一种菊苣酸印迹整体柱的制备方法与流程

本发明涉及一种菊苣酸印迹整体柱的制备方法，该印迹聚合物对菊苣酸表现出良好的选择性，可用于菊苣酸的分离纯化。

背景技术：

菊苣酸是菊苣茎叶中一种重要的免疫活性成分之一，近年来药理研究表明，菊苣酸具有增强免疫功能和抗炎作用，并能抑制透明质酸酶，保护胶原蛋白免受可致降解的自由基的影响，还具有抑制hiv1和hiv2整合酶，促进胰岛素释放的作用，因此，菊苣酸具有很大的药用价值，市场上对菊苣酸需求量大。

目前，传统提取分离以及制备纯化菊苣酸的方法主要有：超临界co2萃取法、大孔树脂法、逆流色谱法等。cn102060706a报道了通过超临界co2萃取法对乙醇提紫锥菊进行萃取，后加盐分散，碱化，用阴离子交换树脂和阳离子树脂柱洗脱，洗脱液经浓缩、干燥得到菊苣酸，这种方法虽然能得到纯度较大的菊苣酸，但是操作繁琐。cn103641716a报道了紫锥菊经超声波提取、真空减压浓缩、大孔树脂上样、去离子水冲洗、洗脱、真空减压浓缩等过程后得到纯度为22％的菊苣酸，得到的仅为菊苣酸粗体物，不能达到药用要求。cn101148410a报道了通过乙醇提取、大孔树脂吸附洗脱、高速逆流色谱纯化得到纯度较大的菊苣酸，但是工艺复杂。综上所述，传统的工艺存在着条件苛刻、成本高、周期长、选择性小等缺点。因此，一种简单、廉价、快速的纯化方法尤为重要。

分子印迹是一种基于“锁钥原理”，通过模仿生物细胞中酶-底物或抗体-抗原之间的相互作用，人工合成的具有特异选择性的新兴技术材料。分子印迹的方法十分简单，并且易于操作，实际工作中需要用的原料有：功能单体，模板，致孔剂以及交联剂等。在一定的条件下(如低温光照或加热)引发聚合反应，最后再用如萃取或经酸水解的方法将分子模板去除。这样便得到了在三维空间上与模板分子完全匹配并对其有很好选择性的空穴，从而可以在一定的基质中将模板分子富集。固相萃取(spe)是利用固体吸附剂将液体样品中的目标化合物吸附，与样品的基体和干扰化合物分离，然后再用洗脱液洗脱，达到分离和富集目标化合物的分离纯化技术。另外，分子印迹材料具有良好的亲和性和专一的选择性，耐受高温、高压、酸碱和有机溶剂，制备简便易于保存，因此已经在固相萃取、色谱分离分析、膜分离、模拟酶、仿生传感器等方面得到了广泛的应用。

但菊苣酸分子的特殊结构造成该分子能形成分子内氢键，这种作用与该模板分子与功能单体间的相互作用形成竞争，往往消弱制备的分子印迹聚合物的识别性能，降低其实际应用的效果。例如，saad等人在”preparationandapplicationofmolecularlyimprintedpolymerforisolationofchicoricacidfromchicoriumintybusl..medicinalplant”(analyticachimicaacta.2015,877:80-89.)以菊苣酸(ca)为模板分子，4-乙烯基吡啶(4-vp)为功能单体，乙二醇二甲基丙烯酸酯(edma)为交联剂，且模板分子，功能单体和交联剂的摩尔比为1:4:20，采用本体和沉淀聚合聚合，合成了ca分子印迹聚合物，从菊苣酸的类似物中选择性分离出菊苣酸，但是并没有从粗体物中得到纯品菊苣酸。因此合成选择性高的菊苣酸印迹聚合物是一个分离实际样品中的重要挑战。

技术实现要素：

本发明的目在于，提供一种菊苣酸印迹整体柱的制备方法，该方法以菊苣酸为模板分子，同时加入金属离子为醋酸锌或醋酸钴，以n,n-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜和1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐做致孔剂，再加入功能单体、交联剂和引发剂，然后超声溶解除去溶解氧并引发反应，最后得到具有高选择性的菊苣酸分子印迹整体柱。本发明所述方法模板消耗量少，大大地降低了菊苣酸的印迹成本。在不锈钢柱管中成功合成了菊苣酸印迹整体柱，以及空白对照柱并进行色谱性能优化。实验结果表明，印迹因子最高可达24.81。该方法制备简单，且高分子聚合物耐用性好，为菊苣酸的分离纯化(纯度高于98.5％)提供了一种节约成本的方法。

本发明所述的一种菊苣酸印迹整体柱的制备方法，按下列步骤进行：

a、将1.19-23.72mg菊苣酸和2.30-18.35mg的金属离子为醋酸锌或醋酸钴溶解于240μl的n,n-二甲基甲酰胺，1200μl的二甲基亚砜和2468μl的1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐中，然后加入452-1118μl的二甲基丙烯酸乙二醇酯和64μl的4-乙烯基吡啶，再加入20mg的自由基引发剂偶氮二异丁腈，超声10-20分钟，除去溶解中的氧气，待溶液完全混匀后，将溶液转移至长100mm，直径4.6mm的不锈钢柱中，快速将不锈钢柱的两端封住，在温度60℃恒温水浴中反应18小时；

b、将不锈钢柱从水浴锅中取出，装上柱头，连接在高压输液泵上，以体积比9:1的甲醇-乙酸150-200ml的混合液冲洗整体柱，流速为1.0ml/min，冲洗完毕后即得到菊苣酸印迹整体柱。

步骤a中加入的金属离子为醋酸锌。

本发明所述的一种菊苣酸印迹整体柱的制备方法，该方法通过整体柱的色谱性能评价，测得相比于空白对照柱，菊苣酸印迹整体柱对菊苣酸的保留性能较强；实验结果表明，印迹因子最高可达24.81，本发明可用于菊苣酸的分离纯化(纯度高于98.5％)。

附图说明

图1为本发明菊苣酸在以醋酸锌为金属离子的菊苣酸印迹整体柱及其空白对照柱上的不同色谱行为，其中1为空白对照柱子，2为菊苣酸印迹整体柱；

图2为本发明菊苣酸在以醋酸钴为金属离子的菊苣酸印迹整体柱及其空白对照柱上的不同色谱行为，其中1为空白对照柱子，2为菊苣酸印迹整体柱；

图3为本发明在以醋酸锌为金属离子的菊苣酸印迹整体柱上菊苣酸与其类似物的色谱保留图，其中1为咖啡酸，2为绿原酸，3为隐绿原酸，4为柯里拉京，5为4,5-二咖啡酰奎宁酸，6为菊苣酸；

图4为本发明在以醋酸锌为金属离子的空白对照柱上菊苣酸与其类似物的色谱保留图，其中1为咖啡酸，2为绿原酸，3为隐绿原酸，4为4,5-二咖啡酰奎宁酸，5为柯里拉京，6为菊苣酸。

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步详细阐述本发明。

实施例1

原位聚合法制备菊苣酸印迹整体柱：

a、将11.86mg菊苣酸和9.18mg的金属离子为醋酸锌溶解于240μl的n,n-二甲基甲酰胺，1200μl的二甲基亚砜和2468μl的1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐中，然后加入745μl的二甲基丙烯酸乙二醇酯和64μl的4-乙烯基吡啶，再加入20mg的自由基引发剂偶氮二异丁腈，超声10分钟，除去溶解中的氧气，待溶液完全混匀后，将溶液转移至长100mm，直径4.6mm的不锈钢柱中，快速将不锈钢柱的两端封住，在温度60℃恒温水浴中反应18小时；

b、将不锈钢柱从水浴锅中取出，装上柱头，连接在高压输液泵上，以体积比9:1的甲醇-乙酸150ml的混合液冲洗整体柱，流速为1.0ml/min，冲洗完毕后即得到菊苣酸印迹整体柱。

用高效液相色谱法对菊苣酸印迹整体柱进行色谱性能评价：设置紫外吸收波长326nm，流速为1.0ml/min，柱温25℃，用体积比9:1的乙腈-乙酸缓冲盐(ph3.6,200mmol/l)将菊苣酸印迹整体柱冲洗至基线水平，进样，测定菊苣酸在印迹柱上的保留时间tr，用千分之一的丙酮来标定柱子的死时间t0，根据公式分别k＝(tr-t0)/t0，计算得菊苣酸在印迹柱保留因子达到27.30。

实施例2

原位聚合法制备菊苣酸印迹整体柱：

a、将11.86mg菊苣酸和9.18mg的金属离子为醋酸锌溶解于240μl的n,n-二甲基甲酰胺，1200μl的二甲基亚砜和2468μl的1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐中，然后加入560μl的二甲基丙烯酸乙二醇酯和64μl的4-乙烯基吡啶，再加入20mg的自由基引发剂偶氮二异丁腈，超声15分钟，除去溶解中的氧气，待溶液完全混匀后，将溶液转移至长100mm，直径4.6mm的不锈钢柱中，快速将不锈钢柱的两端封住，在温度60℃恒温水浴中反应18小时；

b、将不锈钢柱从水浴锅中取出，装上柱头，连接在高压输液泵上，以体积比9:1的甲醇-乙酸200ml的混合液冲洗整体柱，流速为1.0ml/min，冲洗完毕后即得到菊苣酸印迹整体柱。

用高效液相色谱法对菊苣酸印迹整体柱进行色谱性能评价：设置紫外吸收波长326nm，流速为1.0ml/min，柱温25℃，用体积比9:1的乙腈-乙酸缓冲盐(ph3.6,200mmol/l)将菊苣酸印迹整体柱冲洗至基线水平，进样，测定菊苣酸在印迹柱上的保留时间tr，用千分之一的丙酮来标定柱子的死时间t0，根据公式分别k＝(tr-t0)/t0，计算得菊苣酸在印迹柱保留因子达到24.46。

实施例3

原位聚合法制备菊苣酸印迹整体柱：

a、将11.86mg菊苣酸和9.18mg的金属离子为醋酸锌溶解于240μl的n,n-二甲基甲酰胺，1200μl的二甲基亚砜和2468μl的1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐中，然后加入452μl的二甲基丙烯酸乙二醇酯和64μl的4-乙烯基吡啶，最后再加入20mg的自由基引发剂偶氮二异丁腈，超声20分钟，除去溶解在其中的氧气，待溶液完全混匀后，将溶液转移至不锈钢柱(长100mm，直径4.6mm)中，快速封住不锈钢柱的两端，在温度60℃恒温水浴中反应18小时；

b、将合成的不锈钢柱从水浴锅中取出，装上柱头，连接在高压输液泵上，以体积比9:1的甲醇-乙酸160ml的混合液冲洗整体柱，流速为1.0ml/min，冲洗完毕后即可得到菊苣酸印迹整体柱。

用高效液相色谱法对菊苣酸印迹整体柱进行色谱性能评价：设置紫外吸收波长326nm，流速为1.0ml/min，柱温25℃，用体积比9:1的乙腈-乙酸缓冲盐(ph3.6,200mmol/l)将菊苣酸印迹整体柱冲洗至基线水平，进样，测定菊苣酸在印迹柱上的保留时间tr，用千分之一的丙酮来标定柱子的死时间t0，根据公式分别k＝(tr-t0)/t0，计算得菊苣酸在印迹柱保留因子达到29.83。

实施例4

原位聚合法制备菊苣酸印迹整体柱：

a、将11.86mg菊苣酸和9.18mg的金属离子为醋酸锌溶解于240μl的n,n-二甲基甲酰胺，1200μl的二甲基亚砜和2468μl的1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐中，然后加入1118μl的二甲基丙烯酸乙二醇酯和64μl的4-乙烯基吡啶，最后再加入20mg的自由基引发剂偶氮二异丁腈，超声20分钟，除去溶解在其中的氧气，待溶液完全混匀后，将溶液转移至不锈钢柱(长100mm，直径4.6mm)中，快速封住不锈钢柱的两端，在温度60℃恒温水浴中反应18小时；

b、将合成的不锈钢柱从水浴锅中取出，装上柱头，连接在高压输液泵上，以体积比9:1的甲醇-乙酸160ml的混合液冲洗整体柱，流速为1.0ml/min，冲洗完毕后即可得到菊苣酸印迹整体柱。

用高效液相色谱法对菊苣酸印迹整体柱进行色谱性能评价：设置紫外吸收波长326nm，流速为1.0ml/min，柱温25℃，用体积比9:1的乙腈-乙酸缓冲盐(ph3.6,200mmol/l)将菊苣酸印迹整体柱冲洗至基线水平，进样，测定菊苣酸在印迹柱上的保留时间tr，用千分之一的丙酮来标定柱子的死时间t0，根据公式分别k＝(tr-t0)/t0，计算得菊苣酸在印迹柱保留因子达到13.43。

实施例5

原位聚合法制备菊苣酸印迹整体柱：

a、将11.86mg菊苣酸和4.59mg的金属离子醋酸锌溶解于240μl的n,n-二甲基甲酰胺，1200μl的二甲基亚砜和2468μl的1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐中，然后加入745μl的二甲基丙烯酸乙二醇酯和64μl的4-乙烯基吡啶，最后再加入20mg的自由基引发剂偶氮二异丁腈，超声15分钟，除去溶解在其中的氧气，待溶液完全混匀后，将溶液转移至不锈钢柱(长100mm，直径4.6mm)中，快速封住不锈钢柱的两端，在温度60℃恒温水浴中反应18小时；

b、将合成的不锈钢柱从水浴锅中取出，装上柱头，连接在高压输液泵上，以体积比9:1的甲醇-乙酸180ml的混合液冲洗整体柱，流速为1.0ml/min，冲洗完毕后即可得到菊苣酸印迹整体柱。

用高效液相色谱法对菊苣酸印迹整体柱进行色谱性能评价：设置紫外吸收波长326nm，流速为1.0ml/min，柱温25℃，用体积比9:1的乙腈-乙酸缓冲盐(ph3.6,200mmol/l)将菊苣酸印迹整体柱冲洗至基线水平，进样，测定菊苣酸在印迹柱上的保留时间tr。用千分之一的丙酮来标定柱子的死时间t0，根据公式分别k＝(tr-t0)/t0，计算得菊苣酸在印迹柱保留因子达到18.61。

实施例6

原位聚合法制备菊苣酸印迹整体柱：

a、将11.86mg菊苣酸和2.30mg的金属离子醋酸钴溶解于240μl的n,n-二甲基甲酰胺，1200μl的二甲基亚砜和2468μl的1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐中，然后加入745μl的二甲基丙烯酸乙二醇酯和64μl的4-乙烯基吡啶，最后再加入20mg的自由基引发剂偶氮二异丁腈，超声10-20分钟，除去溶解在其中的氧气，待溶液完全混匀后，将溶液转移至不锈钢柱(长100mm，直径4.6mm)中，快速封住不锈钢柱的两端，在温度60℃恒温水浴中反应18小时；

b、将合成的不锈钢柱从水浴锅中取出，装上柱头，连接在高压输液泵上，以体积比9:1的甲醇-乙酸200ml的混合液冲洗整体柱，流速为1.0ml/min，冲洗完毕后即可得到菊苣酸印迹整体柱。

用高效液相色谱法对菊苣酸印迹整体柱进行色谱性能评价：设置紫外吸收波长326nm，流速为1.0ml/min，柱温25℃，用体积比9:1的乙腈-乙酸缓冲盐(ph3.6,200mmol/l)将菊苣酸印迹整体柱冲洗至基线水平，进样，测定菊苣酸在印迹柱上的保留时间tr。用千分之一的丙酮来标定柱子的死时间t0，根据公式分别k＝(tr-t0)/t0，计算得菊苣酸在印迹柱保留因子达到22.88。

实施例7

原位聚合法制备菊苣酸印迹整体柱：

a、将11.86mg菊苣酸和18.35mg的金属离子为醋酸锌溶解于240μl的n,n-二甲基甲酰胺，1200μl的二甲基亚砜和2468μl的1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐中，然后加入745μl的二甲基丙烯酸乙二醇酯和64μl的4-乙烯基吡啶，最后再加入20mg的自由基引发剂偶氮二异丁腈，超声10-20分钟，除去溶解在其中的氧气，待溶液完全混匀后，将溶液转移至不锈钢柱(长100mm，直径4.6mm)中，快速封住不锈钢柱的两端，在温度60℃恒温水浴中反应18小时；

b、将合成的不锈钢柱从水浴锅中取出，装上柱头，连接在高压输液泵上，以体积比9:1的甲醇-乙酸190ml的混合液冲洗整体柱，流速为1.0ml/min，冲洗完毕后即可得到菊苣酸印迹整体柱。

用高效液相色谱法对菊苣酸印迹整体柱进行色谱性能评价：设置紫外吸收波长326nm，流速为1.0ml/min，柱温25℃，用体积比9:1的乙腈-乙酸缓冲盐(ph3.6,200mmol/l)将菊苣酸印迹整体柱冲洗至基线水平，进样，测定菊苣酸在印迹柱上的保留时间tr。用千分之一的丙酮来标定柱子的死时间t0，根据公式分别k＝(tr-t0)/t0，计算得菊苣酸在印迹柱保留因子达到16.34。

实施例8

原位聚合法制备菊苣酸印迹整体柱：

a、将11.86mg菊苣酸和5.90mg的金属离子为醋酸钴溶解于240μl的n,n-二甲基甲酰胺，1200μl的二甲基亚砜和2468μl的1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐中，然后加入745μl的二甲基丙烯酸乙二醇酯和64μl的4-乙烯基吡啶，再加入20mg的自由基引发剂偶氮二异丁腈，超声10分钟，除去溶解中的氧气，待溶液完全混匀后，将溶液转移至长100mm，直径4.6mm的不锈钢柱中，快速将不锈钢柱的两端封住，在温度60℃恒温水浴中反应18小时；

b、将不锈钢柱从水浴锅中取出，装上柱头，连接在高压输液泵上，以体积比9:1的甲醇-乙酸150ml的混合液冲洗整体柱，流速为1.0ml/min，冲洗完毕后即得到菊苣酸印迹整体柱。

用高效液相色谱法对菊苣酸印迹整体柱进行色谱性能评价：设置紫外吸收波长326nm，流速为1.0ml/min，柱温25℃，用体积比9:1的乙腈-乙酸缓冲盐(ph3.6,200mmol/l)将菊苣酸印迹整体柱冲洗至基线水平，进样，测定菊苣酸在印迹柱上的保留时间tr，用千分之一的丙酮来标定柱子的死时间t0，根据公式分别k＝(tr-t0)/t0，计算得菊苣酸在印迹柱保留因子达到3.41。

实施例9

原位聚合法制备菊苣酸印迹整体柱：

a、将1.19mg菊苣酸和9.18mg的金属离子为醋酸锌溶解于240μl的n,n-二甲基甲酰胺，1200μl的二甲基亚砜和2468μl的1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐中，然后加入745μl的二甲基丙烯酸乙二醇酯和64μl的4-乙烯基吡啶，再加入20mg的自由基引发剂偶氮二异丁腈，超声10分钟，除去溶解中的氧气，待溶液完全混匀后，将溶液转移至长100mm，直径4.6mm的不锈钢柱中，快速将不锈钢柱的两端封住，在温度60℃恒温水浴中反应18小时；

b、将不锈钢柱从水浴锅中取出，装上柱头，连接在高压输液泵上，以体积比9:1的甲醇-乙酸150ml的混合液冲洗整体柱，流速为1.0ml/min，冲洗完毕后即得到菊苣酸印迹整体柱。

用高效液相色谱法对菊苣酸印迹整体柱进行色谱性能评价：设置紫外吸收波长326nm，流速为1.0ml/min，柱温25℃，用体积比9:1的乙腈-乙酸缓冲盐(ph3.6,200mmol/l)将菊苣酸印迹整体柱冲洗至基线水平，进样，测定菊苣酸在印迹柱上的保留时间tr，用千分之一的丙酮来标定柱子的死时间t0，根据公式分别k＝(tr-t0)/t0，计算得菊苣酸在印迹柱保留因子达到1.20。

实施例10

原位聚合法制备菊苣酸印迹整体柱：

a、将23.72mg菊苣酸和9.18mg的金属离子为醋酸锌溶解于240μl的n,n-二甲基甲酰胺，1200μl的二甲基亚砜和2468μl的1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐中，然后加入745μl的二甲基丙烯酸乙二醇酯和64μl的4-乙烯基吡啶，再加入20mg的自由基引发剂偶氮二异丁腈，超声10分钟，除去溶解中的氧气，待溶液完全混匀后，将溶液转移至长100mm，直径4.6mm的不锈钢柱中，快速将不锈钢柱的两端封住，在温度60℃恒温水浴中反应18小时；

b、将不锈钢柱从水浴锅中取出，装上柱头，连接在高压输液泵上，以体积比9:1的甲醇-乙酸150ml的混合液冲洗整体柱，流速为1.0ml/min，冲洗完毕后即得到菊苣酸印迹整体柱。

用高效液相色谱法对菊苣酸印迹整体柱进行色谱性能评价：设置紫外吸收波长326nm，流速为1.0ml/min，柱温25℃，用体积比9:1的乙腈-乙酸缓冲盐(ph3.6,200mmol/l)将菊苣酸印迹整体柱冲洗至基线水平，进样，测定菊苣酸在印迹柱上的保留时间tr，用千分之一的丙酮来标定柱子的死时间t0，根据公式分别k＝(tr-t0)/t0，计算得菊苣酸在印迹柱保留因子达到9.77。

实施例11

原位聚合法制备菊苣酸印迹整体柱：

a、将5.93mg菊苣酸和9.18mg的金属离子为醋酸锌溶解于240μl的n,n-二甲基甲酰胺，1200μl的二甲基亚砜和2468μl的1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐中，然后加入745μl的二甲基丙烯酸乙二醇酯和64μl的4-乙烯基吡啶，再加入20mg的自由基引发剂偶氮二异丁腈，超声10分钟，除去溶解中的氧气，待溶液完全混匀后，将溶液转移至长100mm，直径4.6mm的不锈钢柱中，快速将不锈钢柱的两端封住，在温度60℃恒温水浴中反应18小时；

b、将不锈钢柱从水浴锅中取出，装上柱头，连接在高压输液泵上，以体积比9:1的甲醇-乙酸150ml的混合液冲洗整体柱，流速为1.0ml/min，冲洗完毕后即得到菊苣酸印迹整体柱。

用高效液相色谱法对菊苣酸印迹整体柱进行色谱性能评价：设置紫外吸收波长326nm，流速为1.0ml/min，柱温25℃，用体积比9:1的乙腈-乙酸缓冲盐(ph3.6,200mmol/l)将菊苣酸印迹整体柱冲洗至基线水平，进样，测定菊苣酸在印迹柱上的保留时间tr，用千分之一的丙酮来标定柱子的死时间t0，根据公式分别k＝(tr-t0)/t0，计算得菊苣酸在印迹柱保留因子达到7.19。

实施例12

原位聚合法制备菊苣酸空白对照整体柱：

a、将9.18mg的金属离子为醋酸锌溶解于240μl的n,n-二甲基甲酰胺，1200μl的二甲基亚砜和2468μl的1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐中，然后加入745μl的二甲基丙烯酸乙二醇酯和64μl的4-乙烯基吡啶，最后再加入20mg的自由基引发剂偶氮二异丁腈，超声10-20分钟，除去溶解在其中的氧气，待溶液完全混匀后，将溶液转移至不锈钢柱(长100mm，直径4.6mm)中，快速封住不锈钢柱的两端，在温度60℃恒温水浴中反应18小时；

b、将合成的不锈钢柱从水浴锅中取出，装上柱头，连接在高压输液泵上，以体积比9:1的甲醇-乙酸150-200ml的混合液冲洗整体柱，流速为1.0ml/min，冲洗完毕后即可得到菊苣酸印迹整体柱。

用高效液相色谱法对空白对照整体柱整体柱进行色谱性能评价：设置紫外吸收波长326nm，流速为1.0ml/min，柱温25℃，用乙腈-乙酸缓冲盐(ph3.6,200mmol/l)(9:1,v/v)将菊苣酸印迹整体柱冲洗至基线水平，进样，测定菊苣酸在印迹柱上的保留时间tr。用千分之一的丙酮来标定柱子的死时间t0，根据公式分别k＝(tr-t0)/t0，计算得菊苣酸在空白对照整体柱保留因子达到1.10,低于菊苣酸印迹柱上的保留值，表明在少量模板的存在下，菊苣酸被成功印迹，印迹因子通过公式if＝kmip/knip计算，达到了24.81，印迹效果展现于图1。

实施例13

菊苣酸印迹整体柱及其空白对照柱的选择性能评价：

菊苣酸印迹整体柱选择性能评价：设置紫外吸收波长326nm，流速为1.0ml/min，柱温25℃，用乙腈-乙酸缓冲盐(ph3.6,200mmol/l)(9:1,v/v)将菊苣酸印迹整体柱冲洗至基线水平，分别进样绿原酸，隐绿原酸，咖啡酸，4,5-二咖啡酰奎宁酸，柯里拉京，得到菊苣酸的类似物在印迹整体柱上的色谱图，如图2所示，菊苣酸印迹整体柱对菊苣酸的保留较强，可以实现菊苣酸与其结构类似物的有效分离；

空白对照柱选择性能评价：设置紫外吸收波长326nm，流速为1.0ml/min，柱温25℃，用乙腈-乙酸缓冲盐(ph3.6,200mmol/l)(9:1,v/v)将菊苣酸印迹整体柱冲洗至基线水平，分别进样绿原酸，隐绿原酸，咖啡酸，4,5-二咖啡酰奎宁酸，柯里拉京，得到菊苣酸的类似物在印迹整体柱上的色谱图，如图3所示，空白对照整体柱柱不能实现菊苣酸与其结构类似物有效分离。