专利名称：一株降解多环芳烃的菌株及其与表面活性剂协同在土壤修复中的应用的制作方法
技术领域：
本发明属于环境工程和微生物工程技术领域。尤其涉及一株降解多环芳烃的解脂耶氏酵母菌Upolytica ) tzyx3及其与表面活性剂协同在土壤修复中的应用。
背景技术：
多环芳烃(PAHs)是一类持久性有机污染物(POPs)。PAHs污染源主要来自于废旧机器油、电器产品的润滑油和来自废旧金属拆解中的木材、有机高分子化合物、纸张等含碳氢化合物的物质经不完全燃烧或在还原性气氛中经热分解而生成的。由于多环芳烃及其衍生物具有致癌性、致突变性和致畸性，以及急性毒性和亚致死作用，目前已引起人们的极大 关注。多环芳烃(PAHs)污染土壤修复是当前环境修复中研究的热点。生物降解是对PAHs污染土壤进行修复的重要途径之一。对于多环芳烃污染，国内外进行了大量多环芳烃降解微生物的筛选工作。到目前为止，已分离出多个具有多环芳烃降解能力的菌株，如假单胞菌属、分枝杆菌属、芽孢杆菌属等，并没有隐球酵母科用于多环芳烃修复的报道。但是土壤中的PAHs的生物利用率一般较低，通常认为，溶解于液相中的PAHs或其他的底物可被微生物利用，反之若被吸附于土壤上，则较难被微生物利用。有研究表明，表面活性剂能促进PAHs从土壤中释放，使PAHs分配到表面活性剂胶束中或吸附到表面活性剂单体上，提高其生物有效性。
发明内容
本发明针对现有技术中单微生物修复存在的不足之处、针对多环芳烃吸附于土壤中难降解的特点，提供一种降解多环芳烃菌株、该菌株与表面活性剂发挥协同作用，在治理多环芳烃污染土壤中可以应用。为达到上述目的，本发明是通过以下技术方案得以实现的
一株降解多环芳烃的菌株，其特征在于，该菌株为解脂耶氏酵母菌(ferroWatzyx3，在中国典型培养物保藏中心的保藏号为CCTCC NO M 2012241，具备降解多环芳烃的能力。所述菌株具有以多环芳烃为唯一碳源和能源进行生长的能力。所述菌株在多环芳烃土壤中具有良好的降解多环芳烃的能力。所述菌株的ITS序列如SEQ NO.1所示。根据所述降解多环芳烃的菌株，其特征在于所述多环芳烃选自萘、菲、荧蒽、芘、苯并蒽、苯并芘的的一种或多种的混合物。所述降解多环芳烃的菌株在多环芳烃污染的土壤的生物修复中的应用。所述降解多环芳烃的菌株与表面活性剂协同作用在快速降解土壤中多环芳烃中的应用。
利用所述降解多环芳烃的菌株进行土壤生物修复的方法，其特征在于该方法由以下步骤组成选取多环芳烃污染土壤100g，tzyX3按质量百分比2. 0%用量与土壤混合均匀，表面活性剂加入量为污染土壤的干重的O. 1%，加水使土壤含水率保持在15%，放入恒温振荡器中，控制培养温度在25°C的恒温条件下，振荡培养修复15天。所述表面活性剂选自腐植酸、鼠李糖脂、Triton X-100、Tween80、β_环糊精中的一种。·
本发明提供的解脂耶氏酵母菌(/arroffia Iipolytica),命名为tzyx3,于2012年6月24日保藏于“中国典型培养物保藏中心”，其保藏号CCTCC NO M 2012241。地址中国武汉武汉大学。tzyx3是从浙江省台州市固体废弃物拆解场某污染土壤中分离并筛选得到。菌株可在15 35 °C，pH值6. O 8. 5培养条件下较好生长；菌株在YETO平板上培养三天菌落特征为圆形，白色奶油状，表面光滑，边缘整齐；细胞卵圆形，进行出芽生殖，培养七天后出现不太发达的有隔假菌丝。作为优选，本发明所述菌株能以多环芳烃为唯一碳源和能源生长。作为优选，本发明菌株与表面活性剂联用具有快速降解土壤中多环芳烃的能力。上述与表面活性剂发挥协同作用修复土壤的多环芳烃降解菌的筛选方法，可按如下步骤依次实施
(1)从固废拆解场采集距地表下5 20cm处表层土壤样品，作为菌源进行自然富集培养；所述富集培养基含有胰蛋白胨、葡萄糖及酵母膏；
(2)取(I)中所述富集培养液接种于无机盐选择培养基中进行选择培养，所无机盐选择培养基含有K2HP04、MgS04 ·7Η20、(NH4) 2S04、萘、菲、荧蒽、芘、苯并蒽、苯并芘等多环芳烃(多环芳烃萘、菲、突蒽、花、苯并蒽、苯并花的浓度均为150mg/L 250mg/L)；
(3)取(2)中所述选择培养物稀释涂布于固体无机盐选择培养基上，进行分离进行分离即得到多环芳烃降解菌tzyx3。上述多环芳烃降解菌tzyx3可用于多环芳烃土壤污染的生物修复。具体地，本发明可采用降解多环芳烃菌株与表面活性剂联合对多环芳烃污染土壤进行修复。本发明tzyx3可在15 35 °C，pH值6. O 8. 5培养条件下较好生长；菌株在YEH)平板上培养三天菌落特征为圆形，白色奶油状，表面光滑，边缘整齐；细胞卵圆形，进行出芽生殖，培养七天后出现不太发达的有隔假菌丝。tzyx3在YETO (葡萄糖2. 0% ;胰蛋白胨2. 0% ;酵母粉1. 0%)培养基上培养三天菌落特征为圆形，白色奶油状，表面光滑，边缘整齐；细胞卵圆形，进行出芽生殖，培养七天后出现不太发达的有隔假菌丝。tzyx3的生理生化特征,见表1.
表I Tzyx3的生理生化特征
权利要求
1.一株降解多环芳烃的菌株，其特征在于，该菌株为解脂耶氏酵母菌(ferroffia 7i/7o7_Fiica) tzyx3，在中国典型培养物保藏中心的保藏号为CCTCC NO M 2012241，具备降解多环芳烃的能力。
2.根据权利要求1所述降解多环芳烃的菌株，其特征在于所述菌株具有以多环芳烃为唯一碳源和能源进行生长的能力。
3.根据权利要求1所述降解多环芳烃菌株，其特征在于所述菌株在多环芳烃土壤中具有良好的降解多环芳烃的能力。
4.根据权利要求1所述降解多环芳烃的菌株，其特征在于所述菌株的ITS序列如SEQ NO.1所示。
5.根据权利要求1所述降解多环芳烃的菌株，其特征在于所述多环芳烃选自萘、菲、荧蒽、芘、苯并蒽、苯并芘的的一种或多种的混合物。
6.根据权利要求1所述降解多环芳烃的菌株在多环芳烃污染的土壤的生物修复中的应用。
7.根据权利要求1所述降解多环芳烃的菌株与表面活性剂协同作用在快速降解土壤中多环芳烃中的应用。
8.利用权利要求1所述降解多环芳烃的菌株进行土壤生物修复的方法，其特征在于该方法由以下步骤组成选取多环芳烃污染土壤100g，tzyx3按质量百分比2. 0%用量与土壤混合均匀，表面活性剂加入量为污染土壤的干重的O. 1%，加水使土壤含水率保持在15%，放入恒温振荡器中，控制培养温度在25°C的恒温条件下，振荡培养修复15天。
9.根据权利要求8所述降解多环芳烃的菌株进行土壤生物修复的方法，其特征在于所述表面活性剂选自腐植酸、鼠李糖脂、Triton X-100、Tween80、β-环糊精中的一种。
全文摘要
本发明属于环境工程和微生物工程技术领域。尤其涉及一株降解多环芳烃的解脂耶氏酵母菌(Yarrowia lipolytica)tzyx3及其与表面活性剂协同在土壤修复中的应用。该菌株为解脂耶氏酵母菌(Yarrowia lipolytica)tzyx3，在中国典型培养物保藏中心的保藏号为CCTCC NOM 2012241，具备降解多环芳烃的能力。该菌株与表面活性剂发挥协同作用，在治理多环芳烃污染土壤中可以应用。
文档编号B09C1/10GK102994404SQ20121038716
公开日2013年3月27日 申请日期2012年10月12日 优先权日2012年10月12日
发明者张昕欣, 于红艳, 奚立民 申请人:台州职业技术学院