款冬花多糖与水按料液比lg: 15ml的料液比混合，在300C下浸泡6h，然后在60°C，超声功率为60w下，超声20min后，水提2次，每次150min，收集提取液，并离心收集上清液，过滤后合并滤液，将滤液真空浓缩为原体积的八分之一，将浓缩后的滤液加入4倍体积的95 %乙醇醇沉，静置24h后抽滤，依次用无水乙醇、丙酮、乙醚淋洗，干燥即得款冬花粗多糖；
(3)脱蛋白:将粗多糖溶于蒸馏水中，配制成10mg/ml的粗多糖溶液，向粗多糖溶液中加入2.0 %的质量浓度为lmg/ml，PH为7.0的木瓜蛋白酶溶液，置于65 °C下90min，加入氯仿:正丁醇为4:1的Sevage试剂，经3000r/min均质机充分混合20min，在3000r/min离心lOmin，除去沉淀，取上清液再加入氯仿:正丁醇为4:1的Sevage试剂，重复上述操作2次，在上清液中加入4倍体积的95 %乙醇醇沉，静置24h，抽滤后真空干燥即得脱蛋白后多糖；
(4)脱色:将XD-5大孔树脂用蒸馏水浸泡除去水溶性杂质剂及悬浮物，先用95%乙醇浸泡24h，用蒸馏水水洗至无醇味且水液澄清，再用3倍树脂体积的3%稀盐酸溶液12h，用蒸馏水洗至中性，再用3倍树脂体积的3%强氧化钠溶液浸泡12h，用蒸馏水洗至中性后凉干，将脱蛋白后的多糖配置成2mg/ml的多糖溶液后，将XD-5大孔树脂和多糖溶液按lg:1OOml的比例加入恒温振荡器中，在温度为25°C，恒温振荡器频率120次/min的条件下振荡吸附6h，过滤即得脱色多糖；
(5)透析:将步骤(4)所得多糖配置成10mg/ml溶液，用自来水流动透析48h，再用蒸馏水透析24h，然后用4倍体积的95 %乙醇醇沉，静置24h后抽滤，依次用无水乙醇、丙酮、乙醚淋洗，50 °C真空干燥即得款冬花多糖。
[0019]实施例3
[0020]款冬花的提取与纯化方法，包括以下步骤:(I)粉碎、脱脂预处理:将款冬花花蕾在80 0C的烘箱中烘12h后，将其粉碎，过100目筛，按Ig:1Oml的料液比添加95 %乙醇溶液，回流脱脂2次，每次时间为2h，将提取液过滤，将滤饼中的乙醇挥干；
(2)预浸泡-超声-水提联合提取款冬花多糖:将预处理过的款冬花多糖与水按料液比lg: 22ml的料液比混合，在30°C下浸泡6h，然后在60°C，超声功率为70w下，超声30min后，水提2次，每次160min，收集提取液，并离心收集上清液，过滤后合并滤液，将滤液真空浓缩为原体积的八分之一，将浓缩后的滤液加入4倍体积的95 %乙醇醇沉，静置24h后抽滤，依次用无水乙醇、丙酮、乙醚淋洗，干燥即得款冬花粗多糖；
(3)脱蛋白:将粗多糖溶于蒸馏水中，配制成10mg/ml的粗多糖溶液，向粗多糖溶液中加入2.5%的质量浓度为111^/1111，PH为7.0的木瓜蛋白酶溶液，置于5 5 °C下80m i η，加入氯仿:正丁醇为4:1的Sevage试剂，经3000r/min均质机充分混合20min，在3000r/min离心lOmin，除去沉淀，取上清液再加入氯仿:正丁醇为4:1的Sevage试剂，重复上述操作2次，在上清液中加入4倍体积的95 %乙醇醇沉，静置24h，抽滤后真空干燥即得脱蛋白后多糖；
(4)脱色:将XD-5大孔树脂用蒸馏水浸泡除去水溶性杂质剂及悬浮物，先用95%乙醇浸泡24h，用蒸馏水水洗至无醇味且水液澄清，再用3倍树脂体积的3%稀盐酸溶液12h，用蒸馏水洗至中性，再用3倍树脂体积的3%强氧化钠溶液浸泡12h，用蒸馏水洗至中性后凉干，将脱蛋白后的多糖配置成2mg/ml的多糖溶液后，将XD-5大孔树脂和多糖溶液按lg:95ml的比例加入恒温振荡器中，在温度为25°C，恒温振荡器频率120次/min的条件下振荡吸附6h，过滤即得脱色多糖；
(5)透析:将步骤(4)所得多糖配置成10mg/ml溶液，用自来水流动透析48h，再用蒸馏水透析24h，然后用4倍体积的95 %乙醇醇沉，静置24h后抽滤，依次用无水乙醇、丙酮、乙醚淋洗，50 °C真空干燥即得款冬花多糖。
【主权项】
1.款冬花多糖的提取与纯化方法，其特征在于:其包括以下步骤: (1)粉碎、脱脂预处理:将款冬花花蕾在80°c的烘箱中烘12h后，将其粉碎，过100目筛，按Ig:1Oml的料液比添加95%乙醇溶液，回流脱脂2次，每次时间为2h，将提取液过滤，将滤饼中的乙醇挥干； (2)预浸泡-超声-水提联合提取款冬花多糖:将预处理过的款冬花多糖与水按料液比18:15?221111的料液比混合，在30°(:下浸泡611，然后在60?70°(:下超声10?301^11后，水提2次，每次120?160min，收集提取液，并离心收集上清液，过滤后合并滤液，将滤液真空浓缩为原体积的八分之一，将浓缩后的滤液加入4倍体积的95 %乙醇醇沉，静置24h后抽滤，依次用无水乙醇、丙酮、乙醚淋洗，干燥即得款冬花粗多糖； (3)脱蛋白:将粗多糖溶于蒸馏水中，配制成10mg/ml的粗多糖溶液，向粗多糖溶液中加入1.5?2.5%的质量浓度为111^/1111，？!1为7.0的木瓜蛋白酶溶液，置于55?65°(:下80?10min，加入Sevage试剂，经3000r/min均质机充分混合20min，在3000r/min离心1min，除去沉淀，取上清液再加入Sevage试剂，重复上述操作2次，在上清液中加入4倍体积的95 %乙醇醇沉，静置24h，抽滤后真空干燥即得脱蛋白后多糖； (4)脱色:将大孔树脂进行除杂、酸碱处理、干燥预处理，将脱蛋白后的多糖配置成2mg/ml的多糖溶液后，将大孔树脂和多糖溶液按Ig: 95?10ml的比例加入恒温振荡器中，振荡吸附6h，过滤即得脱色多糖； (5)透析:将步骤(4)所得多糖配置成10mg/ml溶液，用自来水流动透析48h，再用蒸馏水透析24h，然后用4倍体积的95 %乙醇醇沉，静置24h后抽滤，依次用无水乙醇、丙酮、乙醚淋洗，50 °C真空干燥即得款冬花多糖。2.根据权利要求1所述的款冬花多糖的提取与纯化方法，其特征在于，所述的步骤(2)中超声功率为80?90w。3.根据权利要求1所述的款冬花多糖的提取与纯化方法，其特征在于，所述的Sevage试剂为氯仿:正丁醇为4:1。4.根据权利要求1所述的款冬花多糖的提取与纯化方法，其特征在于，所述的步骤(4)中，大孔树脂的预处理为:将大孔树脂用蒸馏水浸泡除去水溶性杂质剂及悬浮物，先用95%乙醇浸泡24h，用蒸馏水水洗至无醇味且水液澄清，再用3倍树脂体积的3%稀盐酸溶液12h，用蒸馏水洗至中性，再用3倍树脂体积的3%强氧化钠溶液浸泡12h，用蒸馏水洗至中性后凉干。5.根据权利要求1或4所述的款冬花多糖的提取与纯化方法，其特征在于，所述的大孔树脂为XD-5大孔树脂。6.根据权利要求1所述的款冬花多糖的提取与纯化方法，其特征在于，所述的步骤(4)中，振荡吸附的条件为:温度25°C，恒温振荡器频率120次/min。
【专利摘要】本发明公开了款冬花多糖的提取与纯化方法，本发明采用水提法在超声条件下提取款冬花多糖，并采用木瓜蛋白酶结合Sevage试剂对款冬花多糖进行脱蛋白，采用大孔树脂法吸附色素进行脱色处理，再将脱蛋白和脱色后的多糖进行透析，进一步去除多糖中的杂质，得到纯度较高的款冬花多糖。本发明的款冬花多糖的提取与纯化方法，提取率高，除杂率高，多糖保留效果好。
【IPC分类】C08B37/00
【公开号】CN105622776
【申请号】CN201610134885
【发明人】郭琴
【申请人】广西大学
【公开日】2016年6月1日
【申请日】2016年3月10日...