一种用假酸浆子制备均质液体颗粒菌种的方法
【技术领域】
[0001]本发明属于液体菌种制备技术领域，具体涉及一种用假酸浆子制备均质液体颗粒菌种的方法。
【背景技术】
[0002]目前用于食用菌工厂化栽培的菌种有固体菌种和液体菌种。固体菌种栽培周期长、抗逆性比较差、污染率高、产品的质量参差不齐。常规的液体菌种虽然解决了固体菌种存在的一些问题，能明显缩短栽培周期、增强菌种活力和抗逆性、降低菌种污染率、使得菌种质量整齐度提高，但仍存在不足，例如发酵得到的液体菌种中菌球的密度、大小、均匀度等物理特性不是很理想，如果用搅拌剪切的方法将菌球打碎，得到的菌种均匀度会更理想，但是，高速搅拌粉碎和打浆的剪切力对菌种伤害极大，对菌种整体的质量影响较为严重。基于此，本发明旨在提供一种用假酸浆子制备均质液体颗粒菌种的方法，缩短培养时间，减少外力粉碎、打浆对菌种的影响，提高菌种整体质量。
【发明内容】
[0003]本发明的目的在于提供一种用假酸浆子制备均质液体颗粒菌种的方法。
[0004]本发明的目的是这样实现的:所述用假酸浆子制备均质液体颗粒菌种的方法包括种子灭菌、斜面培养基制备、接种、液体培养基制备及摇床培养工序，具体包括:
A、种子灭菌:将假酸浆子包好，灭菌备用。
[0005]B、斜面培养基制备:制备PDA斜面培养基，灭菌备用。
[0006]C、接种:将已灭菌的假酸浆子倒入灭菌后的PDA斜面培养基，平铺均匀为种子层；再将目标试管菌种接于种子层表面，于22~25 V暗黑培养6~8d，待目标菌丝裹满假酸浆子种子表面。
[0007]D、液体培养基制备:液体培养基的组成按每1000ml计为:土豆180~220g、葡萄糖18?22g、KH2P040.4-0.6g、K2HP040.4-0.6g、MgS040.4-0.6g、琼脂粉 3.2-3.8g、pH 值 6.5-7.5 ；
制成半流动的液体培养基，灭菌备用。
[0008]E、摇床培养:将裹满目标菌丝的假酸浆子种子接种到液体培养基中，于22~25°C暗黑摇床培养8~12d，即可得菌球大小一致的均质液体颗粒菌种。
[0009]本发明所述制备方法是将包裹有菌丝的假酸浆子种子接入半流动的胶状液体培养基中，在摇床上培养，形成大小相似的菌球，均匀分布在培养基中。采用本发明所述方法制备的菌种，菌球分布均匀，大小可根据培养时间控制。制种时间短，无需经过外力粉碎和打浆即可得到菌球大小适中的均质液体颗粒菌种，减少了外力对菌丝的伤害，转接后萌发快，萌发点多，缩短了菌种制作周期，减少了操作过程，降低了污染率，提高了菌种整体质量。所述制备方法适用于各种食用菌，尤其是香菇、平菇、双胞蘑菇、木耳的栽培，极具推广应用价值。
【具体实施方式】
[0010]下面对本发明作进一步的说明，但不以任何方式对本发明加以限制，基于本发明教导所作的任何变换或替换，均属于本发明的保护范围。
[0011]本发明所述用假酸浆子制备均质液体颗粒菌种的方法包括种子灭菌、斜面培养基制备、接种、液体培养基制备及摇床培养工序，具体包括:
所述种子灭菌工序是指:将假酸浆子包好，灭菌备用。
[0012]所述斜面培养基制备工序是指:制备PDA斜面培养基，灭菌备用。
[0013]所述接种工序是指:将已灭菌的假酸浆子倒入灭菌后的PDA斜面培养基，平铺均匀为种子层；再将目标试管菌种接于种子层表面，于22~25°C暗黑培养6~8d，待目标菌丝裹满假酸浆子种子表面。
[0014]所述液体培养基制备工序是指:液体培养基的组成按每100ml计为:土豆180?220g、葡萄糖 18?22g、KH2PO40.4-0.6g、K2HPO40.4-0.6g、MgSO40.4-0.6g、琼脂粉
3.2-3.8g、pH值6.5-7.5 ;制成半流动的液体培养基，灭菌备用。
[0015]所述摇床培养工序是指:将裹满目标菌丝的假酸浆子种子接种到液体培养基中，于22~25°C暗黑摇床培养8~12d，即可得菌球大小一致的均质液体颗粒菌种。
[0016]种子灭菌工序所述假酸楽子为前科植物假酸楽(AYcafli/ra physaloides)的种子，因其形状、大小适中，成本低，故将其作为本发明技术方案中菌丝附着包裹的载体。同时，假酸浆子还具有丰富的亚油酸等营养物质，用于做食用菌菌球载体有利于促进菌种生长，改善其营养保健价值。
[0017]种子灭菌工序所述假酸浆子的用量为0.9-1.lg，优选1.0g。
[0018]种子灭菌工序所述灭菌采用高压蒸汽灭菌法。所述高压蒸汽灭菌的温度为120~125°C，时间为 20~25min。
[0019]斜面培养基制备工序所述PDA斜面培养基的组成按每100ml水计为:土豆180~220g、葡萄糖 18~22g、琼脂粉 12?15g、pH 值 6.5-7.5。
[0020]接种工序所述将目标试管菌种接于种子层表面，接种面积为0.4-0.6X0.4-0.6cm2，优选 0.5X0.5cm2。
[0021]接种工序所述培养时间为7d。
[0022]液体培养基制备工序所述液体培养基的组成按每100ml水计为:土豆200g、葡萄糖 20g、KH2PO40.5g,K2HPO40.5g,MgSO40.5g、琼脂粉 3.5g、pH 值 6.5-7.5 ;制成半流动的液体培养基。
[0023]斜面培养基制备工序及液体培养基制备工序所述灭菌采用高压蒸汽灭菌法。所述高压蒸汽灭菌的温度为120~125°C，时间为20~25min。
[0024]摇床培养工序所述培养时间为10d。
[0025]摇床培养工序所述液体颗粒菌种的菌球直径为3~4mm。
[0026]本发明所述制备方法适用于各种食用菌，尤其是香菇、平菇、双胞蘑菇、木耳的栽培。
[0027]实施例1
将假酸浆子1.0g用牛皮纸包好，置于高压蒸汽灭菌锅中于120°c，灭菌25min备用。制备PDA斜面培养基，该培养基组成按每100ml水计为:土豆200g、葡萄糖20g、琼脂粉13g、pH值7.0。制备好后将该培养基置于高压蒸汽灭菌锅中于120°C，灭菌25min备用。将已灭菌