一种新的环烯醚萜类化合物及其制备方法和医药用图
【技术领域】
[0001]本发明属于药物技术领域，具体涉及从栀子的干燥成熟果实中分离得到的一种环 烯醚萜类化合物，含其的药物组合物及其制备方法和应用。
【背景技术】
[0002] 栀子(Gardenia jasminoides Ellis.)是茜草科(Rubiaceae)栀子属常绿灌木，又 名山栀子、黄栀子、黄枝子等，主产于浙江、福建、江西、湖南、广东。栀子的干燥成熟果实入 药称栀子，中国历版药典和本草均有记载，为常用中药。其性寒味苦，无毒，主归心、肺、三焦 经，具有泻火除烦、清热利尿、凉血解毒等功效。临床广泛用于热病心烦、黄疸尿赤、血淋涩 痛、血热吐衄、目赤肿痛、火毒疮疡等证;其根功能清热、凉血、解毒，民间主要用于黄疸性肝 炎、肾炎水肿、感冒高热、出血吐血、跌打损伤、疮疡肿毒等病症的治疗;叶可消肿止痛，治疗 跌打损伤;花可清肺热凉血降脂，治疗肺热咳嗽、鼻衄。
[0003] 栀子属植物化学成分的研究始于20世纪20年代，具有特征性的化合物主要包括环 烯醚萜类、有机酸类和黄酮类。栀子中含有大量的环烯醚萜类化合物，有4种主要类型:环烯 醚萜烷类、环烯醚萜苷类、环烯醚萜二缩醛酯类和裂环烯醚萜苷类。环烯醚萜基本骨架经环 氧化、羟基化及由莽草酸途径得到的芳香酸酯化，导致了该类化合物的多样性，同时也导致 其药理活性的多样性。
[0004] 桅子是常用中药，备受国内外学者的重视，研究工作较多。现代药理实验表明，栀 子中的环烯醚萜类成分有明显的抗炎镇痛、保肝利胆、抗血栓等活性;有机酸类中的藏红花 苷类成分具抗炎、抗血栓、调血脂、抗心肌缺血等活性。随着科学技术的不断进步，对其研究 也有了许多创新和突破，尤其对其中的环烯醚萜类成分的研究，新的化合物和药理作用不 断被发现，药理作用机制也得到了深入的研究。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种从栀子的干燥成熟果实中分离得到的一种环烯醚萜类 化合物，含其的药物组合物及其制备方法和应用。
[0006] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
[0007] 具有下述结构式的化合物(I):
[0009]所述的化合物（I)的制备方法，包含以下操作步骤：（a)将栀子的干燥成熟果实粉 碎，用70~80%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水 饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤(a) 中乙酸乙酯萃取物用大孔树脂除杂，先用10%乙醇洗脱6个柱体积，再用70%乙醇洗脱8个 柱体积，收集70%洗脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中70%乙醇洗脱浓 缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为40:1、20:1、10:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得 到4个组分；（d)步骤(c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为8:1、5:1和2:1的 二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅 胶分离，用体积百分浓度为70 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~12个柱体积洗脱液，洗脱 液减压浓缩得到纯的化合物(I)。
[0010] 进一步地，所述用乙醇热回流提取采用的乙醇浓度为75%。
[0011] 进一步地，所述大孔树脂为AB-8型大孔吸附树脂。
[0012] 药物组合物，其中含有治疗有效量的所述的化合物(I)和药学上可接受的载体。
[0013] 所述的化合物(I)在制备治疗肾癌的药物中的应用。
[0014] 所述的药物组合物在制备治疗肾癌的药物中的应用。
[0015] 本发明化合物用作药物时，可以直接使用，或者以药物组合物的形式使用。
[0016] 该药物组合物含有治疗有效量的本发明化合物（I)，其余为药物学上可接受的、对 人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。
[0017] 所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料 以及药物制品辅剂。将本发明的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。本发明药物可 通过口服或注射的形式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、缓释片、控 释片、胶囊、滴丸、微丸、混悬剂、乳剂、散剂或颗粒剂、口服液等;用于注射时，可制成灭菌的 水性或油性溶液、无菌粉针、脂质体或乳剂等。
【附图说明】
[0018] 图1为化合物(I)结构式；
[0019] 图2为化合物⑴计算ECD和实验ECD图。
【具体实施方式】
[0020] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0021] 主要材料、试剂来源及仪器类型：
[0022]乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷为分析纯，购自上海凌峰化学试剂有限 公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。
[0023]实施例1:化合物(I)分离制备及结构确证
[0024] (a)栀子的干燥成熟果实（10kg)粉碎，用75%乙醇热回流提取(25LX3次），合并提 取液，浓缩至无醇味(6L)，依次用石油醚(6L X 3次）、乙酸乙酯(6L X 3次)和水饱和的正丁醇 (6LX3次)萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物(377g)和正丁醇萃取物；（b)步骤 (a)中乙酸乙酯萃取物用AB-8大孔树脂除杂，先用10%乙醇洗脱6个柱体积，再用70%乙醇 洗脱8个柱体积，收集70 %洗脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物（129g);(c)步骤(b)中 70 %乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为40:1 (8个柱体积）、20 :1 (8个柱体 积）、10:1(8个柱体积)和5:1(10个柱体积）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；（d)步 骤(c)中组分4(24g)用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为8:1(8个柱体积）、5:1(10个柱 体积）和2:1(8个柱体积）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤（d)中组分2 (15g)用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为70 %的甲醇水溶液等度洗 脱，收集8~12个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物(I)(242mg)。
[0025] 结构确证:无色油状物;HR-ESMS显示[M+Na]+为m/z 361.1618,结合核磁特征可 得分子式为Ci8H26〇6，不饱和度为6。核磁共振氢谱数据δ Η(ΡΡπι，DMS〇-d6，600MHz): H-1 (5 · 86， t，J = 4.2)，H-3(6.31，s)，H-5(2.97，dd，J=16.2,8.4)，H-6(1.58，m)，H-6(2.06，m)，H-7 (4.22，m)，H-8(1.69，m)，H-9(2.44，ddd，J = 9.0,5.4,3.6)，H-10(4.01，ddd，J = 7.8,4.8， 2.4)，H-10(3.65，dd，J=12.0,2.4)，H-ll(10.17，br，s)，H-2'（2.17，m，2H)，H-3'（2.00，m)， H-4'（0.92，d，J = 2.4)，H-5'（0.93，d，J = 2.4)，H-2"（1.32，s)，H-3"（1.41，s);核磁共振碳 谱数据Sc(ppm，DMS〇-d6,150MHz) :91.1 (CH，1-C)，137.0(CH，3-C)，125.2(C，4-C)，31.8(CH， 5-C)，38.2(CH2,6-C)，70.6(CH，7-C)，39.8(CH，8-C)，40.3(CH，9-C)，59.4(CH2，10_C)，191.6 (CH，11-C)，171.5(C，1，-C)，42.7(CH2,2，-C)，25.1(CH，3，-C)，21.7(CH3,4，-C)，21.7(CH3， 5'-〇,97.5((：，1"-〇,28.3(01 3,2"-〇，19.4(013,3"-〇;碳原子标记参见图1。11?光谱表明 该化合物含有羰基和烯烃结构（1746(3!!^和leeknfq^HNMR谱显示了一个异戊酰基结构[δ H2.17(m，2H，H-2，），2.00(m，H-3，），0.92(d，J = 2.4Hz，H-4，），0.93(d，J = 2.4Hz，H-5，）]，一 个醛基信号[SH10·17(br，s，H-ll)]，一个含氧亚甲基信号[δH3·65(dd，J=12·0,2·4H Z，H- l0)，4·01(ddd，J=7·8,4·8,2·4Hz，H-10)]，一个含氧烯属次甲基质子信号[δH6·31(s，H-3)]，两个含氧次甲基信号[5財.22(111，!1-7)，5.86(^ = 4.2抱，!1-1)]。130匪1?谱显示了18个 碳信号，包括四个甲基信号[叱19.4(03"），21.7((：-4'），21.7((：-5'），28.3((：-2"）]，三个亚 甲基[一个含氧亚甲基SC59.4(C-10)]，八个次甲基[一个羰基δ(：191.6(C-11)，两个含氧次 甲基SC70.6(C-7)和91.1(01)，一个含氧烯烃次甲基6(：137.0((：-3)]和三个季碳[一个烯烃 季碳δ(：125.2(C-4)，一个酮羰基δ(：171.5(C-1'），一个含氧季碳SC97.5(C-1"）] aHMBC谱中， H-1 (δΗ5 · 86)，Η2-2 '（ δΗ2 · 17)和H-3 '（ δΗ2 · 00)与C-Γ (δ(：171 · 5)的相关性表明了异戊酰基 与C-1 相连。HMBC谱，Η-2"（ δΗΙ · 32)与C-Γ (δ〇97 · 5)，C-3"（ δ(：19 · 4)，C-7 (SC70 · 6)和C-10 (δ C59 · 4)，Η-3"（ δΗΙ · 41)与C-Γ (SC97 · 5)，C-2"（SC28 · 3)和C-10(SC59 · 4)，以及Η2-10(δΗ3 · 65 和4.01)与C-1"0C97.5)的相关性表明C-7和C-10与丙酮缩基相连。R0ESY谱中，Η-9与Η-10 β，Η-6β和Η-5，以及Η-10β与Me-2"和Η-9的相关性表明Me-2"，Η-5和Η-9为β构型;Η-1与Η-8， Η-7与Me-3"，Η_6α和Η-8的交叉峰表明Me-3"，Η_1，Η_7和Η-8为α构型。综合氢谱、碳谱、HMBC 谱和R0ESY谱，以及文献关于相关类型核磁数据，可基本确定该化合物如图1所示，立体构型 进一步通过Ε⑶试验确定，理论值与实验值基本一致(图2)。
[0026]实施例2:化合物(I)药理作用试验 [0027] 一、材料和仪器
[0028]人肾癌RC-2细胞株购于ATCC细胞库(美国）。分析纯蔗糖购于国药集团化学试剂公 司。重水(D20)购于青岛腾龙微波科技有限公司。1^8、303、30%丙烯酰胺单体、1'冊61120购 于重庆医科大学基础研究所实验室。小牛血清、RPMI-1640购于美国Gibco公司。Centriplus 离心超滤管、Amicon Ultra高回收率高流速切向流超滤离心管（100kD)、PVDF膜购于 Mi 11 ipore公司。SDS-