一种提取羊栖菜多糖的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种提取羊栖菜多糖的方法。
【背景技术】
[0002] 羊栖菜（Sargassum fusiforme(Harv. )Setch)是褐藻门马尾藻属植物，另丨」名羊奶 子、海大麦等。分布广泛，日本和朝鲜沿岸都有分布，在浙江沿海地区分布更多。在日本，羊 栖菜被称为"长寿菜"；在我国，羊栖菜入药已经有久远历史，《神农本草经》、《本草纲目》等 记载其食用价值和药用价值。羊栖菜本身含有丰富的营养物质，其中碳水化合物占有很大 比例，赋予了其有较多的生物学功能和较高的开发价值。羊栖菜广泛应用于降血脂、抗血 栓、抗肿瘤以及消除大脑疲劳、增进机体免疫力、延缓衰老等食疗方面，治疗风湿病、糖尿病 等药物制剂的研制方面同时也应用化工相关添加剂和粘合剂的原料等方面。
[0003] 近年来，许多研究表明羊栖菜中含有较多的水溶性褐藻硫酸化多糖，又有不同种 属的褐藻硫酸化多糖的生物活性相继被报道多个方面的生物活性，包括抗氧化、抗凝血、抗 炎、抗癌、抗肿瘤、免疫调节等生物学功能。
[0004] 目前，褐藻多糖提取技术主要有酶解法、碱解法、酸解法、水提取法、超声波辅助， 但现有羊栖菜多糖的提取方法中，都存有不足，包括成本太高，操作复杂，耗能耗材较多，多 糖含量和纯度不高等。
【发明内容】
[0005] 基于技术领域和技术背景，本发明要提供一种操作步骤简单、耗能耗材少、多糖含 量及纯度较高的羊栖菜多糖的提取方法。
[0006] 针对以上问题，提供了如下技术方案：一种提取羊栖菜多糖的方法，包括如下步 骤：
[0007] (1)烘干羊栖菜，粉碎成粉，过40-200目筛网；
[0008] (2)将步骤（1)中得到的羊栖菜藻粉和95%乙醇充分混合，进行回流脱脂，羊栖菜 藻粉与95%乙醇的质量体积比为1:5~15，重复上述步骤1~5次，时间2h/次；
[0009] (3)回收步骤(2)中脱脂后的藻粉，加入蒸馏水，按照藻粉与蒸馏水的质量体积比 为1:10~50,室温充分搅拌混合后浸泡12h，通过絹筛进行过滤，收集第一次滤液，滤渣中加 入上述比例蒸馏水继续搅拌提取，每2h收集滤液，重复1~3次，合并上述滤液，进行减压浓 缩，得到浓缩液；
[0010] (4)步骤(3)中浓缩液，按照浓缩液与95 %乙醇体积比1:1~1:4，加入95 %乙醇，醇 沉后，3000r/min离心10min，收集沉淀，加入蒸馏水，搅拌至完全溶解；
[0011] (5)将步骤(4)中的多糖溶液，冷冻真空干燥，得到多糖产物。
[0012] 上述方法中，步骤1中的将羊栖菜进行烘干的是在40~60°的条件下进行。
[0013]上述方法中，步骤2中回流脱脂的温度为50~80°的条件下进行。
[0014]上述方法中，步骤3中的目絹筛的为双层结构且其大小为200目，且减压浓缩在45- 60°的条件下进行。
[0015] 本发明采用冷水浸泡的提取方式，维持多糖原始结构不变，减少能源的消耗，在提 取羊栖菜多糖中所用的试剂廉价无毒，得到多糖的产率高（即纯度较高）。选择减压浓缩和 冷冻真空干燥的手段，保证多糖成分的完整，最终样品的状态好。具有提取步骤简单，成本 较低，工艺稳定等优点。
【附图说明】
[0016] 图1为本发明中藻粉与乙醇比例分为三组且经过5次脱脂回流后滤液颜色对比图， 其中，图1 -a、图1 -b、图1 -c、图1 -d、图1 -e分别为脱脂回流1~5次后滤液颜色对比图。
【具体实施方式】
[0017] 下面结合附图和实施例，对本发明的【具体实施方式】作进一步详细描述。以下实施 例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
[0018] 本发明公开了一种提取羊栖菜多糖的方法，采用控制变量法对该方法中的各个变 量进行逐一验证，且包括如下步骤。
[0019] (1) 50°C烘干羊栖菜，粉碎成粉；
[0020] (2)将藻粉分别过40、100、200目筛网，经乙醇回流脱脂(料液比1:15,回流次数5 次），冷水提取(料液比1: 50，提取次数3次），浓缩后加4倍体积乙醇沉淀，离心，减压冷冻干 燥后，获得冷提羊栖菜多糖，分析羊栖菜藻粉最佳粒径，结果显示100目粒径提取多糖量最 尚。
[0021 ]表1.羊栖菜藻粉粒径对多糖提取的影响
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[0023] (3)将100目藻粉与95%乙醇充分混合，回流脱脂，温度为70°C，羊栖菜藻粉:95% 乙醇= 1:5~15(m:v)，其中藻粉与乙醇比例分为三组且依次为l:5(m:v)、l:10(m:v)、l:15 (m:v)，时间2h/次，重复1~5次。经过回流脱脂后的滤液颜色如图1所示，图1-a、图1-b、图Ιο、图 1-d、图 1-e 分别为脱脂回流 1~ 5次后滤液颜色（ 图中料液比摆放顺序 :藻粉 ：乙醇=1: 5，l:10，l:15(m:v))
[0024] 根据上图得出1:10,1:15的颜色在第五次与第四次很接近，但是颜色更浅，为减少 乙醇用量，选择重复5次，羊栖菜藻粉:95%乙醇=1:10(m: v)。
[0025] (4)将100目藻粉经10倍95%乙醇脱脂5次后，按照藻粉:蒸馏水=1:10~l:50(m: v)料液比，加入蒸馏水，充分搅拌混合浸泡12h后，200目絹筛过滤，收集第一次滤液，滤渣中 加入上述比例蒸馏水继续搅拌充分混合，接下来每2h收集滤液，重复3~4次，合并滤液，50 °C减压浓缩，浓缩为藻粉质量的1倍。浓缩后加4倍体积乙醇沉淀，离心，减压冷冻干燥后，获 得冷提羊栖菜多糖，分析提取时最佳的料液比，根据所得出的数据选用最佳条件是液料比 为30:1，重复4次。
[0026] 表2.料液比与提取次数对多糖提取的影响
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[0028] (5)将100目藻粉经10倍95%乙醇脱脂后，按照藻粉:蒸馏水= l:30(m:v)料液比， 提取4次，50 °C减压浓缩，按照浓缩液:95 %乙醇=1:1~1:4 (v: v)加入95 %乙醇，醇沉12h 后，3000r/min离心10min，收集沉淀。蒸馏水充分溶解后减压冷冻干燥。分析最佳乙醇沉淀 比例，结果显示4倍醇沉产物糖含量最高，即产品质量最好。
[0029]表3.乙醇用量对多糖沉淀的影响
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[0031] 根据上述实验结果，本发明通过3个实施例进行验证：
[0032] 实施例1:
[0033] (1)50°C