巧]浓缩工序，将所述萃取液W液量计浓缩1. 25倍~20倍而得到浓缩液；
[0026] 结晶化工序，在所述浓缩液中生成含类胡萝h素的组合物的结晶；
[0027] 分离结晶的工序，将所述结晶从母液中分离而得到所述结晶，
[0028] 所述含类胡萝h素的组合物为针状或大致针状结晶，其最大长度为5ymW上，其 中，邮青素的含量相对于全部组合物为40质量％W上。
[002引 凹如山所述的含类胡萝h素的组合物的制造方法，其中，所述浓缩工序中的浓 缩倍率低于10倍。
[0030]閒如山或凹所述的制造方法，其还包括加热工序：在将所述浓缩液供于所述 结晶化工序之前，对其加热至比结晶化工序的溫度高的溫度。
[003。 W如閒所述的制造方法，其还包括添加水的工序，所述工序选自：
[0032] 在所述加热工序之前，将水加入至所述浓缩液中；
[0033] 在所述浓缩工序的进行过程中，将水加入至所述浓缩液中；W及
[0034] 在所述浓缩工序之前，将水加入至与所述微生物中分离而得到的所述萃取液中。
[003引 閒如閒或M所述的制造方法，其中，所述加热工序的溫度为40~70°C。
[0036] [6]-种含类胡萝h素的组合物，其源自产生含有邮青素的类胡萝h素的微生物， 其为针状或大致针状结晶，且最大长度为SymW上，其中，邮青素的含量W全部组合物的 质量为基准为40质量％W上。
[0037] [7]如[6]所述的含类胡萝h素的组合物，其通过山~閒中任一项所述的制造 方法进行制造。
【附图说明】
[0038]图1是表示由包含含有邮青素的类胡萝h素的干燥菌体来制造含有邮青素的含 类胡萝h素的组合物的本发明的一个实施方式的图。
[0039]图2是表示由包含含有邮青素的类胡萝h素的干燥菌体来制造含有邮青素的含 类胡萝h素的组合物的本发明的一个实施方式的图。本实施方式的特征在于，包含对萃取 液进行浓缩后通过加热处理进行的再异构化工序。
[0040]图3是表示由包含含有邮青素的类胡萝h素的干燥菌体来制造含有邮青素的含 类胡萝h素的组合物的本发明的一个实施方式的图。本实施方式包括在萃取液浓缩后且加 热处理前添加水的工序。
【具体实施方式】
[0041] W下，参照优选的实施方式的例子对本发明具体地进行说明。本发明的范围并不 限制于运些说明，对于W下实施方式例子W外的例子，也可在不损害本发明的主旨的范围 内适当变更来实施。
[0042] 本实施方式中邮青素的含量相对于全部组合物为40质量％ ^上、最大长度为 SymW上的针状或大致针状结晶的含类胡萝h素的组合物的制造方法包含如下工序：萃 取工序，使用碳原子数1~3的醇，对培养微生物而得到的培养物进行萃取处理，所述微生 物生产含有邮青素的类胡萝h素；分离萃取液的工序，对所述微生物和萃取液进行分离而 得到萃取液；浓缩工序，将所述萃取液W液量计浓缩1. 25倍~20倍而得到浓缩液；结晶化 工序，在所述浓缩液中生成含类胡萝h素的组合物的结晶；分离结晶的工序，将所述结晶从 母液中分离而得到所述结晶。
[0043] 通过本实施方式的制造方法而得到的含类胡萝h素的组合物W全部组合物的质 量为基准，优选含有邮青素40质量％ ^上、更优选50质量％ ^上、最优选55%W上。
[0044] 另外，上述组合物为针状或大致针状结晶，其最大长度超过2ym，优选为SymW 上，更优选为7ymW上，最优选为IOymW上。另外，运些结晶长度可W未必一致，例如可 化含有3ym~10ym的针状或大致针状结晶。在此，结晶的最大长度是指：在显微镜等将 对象物放大来观察的装置的视野中，最大的结晶长度。
[0045][含类胡萝h素的组合物的生产、萃取及从菌体的分离]
[0046](生产类胡萝h素的微生物及其培养）
[0047] 作为本实施方式的制造方法中产生构成培养物的类胡萝h素的微生物，只要是生 产含有邮青素的类胡萝h素的微生物即可，没有任何限定，可W使用±壤杆菌属细菌、短杆 菌属细菌、副球菌属细菌、短波单胞菌属细菌、赤细菌属细菌、红球藻属藻类、红法夫属酵母 等。
[0048] 在运些微生物中，从增殖速度的快慢、类胡萝h素的生产率的观点出发，优选对应 于16S核糖体RNA的DNA的碱基序列为与序列号1中记载的碱基序列实质上相同的细菌。 实质上相同是指：考虑DNA的碱基