58] 用于根瘤菌常规培养的培养基是YMA(Yeast-Mannitol-Agar)，即酵母粉-甘露 醇-琼脂培养基。本发明使用的DM培养基与YMA培养基的差别在于碳源和氮源种类不同， 在DM培养基中以蔗糖为碳源，在YMA培养基中以甘露醇为碳源。
[0059] 所述的无机酸选自硫酸、盐酸或磷酸；所述的无机碱选自氢氧化钠、氢氧化钾、碳 酸钠或碳酸氢钠。
[0060] 在本发明中所使用的无机酸是无机酸水溶液，无机碱是无机碱水溶液。所述的无 机酸或无机碱水溶液的浓度通常是〇. 1-2. 0N。
[0061] 优选地，所述的液体DM培养基是由1.8~2. 2克酵母膏、9~11克蔗糖、1.8~ 2. 2克硝酸钾、0. 45~0. 55克磷酸氢二钾、0. 45~0. 55克磷酸二氢钾与0. 14~0. 16克氯 化钠制备得到的。
[0062] 更优选地，所述的液体DM培养基是由2克酵母膏、10克蔗糖、2克硝酸钾、0. 5克磷 酸氢二钾、〇. 5克磷酸二氢钾与0. 15克氯化钠制备得到的。
[0063] 所述的液体DM培养基在采用常规灭菌处理后可以用于其菌株培养。
[0064] B、固体DM培养基制备
[0065] 按照每升液体DM培养基为18~20克琼脂，往步骤A制备得到的液体DM培养基 加入琼脂，加热至100°C使其琼脂溶解，然后在温度40°C下进行冷却，使其DM培养基成为固 体状态，于是得到所述的固体DM培养基。
[0066] 固体DM培养基的相关情况与液体DM培养基相同，在此不再赘述。
[0067] C、菌株活化
[0068] 将保存于温度4 °C冰箱中在固体DM培养基斜面上的菌株CGMCCNo. 11265转接到新 鲜配制的固体DM培养基平板上，划线出单菌落，然后在温度4°C的冰箱中保存待用。
[0069] D、根瘤菌培养
[0070] 用灭菌接种环从步骤C的固体DM培养基平板上挑取两环单菌落，接种到150ml灭 菌液体DM培养基中，在摇床中在温度26~30°C与转速160~200转/分钟的条件下振荡 培养70~75小时，通过常规镜检确定无杂菌便得到所述的液体根瘤菌LX-JX01菌剂。
[0071] 在这个步骤使用的摇床是目前市场上销售的产品，例如由上海合恒仪器设备有限 公司以商品名"合恒"销售的产品。
[0072] 所得到液体根瘤菌LX-JX01菌剂的根瘤菌LX-JX01含量是采用本技术领域里常规 的活菌平板计数的方法。
[0073] 测定采用本发明方法得到的液体根瘤菌菌剂含有100~200亿个/ml液体根瘤菌 LX-JX01。
[0074] 本发明还涉及采用所述制备方法制备得到的根瘤菌LX-JX01菌剂。
[0075] 本发明还涉及所述的根瘤菌LX-JX01菌剂在促进降香黄檀生长中的用途。
[0076] 本发明还涉及所述的根瘤菌LX-JX01菌剂在降香黄檀育苗中的用途。
[0077] 使用本发明菌剂进行降香黄檀育苗的方法步骤如下：
[0078] (1)用清水浸泡降香黄檀种子24小时，晾干后在苗床播种；
[0079] (2)育苗，待苗高4_5cm长出真叶后，往其根部施入本发明的根瘤菌剂；
[0080] (3)幼苗的成苗期，根瘤菌在降香黄檀根系上结瘤，形成结瘤幼苗；
[0081] (4)幼苗田间移栽；
[0082] (5)日常管理方法，确保植株成活。
[0083] 本发明人通过根瘤菌的分离、培养、鉴定等研究，找到一株高效结瘤固氮的降香黄 檀慢生型根瘤菌。试验的结果列于图1-5中，这些试验结果表明，应用本发明根瘤菌剂后， 可显著提高降香黄檀的成活率可达99%和结瘤率100%，保证其生长中获得更多的氮素营 养，促进了降香黄檀在自然环境中的健康成长，有利于在人工种植过程中达到恢复和保护 生态环境的目的。
[0084] [有益效果]
[0085] 本发明的有益效果是：本发明的根瘤菌LX-JX01能够提高降香黄檀的结瘤率，保 证其生长中获得更多的氮素营养，促进降香黄檀在自然环境中的健康成长。室内及室外试 验的结果均表明，应用本发明根瘤菌剂后，可显著提高降香黄檀的成活率和结瘤率，并促进 降香黄檀的生长，与对照幼苗相比，本发明的降香黄檀根瘤菌LX-JX01的根瘤结瘤数提高 3823 %，根瘤鲜重增加1038 %，植株地上部分干重增加47. 22 %，并且幼苗高度和植株径粗 分别提高1030%和42. 3%，促进了降香黄檀的生长。
[0086] 根瘤菌（Rhizobiumsp. )LX-JX01，该菌株已于2015年8月21日在北京市朝阳区 北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物 中心保藏，其保藏号为CGMCCNo. 11265。 【【附图说明】】
[0087] 图1是在降香黄檀种子播种60天后其植株的平均根瘤数目统计结果；
[0088] 图2是在降香黄檀种子播种60天后其植株的平均根瘤鲜重统计结果；
[0089] 图3是在降香黄檀种子播种60天后其植株的平均地上部分干重统计结果；
[0090] 图4是在降香黄檀种子播种60天后其植株的平均地上部分株高统计结果；
[0091] 图5是在降香黄檀种子播种60天后其植株的平均径粗统计结果。 【【具体实施方式】】
[0092] 通过下述实施例将能够更好地理解本发明。
[0093] 实施例1 :根瘤菌LX-JX01菌剂制备
[0094] 该实施例的实施步骤如下：
[0095] A、液体DM培养基制备
[0096] 将1克酵母膏、10克蔗糖、2克硝酸钾、0. 4克磷酸氢二钾、0. 4克磷酸二氢钾与 〇. 15克氯化钠溶于蒸馏水中，并用蒸馏水定容到1000ml;再使用1. 0N硫酸或1. 0N氢氧化 钠将其溶液的pH值调节至6. 8,得到所述的液体DM培养基；
[0097] B、固体DM培养基制备
[0098] 按照每升液体DM培养基为18克琼脂，往步骤A制备得到的液体DM培养基加入琼 月旨，加热至100°C使其琼脂溶解，然后在温度40°C下进行冷却，使其DM培养基成为固体状 态，于是得到所述的固体DM培养基；
[0099] C、菌株活化
[0100] 将保存于温度4°C冰箱中在固体DM培养基斜面上的菌株CGMCCNo. 11265转接到 新鲜配制的固体DM培养基平板上，划线出单菌落，然后在温度4°C的冰箱中保存待用；
[0101] D、根瘤菌培养
[0102] 用灭菌接种环从步骤C的固体DM培养基平板上挑取两环单菌落，接种到150ml 灭菌液体DM培养基中，在由无锡久平仪器有限公司以商品名"久平"销售的摇床中在温度 26°C与转速180转/分钟的条件下振荡培养70小时，通过常规镜检确定无杂菌便得到所述 的液体根瘤菌菌剂。
[0103] 采用本说明书中描述的活菌平板计数法测定，本实施例制备的液体根瘤菌 LX-JX01菌剂每毫升含有100亿个根瘤菌LX-JX01。
[0104] 实施例2 :根瘤菌LX-JX01菌剂制备
[0105] 该实施例的实施步骤如下：
[0106] A、液体DM培养基制备
[0107] 将3克酵母膏、8克蔗糖、1克硝酸钾、0. 6克磷酸氢二钾、0. 5克磷酸二氢钾与0. 1 克氯化钠溶于蒸馏水中，并用蒸馏水定容到l〇〇〇ml;再使用0. 1N硫酸或0. 1N氢氧化钠将 其溶液的pH值调节至7. 0,得到所述的液体DM培养基；
[0108] B、固体DM培养基制备
[0109] 按照每升液体DM培养基为20克琼脂，往步骤A制备得到的液体DM培养基加入琼 月旨，加热至100°C使其琼脂溶解，然后在温度40°C下进行冷却，使其DM培养基成为固体状 态，于是得到所述的固体DM培养基；
[0110] C、菌株活化
[0111] 将保存于温度4°C冰箱中在固体DM培养基斜面上的菌株CGMCCNo. 11265转接到新 鲜配制的固体DM培养基平板上，划线出单菌落，然后在温度4°C的冰箱中保存待用；
[0112] D、根瘤菌培养
[0113] 用灭菌接种环从步骤C的固体DM培养基平板上挑取两环单菌落，接种到150ml灭 菌液体DM培养基中，在由金坛市三和仪器有限公司以商品名"三和"销售的摇床中在温度 30°C与转速160转/分钟的条件下振荡培养75小时，通过常规镜检确定无杂菌便得到所述 的液体根瘤菌菌剂。
[0114] 采用本说明书中描述的活菌平板计数法测定，本实施例制备的液体根瘤菌 LX-JX01菌剂每毫升含有150亿个根瘤菌LX-JX01。
[0115] 实施例3 :根瘤菌LX-JX01菌剂制备
[0116] 该实施例的实施步骤如下：
[0117] A、液体DM培养基制备
[0118] 将2克酵母膏、12克蔗糖、3克硝酸钾、0. 5克磷酸氢二钾、0. 6克磷酸二氢钾与0. 2 克氯化钠溶于蒸馏水中，并用蒸馏水定容到l〇〇〇ml;再使用2. 0N硫酸或2. 0N氢氧化钠将 其溶液的pH值调节至7. 2,得到所述的液