产灰树花多糖的菌株及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于食品生物技术领域，具体涉及一种生产灰树花多糖的菌株及其应用。
【背景技术】
[0002] 灰树花(Grifola frondosa)是担子菌亚门，层菌纲，无隔担子菌亚纲，非裙菌目， 多孔菌属中的一种大型真菌，又名贝叶多孔菌、栗子蘑、重菇等，日本称之为舞茸。
[0003] 近20年来，国内外深入开展了作为生物反应调节剂的真菌多糖的研究，灰树花多 糖显著的疗效也逐渐被人们所认识。经过大量的化学和药理分析发现，灰树花多糖具有明 显的抗肿瘤，抗HIV病毒，改善免疫系统功能，调节血糖、血脂及胆固醇水平，降血压等作用， 对防止癌细胞的生成和转移、艾滋病、高血压、肥胖症、糖尿病以及免疫系统功能的紊乱都 有一定的疗效，且无任何毒副作用。大野尚仁（1986)比较了液体培养的菌丝体多糖与子实 体多糖的抗肿瘤活性，发现二者十分相似。深层发酵得到的灰树花菌丝体不但具有固体栽 培子实体相当的营养及药用效果，还可得到胞外多糖等子实体所不具备的营养保健成分。 最近，美国食品和药物管理局(FDA)证实了灰树花提取物治疗晚期乳腺癌和前列腺癌的研 究结果，并允许灰树花提取物作为癌症的有效抑制剂，直接进行Π 期临床试验。因此，灰树 花是一种极具开发价值的珍贵食、药用真菌。
[0004] 灰树花多糖主要以灰树花子实体为原料提取。多年来灰树花生产主要以人工固体 栽培为主，但固体栽培存在占地面积大、生产周期长、产量不稳定、易受气候、环境因素影响 等诸多缺点，使灰树花多糖的开发生产受到极大限制；而利用液体深层发酵法可使灰树花 多糖生产工业化，周期缩短，产量增加，质量更稳定。因此灰树花深层发酵可以替代子实体 作为产品深度开发的原料。当前，常规的产灰树花多糖菌株存在多糖含量低，菌丝体产量低 的问题，尤其是适合大规模发酵生产的灰树花菌株很难获得。因此通过现有的技术手段对 自然界的灰树花菌株资源筛选，以期获得高产多糖的灰树花菌株，为其应用奠定坚实基础。
【发明内容】
[0005] 本发明目的之一在于提供一株生产灰树花多糖的菌株，本发明所涉及的灰树花菌 株采自京东地区板栗产区，是从野生天然菌株中分离筛选得到。可以在最适条件下高效的 合成灰树花多糖。
[0006] 本发明目的之二在于提供一株生产灰树花多糖的菌株的应用，即将筛选出的 Griflola frondosa GrT.01菌株用于灰树花多糖的制备，从而高效的生产灰树花多糖。
[0007] 为实现上述目的，本发明所采取的技术方案为： 产灰树花多糖的菌株，保藏号为:CGMCC No. 10116,保藏日期为:2014年12月9日，所述 菌株分类命名为:灰树花GrT· 01 (Griflola frondosa) 〇
[0008] 利用前面所述的菌种生产灰树花多糖的方法，是将CGMCC No. 10116菌种制成种 子，接种于含有碳源、氮源、无机盐和水的培养基(pH为4~8)中，在23~28°C条件下连续发酵6 ~14天。
[0009] 前面所述的方法，优选的方案在于，具体包括以下步骤:在灰树花多糖生产阶段， 生产发酵培养基的碳源为葡萄糖和土豆汁或玉米粉，氮源为麸皮汁和酵母粉，无机盐的磷 酸二氢钾和硫酸镁的配比为2:1，生长因子VBi在生产发酵培养基中的质量百分比浓度为8-10mg/L 〇
[0010] 前面所述的方法，优选的方案在于，具体包括以下步骤： 1) 种子液制备阶段:利用如权利要求1或2所述的菌株制备种子液； 2) 菌种繁殖阶段:将所述种子液接种于一次发酵培养基后，所述一次发酵培养基在pH 为4~8和温度为23~28°C的条件下进行连续发酵； 3) 灰树花多糖生产阶段：向所述一次发酵培养基中添加玉米粉和麸皮汁，配制成生产 发酵培养基，在23~28°C条件下连续发酵6~14天。
[0011]前面所述的方法，优选的方案在于，所述一次发酵培养基成分为:碳源、氮源、无机 盐和生长因子。
[0012] 前面所述的方法，优选的方案在于，所述一次发酵培养基中碳源为葡萄糖或玉米 粉，所述氮源为麸皮汁和酵母粉。
[0013] 前面所述的方法，优选的方案在于，所述一次发酵培养基中葡萄糖和玉米粉的质 量百分比浓度各为1~6%。
[0014] 前面所述的方法，优选的方案在于，所述步骤3)中，生长因子在生产发酵培养基中 的浓度为8-10mg/L，无机盐在生产发酵培养基中的质量百分比浓度为0.01-0.5%。
[0015] 前面所述的方法，优选的方案在于，所述一次发酵培养基和所述生产发酵培养基 pH均为4~8。
[0016] 前面所述的方法，优选的方案在于，所述一次发酵培养基和所述生产发酵培养基 pH均为6。
[0017] 本发明提供的一株产灰树花多糖的菌株，所述菌株在中国微生物菌种保藏管理委 员会普通微生物中心的保藏号为:CGMCC No. 10116,保藏日期为:2014年12月9日，所述菌 株分类命名为：灰树花GrT.01(Griflola frondosa)。优选的是，所述菌株筛选自京东地区 板栗产区。
[0018] -种产灰树花多糖的方法，其特征在于，应用如权利要求1或2所述的菌株生产灰 树花多糖。优选的是，所述的方法具体包括以下步骤:在灰树花多糖生产阶段，生产发酵培 养基的碳源为葡萄糖和玉米粉，葡萄糖和玉米粉在生产发酵培养基中的质量百分比浓度为 1~6%，氮源为麸皮汁和酵母粉。优选的是，所述的方法具体包括以下步骤:种子液制备阶段： 利用如权利要求1或2所述的菌株制备种子液;菌种繁殖阶段:将所述种子液接种于一次发 酵培养基后，所述一次发酵培养基在pH为4~8和温度为23~28°C的条件下进行连续发酵;灰 树花多糖生产阶段：向所述一次发酵培养基中添加玉米粉和麸皮汁，配制成生产发酵培养 基，生产发酵培养基中的葡萄糖和玉米粉的浓度各为1~6%，所述生产发酵培养基的pH为4.5 ~8,在23~28°C条件下连续发酵6~14天。优选的是，所述一次发酵培养基成分为:碳源、氮源、 无机盐和生长因子。优选的是，所述一次发酵培养基中碳源为葡萄糖或/玉米粉，所述氮源 为麸皮汁。优选的是，所述一次发酵培养基中葡萄糖和玉米粉的质量百分比浓度各为1~6%， 麸皮汁的质量百分比浓度为1-6%。优选的是，所述步骤3)中，葡萄糖在生产发酵培养基中的 质量百分比浓度为3%，玉米粉在生产发酵培养基中的质量百分比浓度为3%，麸皮汁在生产 发酵培养基中的质量百分比浓度为5%。优选的是，所述一次发酵培养基和所述生产发酵培 养基pH均为5.5~6.5。优选的是，所述一次发酵培养基和所述生产发酵培养基pH均为6。
[0019] 本发明公开了 一株产灰树花多糖的菌株及其应用，所述菌株在中国微生物菌种保 藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为:CGMCC No. 10116,保藏日期为：2014年12月9 日，所述菌株分类命名为:灰树花GrT.01(Griflola frondosa)。本发明所述菌株GrT.01是 从野生环境天然子实体中分离筛选获得，菌丝体和多糖含量高，可应用于高效生产灰树花 多糖。本发明所述菌株GrT.01的发酵培养基配料简单，价格低廉，是工业生产中中非常普遍 容易获得的，发酵效果显著，使灰树花多糖的生产成本大大降低，可应用于大规模液体深层 发酵生产。
[0020] 本发明的有益效果本发明所述菌株GrT.01是从京东地区板栗产区十余株菌株中 筛选出来，在比较适宜的生长条件下，可应用于高效生产灰树花多糖，本发明还对所述菌株 GrT.01高效表达灰树花多糖的发酵条件进行了探索，获得了所述菌株表达灰树花多糖的发 酵培养中最优碳源、最优氮源、最优无机盐浓度、生长因子浓度等生活条件，本发明所述菌 株GrT.01的发酵培养基配料简单，都是工业生产中非常普遍容易获得的，发酵效果显著，使 灰树花多糖的生产成本大大降低，可应用于大规模生产。
【附图说明】
[0021 ]本发明公开了 一株产灰树花多糖的菌株及其应用，所述菌株在中国微生物菌种保 藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为:CGMCC No. 10116,保藏日期为：2014年12月9 日，所述菌株分类命名为:灰树花GrT.01(Griflola frondosa)。
[0022] 图1是菌种系统发育树。
[0023] 图2为本发明所述菌株在不同碳源的发酵培养基中时的生物量比较图。
[0024] 图3为本发明所述菌株在不同氮源的发酵培养基中时的生物量比较图。
[0025] 图4为本发明所述菌株在不同浓度无机盐的发酵培养基中时的生物量比较图。
[0026] 图5为本发明所述菌株在不同诱导剂诱导下发酵培养基中的生物量比较图。
[0027] 图6为本发明所述采集菌株不同多糖含量的对比测定图。
[0028]图7是灰树花菌种的平板型态和发酵菌球形态图。
【具体实施方式】
[0029] 下面结合附图对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文 字能够据以实施。
[0030] 本发明筛选的GrT.01(Griflola frondosa)菌株在中国微生物菌种保藏管理委员 会普通微生物中心的保藏号为:CGMCC No. 10116,保藏日期为:201