的假酸浆子倒入灭菌后的PDA斜面培养基，平铺均匀为种子层，再将目标试管菌种接于种子层表面，接种面积为0.5X0.5cm2，于23°C暗黑培养7d，待目标菌丝裹满假酸浆子种子表面即可。接着，制备半流动的液体培养基，该培养基的组成按每1000ml计为:土豆200g、葡萄糖 20g、KH2P040.5g、K2HP040.5g、MgS040.5g、琼脂粉 3.5g、pH 值 7.0，参照斜面培养基的灭菌方法灭菌备用。将裹满目标菌丝的假酸浆子种子接种到液体培养基中，于23°C暗黑摇床培养10d，即可得菌球直径为3~4mm的均质液体颗粒菌种。
[0028]实施例2
将假酸浆子1.lg用牛皮纸包好，置于高压蒸汽灭菌锅中于125°c，灭菌20min备用。制备PDA斜面培养基，该培养基组成按每1000ml水计为:土豆220g、葡萄糖18g、琼脂粉12g、pH值7.5。制备好后将该培养基置于高压蒸汽灭菌锅中于125°C，灭菌20min备用。将已灭菌的假酸浆子倒入灭菌后的PDA斜面培养基，平铺均匀为种子层，再将目标试管菌种接于种子层表面，接种面积为0.6X0.6cm2，于25°C暗黑培养6d，待目标菌丝裹满假酸浆子种子表面即可。接着，制备半流动的液体培养基，该培养基的组成按每1000ml计为:土豆220g、葡萄糖 18g、KH2P040.6g、K2HP040.4g、MgS040.4g、琼脂粉 3.8g、pH 值 6.5，参照斜面培养基的灭菌方法灭菌备用。将裹满目标菌丝的假酸浆子种子接种到液体培养基中，于25°C暗黑摇床培养8d，即可得菌球直径为3~4_的均质液体颗粒菌种。
[0029]实施例3
将假酸浆子0.9g用牛皮纸包好，置于高压蒸汽灭菌锅中于122°C，灭菌21min备用。制备PDA斜面培养基，该培养基组成按每1000ml水计为:土豆180g、葡萄糖22g、琼脂粉15g、pH值6.5。制备好后将该培养基置于高压蒸汽灭菌锅中于122°C，灭菌21min备用。将已灭菌的假酸浆子倒入灭菌后的PDA斜面培养基，平铺均匀为种子层，再将目标试管菌种接于种子层表面，接种面积为0.4X0.4cm2，于22°C暗黑培养6d，待目标菌丝裹满假酸浆子种子表面即可。接着，制备半流动的液体培养基，该培养基的组成按每1000ml计为:土豆180g、葡萄糖 22g、KH2P040.4g、K2HP040.6g、MgS040.6g、琼脂粉 3.2g、pH 值 7.5，参照斜面培养基的灭菌方法灭菌备用。将裹满目标菌丝的假酸浆子种子接种到液体培养基中，于22°C暗黑摇床培养12d，即可得菌球直径为3~4_的均质液体颗粒菌种。
【主权项】
1.一种用假酸浆子制备均质液体颗粒菌种的方法，其特征在于包括种子灭菌、斜面培养基制备、接种、液体培养基制备及摇床培养工序，具体包括: A、种子灭菌:将假酸浆子包好，灭菌备用； B、斜面培养基制备:制备PDA斜面培养基，灭菌备用； C、接种:将已灭菌的假酸浆子倒入灭菌后的PDA斜面培养基，平铺均匀为种子层；再将目标试管菌种接于种子层表面，于22~25 V暗黑培养6~8d，待目标菌丝裹满假酸浆子种子表面； D、液体培养基制备:液体培养基的组成按每100ml计为:土豆180~220g、葡萄糖18?22g、KH2PO40.4-0.6g、K2HP040.4-0.6g、MgS040.4-0.6g、琼脂粉 3.2-3.8g、pH 值 6.5-7.5 ；制成半流动的液体培养基，灭菌备用； E、摇床培养:将裹满目标菌丝的假酸浆子种子接种到液体培养基中，于22~25°C暗黑摇床培养8~12d，即可得菌球大小一致的均质液体颗粒菌种。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于工序A所述假酸浆子的用量为0.9?1.1g03.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于工序A所述灭菌采用高压蒸汽灭菌法。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于工序A所述高压蒸汽灭菌的温度为120~125°C，时间为 20~25min。5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于工序B所述PDA斜面培养基的组成按每 100ml 水计为:土豆 180~220g、葡萄糖 18~22g、琼脂粉 12~15g、pH 值 6.5-7.5。6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于工序C所述将目标试管菌种接于种子层表面，接种面积为0.4-0.6X0.4-0.6cm2。7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于工序C所述培养时间为7d。8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于工序D所述液体培养基的组成按每100ml 水计为:土豆 200g、葡萄糖 20g、KH2PO40.5g、K2HPO40.5g、MgSO40.5g、琼脂粉 3.5g、pH值6.5-7.5 ;制成半流动的液体培养基。9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于工序E所述培养时间为10d。10.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于工序E所述液体颗粒菌种的菌球直径为 3~4mm0
【专利摘要】本发明公开了一种用假酸浆子制备均质液体颗粒菌种的方法。所述制备方法包括种子灭菌、斜面培养基制备、接种、液体培养基制备及摇床培养工序。将假酸浆子包好，灭菌；制备PDA斜面培养基，灭菌；将假酸浆子倒入斜面培养基铺匀为种子层；将目标试管菌种接于种子层表面，于22~25℃暗黑培养6~8d，待目标菌丝裹满假酸浆子种子表面；液体培养基的组成按每1000ml计为：土豆180~220g、葡萄糖18~22g、KH2PO40.4~0.6g、K2HPO40.4~0.6g、MgSO40.4~0.6g、琼脂粉3.2~3.8g、pH值6.5~7.5；将裹满目标菌丝的假酸浆子种子接于液体培养基，于22~25℃暗黑摇床培养8~12d，即可得目标均质液体颗粒菌种。采用所述方法制备的菌种，菌球分布均匀，无需外力粉碎和打浆就能得到均质的液体菌种。减少了外力对菌球的伤害，提高了菌种整体质量。
【IPC分类】C12N1/14, C12R1/645
【公开号】CN105331547
【申请号】CN201510827464
【发明人】李建英, 华蓉, 郭永红, 刘绍雄, 罗孝坤, 尚陆娥
【申请人】中华全国供销合作总社昆明食用菌研究所
【公开日】2016年2月17日
【申请日】2015年11月25日