胞；真菌细胞 如酵母；植物细胞；昆虫细胞；动物细胞等。
[0132]用重组DNA转化宿主细胞可用本领域技术人员熟知的常规技术进行。当宿主为原 核生物如大肠杆菌时，能吸收DNA的感受态细胞可在指数生长期后收获，用CaCl2法处理， 所用的步骤在本领域众所周知。另一种方法是使用MgCl2。如果需要，转化也可用电穿孔的 方法进行。当宿主是真核生物，可选用如下的DNA转染方法：磷酸钙共沉淀法，常规机械方 法如显微注射、电穿孔、脂质体包装等。
[0133] 获得的转化子可以用常规方法培养，表达本发明的基因所编码的多肽。根据所用 的宿主细胞，培养中所用的培养基可选自各种常规培养基。在适于宿主细胞生长的条件下 进行培养。当宿主细胞生长到适当的细胞密度后，用合适的方法（如温度转换或化学诱导） 诱导选择的启动子，将细胞再培养一段时间。
[0134]在上面的方法中的重组多肽可在细胞内、或在细胞膜上表达、或分泌到细胞外。如 果需要，可利用其物理的、化学的和其它特性通过各种分离方法分离和纯化重组的蛋白。这 些方法是本领域技术人员所熟知的。这些方法的例子包括但并不限于：常规的复性处理、用 蛋白沉淀剂处理（盐析方法）、离心、渗透破菌、超处理、超离心、分子筛层析（凝胶过滤）、 吸附层析、离子交换层析、高效液相层析（HPLC)和其它各种液相层析技术及这些方法的结 合。
[0135] 抑制剂
[0136]利用本发明蛋白，通过各种常规筛选方法，可筛选出与Procr蛋白发生相互作用 的物质，尤其是抑制剂等。
[0137] 本发明Procr蛋白的抑制剂（包括抗体、反义核酸、小分子化合物以及其他抑制 剂），当在治疗上进行施用（给药）时，可抑制Procr蛋白的表达和/或活性，进而抑制肿瘤 的转移或肿瘤细胞的迁移。通常，可将这些物质配制于无毒的、惰性的和药学上可接受的水 性载体介质中，其中pH通常约为5-8,较佳地pH约为6-8,尽管pH值可随被配制物质的性 质以及待治疗的病症而有所变化。配制好的药物组合物可以通过常规途径进行给药。
[0138]可用于本发明的抑制剂包括：Procr的抗体、抑制性mRNA、Procr核酸的反义RNA、siRNA、shRNA、小分子化合物以及Procr的活性抑制剂。其中，典型的Procr抑制剂为抑制 性miRNA、siRNA〇
[0139] 典型地，将Procr基因作为制备预防或治疗肿瘤转移或肿瘤细胞迁移的药物的靶 点的技术方案包括以下方案：
[0140] 1.化学合成双链核糖核酸分子，其序列特异性针对Procr基因序列。可利用本领 域常规的方法来设计和合成特异性针对Procr的核酸序列（如siRNA)。
[0141] 2.利用各种载体，包括DNA载体、慢病毒载体来干扰Procr基因的表达，达到体内 干扰Procr基因的效果，从而实现抑制肿瘤增殖的目的。
[0142] 3.获得能够特异性抑制Procr基因转运活性的多肽、单克隆抗体，达到抑制Procr 活性的目的，从而现实抑制肿瘤细胞转移或迁移的目的。
[0143] 本发明还提供了一种药物组合物，它含有安全有效量的本发明Procr抑制剂（如 抗体、反义序列（如siRNA)、或抑制剂）以及药学上可接受的载体或赋形剂。这类载体包括 (但并不限于）：盐水、缓冲液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、及其组合。药物制剂应与给药方式相 匹配。本发明的药物组合物可以被制成针剂形式，例如用生理盐水或含有葡萄糖和其他辅 剂的水溶液通过常规方法进行制备。诸如片剂和胶囊之类的药物组合物，可通过常规方法 进行制备。药物组合物如针剂、溶液、片剂和胶囊宜在无菌条件下制造。活性成分的给药量 是治疗有效量，例如每天约1微克-10毫克/千克体重。
[0144] 特异性抗体
[0145] 在本发明中，术语"本发明抗体"和"抗Procr的特异性抗体"可互换使用。
[0146] 本发明还包括对人Procr多肽具有特异性的多克隆抗体和单克隆抗体，尤其是单 克隆抗体。这里，"特异性"是指抗体能结合于人Procr基因产物或片段。较佳地，指那些能 与人Procr基因产物或片段结合但不识别和结合于其它非相关抗原分子的抗体。本发明中 抗体包括那些能够结合并抑制人Procr蛋白的分子，也包括那些并不影响人Procr蛋白功 能的抗体。本发明还包括那些能与修饰或未经修饰形式的人Procr基因产物结合的抗体。
[0147] 本发明不仅包括完整的单克隆或多克隆抗体，而且还包括具有免疫活性的抗体片 段，如Fab'或（Fab) 2片段；抗体重链；抗体轻链；遗传工程改造的单链Fv分子（Ladner等 人，美国专利No. 4, 946, 778);或嵌合抗体，如具有鼠抗体结合特异性但仍保留来自人的抗 体部分的抗体。
[0148] 本发明的抗体可以通过本领域内技术人员已知的各种技术进行制备。例如，纯化 的人Procr基因产物或者其具有抗原性的片段，可被施用于动物以诱导多克隆抗体的产 生。与之相似的，表达人Procr蛋白或其具有抗原性的片段的细胞可用来免疫动物来生 产抗体。本发明的抗体也可以是单克隆抗体。此类单克隆抗体可以利用杂交瘤技术来制 备（见Kohler等人，Nature 256 ;495, 1975 ;Kohler等人，Phrr. L Tmmunol.6 :511, 1976 ; Kohler等人，F.ur. T. Tmmunol. 6 :292, 1976 ；Hammer 1 ing等人，In Monoclonal Antibodies and T Cell Hybridomas, Elsevier,N.Y.，1981)。本发明的抗体包括能阻断人Procr蛋白 功能的抗体以及不影响人Procr蛋白功能的抗体。本发明的各类抗体可以利用人Procr基 因产物的片段或功能区，通过常规免疫技术获得。这些片段或功能区可以利用重组方法制 备或利用多肽合成仪合成。与人Procr基因产物的未修饰形式结合的抗体可以用原核细胞 (例如E. Coli)中生产的基因产物来免疫动物而产生；与翻译后修饰形式结合的抗体（如 糖基化或磷酸化的蛋白或多肽），可以用真核细胞（例如酵母或昆虫细胞）中产生的基因产 物来免疫动物而获得。
[0149] 抗人Procr蛋白的抗体可用于免疫组织化学技术中，检测标本（尤其是组织样本 或血清样本）中的人Procr蛋白。由于Procr蛋白存在胞外区，因此在胞外区脱落并进入 血液的情况下，这些可溶性的Procr胞外区就可成为血清检测的靶对象。
[0150] 检测方法
[0151] 利用Procr存在于三阴性乳腺癌细胞或组织中，且与三阴性乳腺癌密切相关这一 特点，本发明还提供了检测三阴性乳腺癌或进一步分型的方法。
[0152] 在本发明的一个优选例中，本发明提供一种检测Procr的ELISA法以及时间分辨 免疫荧光法（TRFIA)。
[0153] 检测试剂盒
[0154] 基于Procr与三阴性乳腺癌的相关性，即Procr在乳腺癌组织中高表达并且在三 阴性乳腺癌病人中含量非常高，因此Procr可以作为三阴性乳腺癌的一种诊断或分型标志 物。
[0155] 本发明还提供了一种检测乳腺癌的试剂盒，它含有本发明的抗Procr的免疫球蛋 白或免疫偶联物，或其活性片段；或者含有特异性扩增Procr的mRNA或cDNA的引物。
[0156] 在另一优选例中，本发明还提供了Procr的诊断试剂盒，包括：Procr mRNA诊断试 剂盒或Procr酶联免疫（ELISA)检测试剂盒。
[0157] 药物组合物
[0158] 本发明还提供了一种药物组合物，它含有上述的Procr的拮抗剂（含量为 0. 001-99wt%，较佳地0. 01-90wt% )，以及药学上可接受的载体（含量为余量）。所述的药 物组合物可用于抑制乳腺癌细胞的生长。
[0159] 在本发明中，所述的措抗剂包括针对Procr的siRNA、反义RNA、抗体、或其组合。 此外，所述的拮抗剂还包括可以降低Procr表达或活性的小分子化合物。一类特别优选的 拮抗剂包括（但并不限于）：Pr〇Cr的可溶性片段或胞外片段，或含有所述片段的融合蛋白。 典型地，所述的胞外片段的序列为SEQIDN0. : 2中第1-210位或第18 - 210位，或其保留 结合与蛋白C的结合活性的活性片段。
[0160] 通常，可将Procr拮抗剂配制于无毒的、惰性的和药学上可接受的水性载体介质 中，其中pH通常约为5-8,较佳地pH约为6-8,尽管pH值可随被配制物质的性质以及待治 疗的病症而有所变化。配制好的药物组合物可以通过常规途径进行给药，其中包括（但并 不限于）：瘤内、肌内、腹膜内、静脉内、皮下、皮内、口服、或局部给药。
[0161] 本发明的药物组合物可直接用于抑制乳腺癌细胞（尤其是三阴性乳腺癌细胞）的 生长。此外，还可与其他肿瘤治疗剂联用。代表性的例子包括（但并不限于）：图14中所 示的针对乳腺癌的祀点药物。
[0162] 本发明的药物组合物含有安全有效量的本发明上述的Procr拮抗剂以及药学上 可接受的载体或赋形剂。这类载体包括（但并不限于）：盐水、缓冲液、葡萄糖、水、甘油、乙 醇、及其组合。药物制剂应与给药方式相匹配。本发明的药物组合物可以被制成针剂形式， 例如用生理盐水或含有葡萄糖和其他辅剂的水溶液通过常规方法进行制备。药物组合物如 针剂、溶液宜在无菌条件下制造。活性成分的给药量是治疗有效量，例如每天约1微克/千 克体重-约5毫克/千克体重。此外，本发明的多肽还可与其他治疗剂一起使用。
[0163] 使用药物组合物时，是将安全有效量的本发明的Procr拮抗剂施用于哺乳动物， 其中该安全有效量通常至少约10微克/千克体重，而且在大多数情况下不超过约8毫克/ 千克体重，较佳地该剂量是约10微克/千克体重-约1毫克/千克体重。当然，具体剂量 还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。
[0164] 激动剂
[0165] 利用本发明的Procr蛋白，通过各种常规筛选方法，可筛选出与Procr蛋白发生相 互作用的物质，尤其是激动剂等。
[0166] 本发明的Procr基因、蛋白或其激动剂特别适用于体外肿瘤细胞的培养以及肿瘤 动物模型的制备，尤其是肿瘤细胞肺转移、远处转移或腹腔转移动物模型建模。
[0167] 筛选方法
[0168] 本发明还提供了基于Procr进行药物筛选的方法。一种方法是先筛选影响（抑制） Procr表达或活性的化合物，然后对筛选出的化合物进一步测试其对癌细胞的抑制作用。
[0169] 其中，代表性的癌细胞包括乳腺癌细胞，尤其是三阴性乳腺癌细胞。
[0170] 本发明提供的筛选预防或治疗肿瘤转移、肿瘤细胞迁移或提高化疗药物敏感性的 候选化合物的方法，基于该化合物对Procr的表达量和/或活性的影响，一种典型的筛选方 法包括步骤：
[0171] (a)测试组中，在细胞的培养体系中添加测试化合物，并观察所述测试组的细胞中 Procr的表达量和/或活性；在对照组中，在相同细胞的培养体系中不添加测试化合物，并 观察对照组的所述细胞中Procr的表达量和/或活性；
[0172] 其中，如果测试组中细胞的Procr的表达量和/或活性小于对照组，就表明该测试 化合物是对Procr的表达和/或活性有抑制作用的治疗乳腺癌的候选化合物。和/或
[0173] (b)对于步骤（a)中获得的候选化合物，进一步测试其对癌细胞转移或迁移的抑 制作用。如，在测试组中，癌细胞的培养体系中添加测试化合物，并观察癌细胞移动的距离 的数量和/或侵袭情况；在对照组中，在癌细胞的培养体系中不添加测试化合物，并观察癌 细胞移动的距离的数量和/或侵袭情况；其中，如果测试组中癌细胞的迁移距离或侵袭数 量显著小于对照组，就表明该测试化合物是对癌细胞迁移能力有抑制作用的候选化合物。 [0174] 检测方法和试剂盒